何飞
- 作品数：41 被引量：153H指数：8
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- 相关领域：医药卫生生物学哲学宗教更多>>
- 体外人牙髓细胞的连续培养被引量：13
- 2002年
- 目的 探讨体外连续培养过程中人恒牙牙髓细胞向成牙本质样细胞分化的可行性。方法 采用细胞连续培养、酶动力学法、透射电镜观察、免疫组化等方法 ,对体外人牙髓细胞在连续培养过程中的生物学特性进行研究。结果 部分人牙髓细胞在体外可以出现复层生长 ,形成细胞结节 ,并可进一步钙化 ;与成牙本质细胞相似 ,它们具有高碱性磷酸酶活性 ,可合成Ⅰ型胶原 ,其超微结构有许多与成牙本质细胞相似的特征 ,胞间基质中可见膜被基质小泡 ,某些基质小泡内含针状晶体。结论 体外连续培养的人牙髓细胞可向成牙本质细胞分化 ,此过程可作为研究体内牙髓损伤修复细胞增殖。
- 何飞谭颖徽杨峥嵘
- 关键词：牙髓细胞成牙本质细胞细胞分化细胞培养牙髓损伤
- 人Delta-like 1蛋白的表达及其对动员外周血CD34^+细胞的扩增作用被引量：1
- 2010年
- 构建pET32a(+)-hDll1DSL原核表达载体,表达、纯化hDll1DSL蛋白,观察其对动员外周血CD34+细胞的体外扩增作用。克隆hDll1DSL,构建pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体。转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白。RBP-j报告基因实验及Notch下游分子Hes1检测证实hDll1DSL活性。磁珠分选动员外周血CD34+细胞,加入hDll1DSL或联合SCF、FL、TPO孵育一周,观察体外扩增作用。结果表明:成功克隆hDll1DSL,并构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体。在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hDll1DSL融合蛋白,经镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hDll1DSL融合蛋白。配体活性实验显示,可溶性的Trx-hDll1DSL蛋白可以激活RBP-j报告基因,并且能上调Notch下游分子Hes1的表达,证明其能够激活Notch信号通路。此外,Trx-hDll1DSL融合蛋白与SCF、FL及TPO联用,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用。我们成功构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体,表达、纯化了具有生物学活性的Trx-hDll1DSL融合蛋白,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用,为造血干/祖细胞体外扩增体系的优化研究奠定了基础。
- 刘强郑瑾何飞李国辉黄斯勇郝淼旺梁英民
- 关键词：外周血CD34+细胞扩增作用细胞体外原核表达载体
- 小鼠CXCR4基因启动子的克隆和报告基因载体构建被引量：2
- 2009年
- 目的:克隆小鼠CXCR4基因启动子,并建立CX-CR4报告基因系统。方法:设计合成PCR引物,从小鼠基因组DNA中扩增并克隆小鼠CXCR4基因的启动子区。序列测定确认后,用克隆的启动子片段构建CXCR4荧光素酶报告基因载体pGL-CXCR4。转染细胞,用双报告基因系统检测报告基因载体的活性。结果:成功扩增了小鼠CXCR4基因的启动子区。克隆入质粒载体后经DNA序列测定证实了其序列。通过转染细胞和荧光素酶分析,证实所构建的报告基因可以反映CXCR4启动子的活性。结论:成功扩增、克隆了小鼠CXCR4基因启动子,并成功建立起其报告基因系统,为后续的研究奠定了基础。
- 王莉何飞王耀春
- 关键词：CXCR4基因启动子报告基因
- 重组小鼠凝血因子Ⅶ-pPIC9K表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达
- 2005年
- 目的:构建去除凝血功能,但保留TF亲和力的rmFⅦ-pPIC9K表达载体并用毕赤酵母表达目的蛋白。方法:通过RT-PCR自小鼠肝脏获得FⅦcDNA,对其进行定点突变后连入pPIC9K质粒,电击转化Gs115酵母细胞,经G418筛选、BMGY/BMMY小量摇瓶培养表达目的蛋白,并进行初步的凝血、结合活性鉴定。结果:成功构建了3种rmFⅦ-pPIC9K表达载体(M1:LCmFⅦ-pHC9K;M2:K341AmFⅦ-pPIC9K;M3:QEAmFⅦ-pPIC9K),并通过酵母表达获得相应蛋白,经初步活性鉴定其中两种符合设计目的。结论:毕赤酵母表达rmFⅦ蛋白,为抗肿瘤血管药物的研究、肿瘤的分子靶向性治疗奠定了基础。
- 杨峥嵘何飞王蒙粟永萍程天民
- 关键词：毕赤酵母定点突变
- Delta1基因对人牙髓干细胞增殖、分化的影响
- 本研究拟在分离鉴定人牙髓干细胞的基础上，采用逆转录病毒基因转导技术，将Notch配体—Delta1基因导入该细胞，探讨Delta1基因对DPSCs增殖、分化的影响，并对此基因转导细胞作为组织工程种子细胞的可行性进行初步探...
- 何飞
- 关键词：牙髓干细胞细胞增殖逆转录病毒NOTCH信号信号转导
- 文献传递
- 超声在下颌磨牙C形根管预备中的应用被引量：1
- 2008年
- 目的:比较超声法与手动K锉预备下颌第二磨牙C形根管的临床效果。方法:选取临床上需行牙髓治疗的下颌第二磨牙C形根管50例,随机分成两组。实验组25例,用Odontoson-M超声仪预备根管;对照组25例,用手动K型锉预备根管。记录并比较根管预备时间。侧压法根管充填后拍摄X线片,分析根管预备和根管充填的效果。比较两组间根管治疗期间急症的发生率。结果:超声法C形根管预备的平均时间为340s,手动K型锉为620s,两组间差异非常显著;X线片示根管内台阶形成超声组2例,K锉组3例;手动K型锉组出现3例根尖阻塞,3例根尖偏移。与对照组相比,实验组根管预备效果显著提高,同时治疗期间急症发生率(EIE)有所改善,但未见显著性差异。结论:超声法预备下颌第二磨牙C形根管操作简便、高效实用、安全,是临床上对下颌第二磨牙C形根管进行预备的有效工具。
- 何飞汪蕾张萍
- 关键词：超声C型根管根管预备
- bFGF聚乳酸纳米微球对兔成骨细胞增殖的影响被引量：9
- 2007年
- 目的:观察碱性成纤维生长因子聚乳酸纳米微球缓释系统(bFGF-PLA-Ns)对体外培养的兔成骨细胞的增殖影响。方法:体外培养兔成骨细胞并鉴定,将bFGF-PLA-Ns和成骨细胞一起培养,采用MTT法检测微球对成骨细胞增殖状况的影响,免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)在成骨细胞中表达,并与单纯bFGF的作用进行比较。结果:bFGF-PLA-Ns具有良好的生物活性,能显著促进兔成骨细胞的增殖,其效应高于单纯施加bFGF的效应。结论:制备的bFGF-PLA-Ns比单纯的bFGF有更为显著的生物学效应,在骨创伤的治疗中有良好的前景。
- 张纲谭颖徽卢来春何飞裘松波
- 关键词：碱性成纤维生长因子微球缓释增殖成骨细胞
- 人牙髓干细胞的体外培养和鉴定被引量：26
- 2005年
- 目的 研究第三恒磨牙来源的人牙髓干细胞的表型和生物学性状。方法 从成人健康阻生牙中获取牙 髓,酶消化法分离获得牙髓干细胞,计算细胞克隆形成率(CFU_F);免疫组化、RT_PCR法检测细胞的表面分子表达; 流式细胞仪测定细胞周期;体外分化诱导实验检测细胞的多向分化能力。结果 分离获得的牙髓干细胞在体外具 有一定的克隆形成能力,诱导条件下部分牙髓干细胞可向脂肪、肌细胞和成牙本质细胞方向分化,符合干细胞的特 征。结论 成功的从人第三恒磨牙牙髓中分离得到牙髓干细胞。
- 何飞谭颖徽张纲
- 关键词：第三磨牙牙髓干细胞
- 《口腔医学》课堂讨论的改进
- 2006年
- 张纲谭颖徽裘松波何飞张萍杜俊兰
- 关键词：牙医学讨论课义齿修复镶牙学生提问咬合功能
- 基于Semliki森林病毒复制子的新型RNAi质粒载体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:以semliki森林病毒复制子为基础,构建一类可迅速高效表达shRNA的新型RNAi载体。方法:以Semliki森林病毒衍生的复制子载体pSFV1为骨架,用CMV IE启动子替换SP6启动子并在3′-UTR下游插入SV40 polyA转录终止子,在原26S亚基因组启动子后插入带有相应改良多克隆位点的shRNA表达元件,同时加入抗新霉素选择复合体,并去掉3′-UTR的重复序列。所获载体用于沉默EGFP基因,通过体外细胞转染、病毒颗粒制备、荧光显微镜观察、RT-PCR分析等初步验证、评估其效果。结果:构建了基于Semliki森林病毒复制子的新型RNAi质粒载体pSFV-RNAi Ready。经体外实验初步证实,该载体直接转染细胞,或与辅助载体共转染,制备成具有感染能力的重组病毒颗粒后使用,均可高水平表达shRNA,沉默目的基因。其中使用病毒颗粒抑抑效率可高达90%以上。结论:该载体的成功构建,可望显著拓宽SFV载体的应用范围,丰富RNAi实施手段,并用于相关科学研究及基因药物技术开发。
- 杨峥嵘何飞王海峰黄来强
- 关键词：RNA干扰复制子病毒载体
