冯志华
- 作品数：10 被引量：41H指数：3
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株抑制消减cDNA文库的构建被引量：2
- 2008年
- 背景与目的已有的研究表明,nm23-H1基因是一个重要的肺癌转移抑制基因,为了筛选与该基因表达相关的差异表达基因,本研究拟构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)差异表达基因的抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆与nm23-H1转移相关的基因奠定基础。方法利用抑制消减杂交(suppressive subtractive hybridization,SSH)技术构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)间差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库,经蓝白菌落筛选克隆,并PCR反应鉴定。结果成功构建了该两株细胞株差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库。经蓝白菌落筛选,正向消减文库总共获得约300个白斑克隆,反向消减文库总共获得约400个白斑克隆,从正反向消减文库中各挑选96个克隆进行PCR扩增检测是否有插入片段,结果显示在挑选的正向文库中有84个克隆有插入片段,反向文库中有83个克隆有插入片段,其片段大小范围为(300-750)bp。结论抑制消减杂交是克隆差异表达基因的有效方法,我们应用SSH法和T/A克隆技术成功建立了nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)差异表达基因的抑制消减cDNA文库。nm23-H1基因在肺癌细胞中的表达可能影响某些转移相关基因的差异表达。
- 叶苏娟冯志华朱文蔡春季李潞孙丽亚万海粟马力周清华
- 关键词：肺肿瘤NM23-H1基因抑制消减杂交CDNA文库转移相关基因
- 高转移和低转移人大细胞肺癌细胞株的比较蛋白组学研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨比较人高转移大细胞肺癌细胞株(L9981)和人低转移大细胞肺癌细胞株(NL9980))间蛋白质表达的差异。方法采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离L9981细胞株和NL9980细胞株的总蛋白,用图像分析软件比较分析细胞间的差异表达蛋白质。对13个差异表达的蛋白质点通过胶内酶解,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALD-TOF-MS/MS)和蛋白质数据库检索进行鉴定。结果经ImageMaster软件分析后发现有8个蛋白质点仅在L9981中检测到有表达,8个蛋白质点仅在NL9980中检测到有表达,发现19个蛋白质点在两种肺癌细胞株中均存在,其中9个蛋白质点在L9981中表达量显著高于NL9980,10个蛋白质点在NL9980中表达量显著高于L9981(P<0.05)。通过对差异明显的蛋白质点进行质谱鉴定和蛋白质数据库查询,发现线粒体热休克蛋白和谷胱甘肽合成酶在L9981中的表达被上调,P47蛋白、免疫球蛋白重链可变区、烯醇化酶1和真核翻译起始因子3在L9981中的表达被下调,丙酮酸激酶仅在L9981中有表达,WD-40重复蛋白仅在NL9980中有表达。结论人高、低转移大细胞肺癌细胞株蛋白质组的表达存在明显差异,鉴定的差异蛋白质多与肿瘤的侵袭转移相关,这些差异蛋白质有可能为进一步发现与肺癌转移相关的分子标志物和阐明肺癌转移的分子机制提供线索。
- 高利伟朱文冯志华安宁
- 关键词：比较蛋白质组学肺癌转移
- 肺癌转移抑制相关基因研究进展
- 2007年
- 肺癌是发病率和死亡率增长最快、对人类健康威胁最大的恶性肿瘤之一。侵袭转移是肺癌患者死亡的首要原因。研究表明,在肺癌中发挥转移抑制作用的相关基因主要有nm23、KAI1、TIMP、Cadherin以及MRP-1等。
- 冯志华朱文
- 关键词：肺癌基因
- FUS1/hIL-12双基因阳离子脂质体复合物特性研究
- 2010年
- 研究FUS1/hIL-12双基因阳离子脂质体复合物的生物学和药剂学特性,评估其作为肺癌基因治疗药物的转染效率、稳定性以及毒性。阳离子脂质体与质粒以不同质量比配制后用凝胶阻滞实验和激光粒度仪测定粒径和zeta电位确定阳离子脂质体与质粒DNA的最佳配比;通过分别转染增强型绿色荧光蛋白质粒EGFP和PVITO2-hIL12/FUS1双基因质粒入A549肺癌细胞,倒置荧光显微镜、细胞爬片免疫组化和酶联免疫法分别检测EGFP、FUS1和hIL-12在肺癌细胞中的表达;以琼脂糖凝胶电泳检测双基因脂质体复合物与血清和DNaseⅠ孵育的稳定性;通过双基因脂质体复合物与红细胞孵育后显微镜观察其对红细胞形态的影响。研究结果为将来FUS1/hIL-12双基因阳离子脂质体复合物用于肺癌的基因治疗奠定了基础。
- 余川江肖雯婧张冬梅欧文婧冯志华朱文
- 关键词：阳离子脂质体肺癌基因治疗
- NM23-H1基因调控肺癌侵袭转移相关基因的研究被引量：3
- 2010年
- 目的研究与NM23-H1基因有关的肺癌侵袭转移相关基因。方法在抑制消减cDNA文库的基础上制备基因表达谱芯片。经芯片杂交、克隆测序及同源性分析得到人大细胞肺癌细胞株L9981和L9981-nm23-H1各差异表达基因的信息,再以实时荧光定量PCR技术对筛选出的差异基因作进一步的验证。结果成功制备了人大细胞肺癌细胞株L9981和L9981-nm23-H1差异表达基因的基因表达谱芯片。经测序及同源性分析发现19个差异表达基因。经荧光定量PCR验证发现转染NM23-H1后,L9981细胞中PSMA7、SBDS、ODC1、YARS、CSDA、PTP4A1、SHPRH和TOMM7 8个基因的mRNA表达上调,PKM2和GMNN基因的mRNA表达下调。结论 NM23-H1基因可能为转移相关的上游调节基因,它可通过对下游一系列基因进行调节而实现对肺癌转移潜能的抑制作用。
- 蔡春季叶苏娟朱文孙丽亚万海粟冯志华马力李璐
- 关键词：肺癌NM23-H1基因差异表达基因
- FUS1和IL-12双基因真核共表达质粒的构建及对A549细胞促凋亡作用研究被引量：2
- 2009年
- 目的构建FUS1和人IL-12双基因真核共表达质粒并在肺癌A549细胞中检测基因表达及诱导细胞凋亡作用。方法采用RT-PCR技术从人肺成纤维细胞MRC-5中逆转录扩增全长FUS1基因,通过PCR技术从pORF-hIL-12质粒中扩增含双亚基的全长IL-12基因。FUS1和IL-12分别经酶切后定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2的多克隆位点中,酶切和测序鉴定双基因共表达质粒pVITRO2-FUS1-IL-12的构建。以pVITRO2-FUS1-IL-12转染肺癌A549细胞,通过RT-PCR、ELISA和Western blot方法检测目的基因的表达,以Hoechst33258染色及流式细胞术验证pVITRO2-FUS1-IL-12在体外的促凋亡作用。结果酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达质粒pVITRO2-FUS1-IL-12,在转染后的细胞中同时检测到了FUS1和IL-12的表达,两种基因在双基因表达载体上的表达量基本不受影响。双基因共表达质粒pVITRO2-FUS1-IL-12具有明显诱导肺癌细胞凋亡的作用。结论成功构建pVITRO2-FUS1-IL-12双基因真核共表达质粒,为肺癌的多基因联合治疗提供了又一新的思路和方法。
- 张冬梅杨寒朔朱文冯志华邓洪新魏于全
- 关键词：肺癌IL-12联合基因治疗
- Matrigel胶的肺腺癌细胞株A549体外三维培养的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究肺腺癌细胞株A549三维体系培养及其细胞行为的改变。方法对三维培养基质Matrigel水凝胶进行材料表征,研究其纳米纤维网络的形成。观察细胞在三维环境中的克隆形成,形貌及存活力,并检测了细胞形成克隆后的药敏性,同时比较二维及三维培养的细胞对胞外基质蛋白粘附率的差异。结果Matrigel胶形成了类似于体内胞外基质的纳米纤维网络结构。在Matrigel胶中,A549细胞生长呈现出球形的多细胞克隆,生长状态均较好,与材料具有较好的生物相容性。随着克隆的增长,细胞对外界刺激的抵抗性及抗药性增加,药敏性降低。二维和三维培养下的A549细胞对不同的胞外基质蛋白的粘附率存在显著差异。结论细胞在Matrigel胶三维培养中,细胞的生长,形貌,存活力,药敏性及粘附性等细胞行为与二维培养的细胞具有显著性的差异,可为抗药性研究及细胞信号通路的研究等提供研究基础。
- 冯志华米坤
- 关键词：肺腺癌细胞
- GSTM1和CYP2E1基因多态性与肺癌遗传易感性关系的研究被引量：21
- 2005年
- 背景与目的 肺癌是中国人群恶性肿瘤死因的首位,其发病可能与肺癌人群中某些肺癌相关基 因的遗传多态性有关。本研究旨在探讨细胞色素P4502E1(CYP2E1)基因RsaⅠ/PstⅠ多态性和谷胱甘肽转 移酶M1(GSTM1)基因多态性与肺癌易感性之间是否存在相关性。方法 应用PCR RFLP和PCR法检测 99例人非小细胞肺癌患者和66例同期住院的肺良性疾病患者CYP2E1基因的RsaⅠ/PstⅠ多态性和 GSTM1基因多态性,并分析其与肺癌遗传易感性的相关性。结果 (1)CYP2E1基因RsaⅠ/PstⅠ多态性的 三种基因型在肺癌组和对照组的频率差异没有统计学意义(χ2=1.374,P=0.241)。(2)肺癌组GSTM1(-) 基因型频率显著高于对照组(分别为57.6%和40.9%)(χ2=4.401,P=0.036)。(3)携带GSTM1(-)基因型 的个体患肺癌的危险性显著高于GSTM1(+)基因型的个体(OR=1.96,95%CI=1.042～3.689,P= 0.037)。(4)与携带c1/c2或c2/c2基因型的不吸烟个体比较,携带c1/c1基因型的吸烟者患肺癌的风险显著 增加(OR=3.525,95%CI=1.168～10.638,P=0.025)。(5)联合分析CYP2E1基因RsaⅠ/PstⅠ多态性和 GSTM1基因多态性,携带有c1/c1和GSTM1(-)基因型的个体患肺癌的风险显著高于携带GSTM1(+)和 c1/c2或c2/c2基因型的个体(OR=3.
- 李代蓉周清华袁天柱郭占林朱文王艳萍陈晓禾冯志华车国卫
- 关键词：CYP2E1GSTM1基因多态性肺肿瘤
- 人参皂苷Rg3对肺癌细胞蛋白表达的影响研究被引量：10
- 2008年
- 背景与目的肺癌是对人类健康和生命危害最大的恶性肿瘤。肺癌转移是肺癌的恶性标志和特征,也是肺癌病人治疗失败和死亡的主要原因。人参皂苷Rg3具有明显的抗肿瘤效应,该研究将应用双向凝胶电泳技术探讨人参皂苷Rg3抗肺癌侵袭转移分子作用机制。方法筛选人参皂苷Rg3作用于人肺巨细胞癌高转移细胞株的半抑制浓度(IC50),用0.1倍半抑制浓度(0.1×IC50)的Rg3溶液作用人肺巨细胞癌高转移细胞株95D72h,利用固相PH梯度双向凝胶电泳分离Rg3处理前后人肺巨细胞癌高转移细胞株95D的总蛋白,用图像分析软件比较分析Rg3处理前后细胞间的差异表达蛋白质。对15个差异表达的蛋白质点通过MALD-TOF-MS/MS,LC-MS/MS和蛋白质数据库检索进行鉴定。结果人参皂苷Rg3作用人肺巨细胞癌高转移细胞株95D的半抑制浓度为100μg/mL。有12个蛋白点仅在对照组细胞株中出现,有6个蛋白点仅在药物处理组出现;在对照组与药物处理组中都存在,但在对照组中高表达的蛋白点有7个,在药物处理组中高表达的蛋白点有2个。通过对差异明显的15个蛋白质点进行质谱鉴定和蛋白质数据库查询,发现氯离子通道蛋白1(Chloride intracellular channel protein1)、泛素结合酶E2-25Kda(Ubiquitin-Conjugating Enzyme E2-25Kda)等蛋白只在对照组有表达;14-3-3θ蛋白(14-3-3protein theta)、Ski作用蛋白(SKI-interacting protein)只在药物处理组有表达;膜联蛋白A2(annexin A2)、肌动蛋白结合蛋白Ⅱ同构体b(profilin 2 isoformb)等蛋白在对照组的表达量显著高于药物处理组;14-3-3ζ蛋白(14-3-3 protein zeta),真核翻译起始因子4H(Eukaryotic translation initiation factor 4H)在药物处理组的表达量显著高于对照组。结论该研究结果提示Rg3处理前后人肺巨细胞癌高转移细胞株蛋白质组的表达存在明显差异,鉴定的差异蛋白质多与肿瘤的侵袭转移相关。这些差异蛋白质有可能为�
- 安宁朱文冯志华叶苏娟余川江蔡春季
- 关键词：人参皂苷RG3蛋白质表达双向凝胶电泳质谱
- 人参皂苷Rg3抗肺癌侵袭转移分子作用机制
- 目的:肺癌是对人类健康和生命危害最大的恶性肿瘤。肺癌转移是肺癌的恶性标志和特征,也是肺癌病人治疗失败和死亡的主要原因。人参皂苷Rg3具有明显的抗肿瘤效应,该研究将应用双向凝胶电泳技术探讨人参皂苷Rg3抗肺癌侵袭转移分子作...
- 朱文安宁冯志华叶苏娟余川江蔡春季
- 关键词：人肺巨细胞癌双向凝胶电泳质谱
- 文献传递
