何飞
- 作品数：41 被引量：152H指数：8
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- 相关领域：医药卫生生物学哲学宗教更多>>
- 体外人牙髓细胞的连续培养被引量：14
- 2002年
- 目的 探讨体外连续培养过程中人恒牙牙髓细胞向成牙本质样细胞分化的可行性。方法 采用细胞连续培养、酶动力学法、透射电镜观察、免疫组化等方法 ,对体外人牙髓细胞在连续培养过程中的生物学特性进行研究。结果 部分人牙髓细胞在体外可以出现复层生长 ,形成细胞结节 ,并可进一步钙化 ;与成牙本质细胞相似 ,它们具有高碱性磷酸酶活性 ,可合成Ⅰ型胶原 ,其超微结构有许多与成牙本质细胞相似的特征 ,胞间基质中可见膜被基质小泡 ,某些基质小泡内含针状晶体。结论 体外连续培养的人牙髓细胞可向成牙本质细胞分化 ,此过程可作为研究体内牙髓损伤修复细胞增殖。
- 何飞谭颖徽杨峥嵘
- 关键词：牙髓细胞成牙本质细胞细胞分化细胞培养牙髓损伤
- 人Delta-like 1蛋白的表达及其对动员外周血CD34^+细胞的扩增作用被引量：1
- 2010年
- 构建pET32a(+)-hDll1DSL原核表达载体,表达、纯化hDll1DSL蛋白,观察其对动员外周血CD34+细胞的体外扩增作用。克隆hDll1DSL,构建pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体。转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白。RBP-j报告基因实验及Notch下游分子Hes1检测证实hDll1DSL活性。磁珠分选动员外周血CD34+细胞,加入hDll1DSL或联合SCF、FL、TPO孵育一周,观察体外扩增作用。结果表明:成功克隆hDll1DSL,并构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体。在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hDll1DSL融合蛋白,经镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hDll1DSL融合蛋白。配体活性实验显示,可溶性的Trx-hDll1DSL蛋白可以激活RBP-j报告基因,并且能上调Notch下游分子Hes1的表达,证明其能够激活Notch信号通路。此外,Trx-hDll1DSL融合蛋白与SCF、FL及TPO联用,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用。我们成功构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体,表达、纯化了具有生物学活性的Trx-hDll1DSL融合蛋白,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用,为造血干/祖细胞体外扩增体系的优化研究奠定了基础。
- 刘强郑瑾何飞李国辉黄斯勇郝淼旺梁英民
- 关键词：外周血CD34+细胞扩增作用细胞体外原核表达载体
- 小鼠CXCR4基因启动子的克隆和报告基因载体构建被引量：2
- 2009年
- 目的:克隆小鼠CXCR4基因启动子,并建立CX-CR4报告基因系统。方法:设计合成PCR引物,从小鼠基因组DNA中扩增并克隆小鼠CXCR4基因的启动子区。序列测定确认后,用克隆的启动子片段构建CXCR4荧光素酶报告基因载体pGL-CXCR4。转染细胞,用双报告基因系统检测报告基因载体的活性。结果:成功扩增了小鼠CXCR4基因的启动子区。克隆入质粒载体后经DNA序列测定证实了其序列。通过转染细胞和荧光素酶分析,证实所构建的报告基因可以反映CXCR4启动子的活性。结论:成功扩增、克隆了小鼠CXCR4基因启动子,并成功建立起其报告基因系统,为后续的研究奠定了基础。
- 王莉何飞王耀春
- 关键词：CXCR4基因启动子报告基因
- 重组小鼠凝血因子Ⅶ-pPIC9K表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达
- 2005年
- 目的:构建去除凝血功能,但保留TF亲和力的rmFⅦ-pPIC9K表达载体并用毕赤酵母表达目的蛋白。方法:通过RT-PCR自小鼠肝脏获得FⅦcDNA,对其进行定点突变后连入pPIC9K质粒,电击转化Gs115酵母细胞,经G418筛选、BMGY/BMMY小量摇瓶培养表达目的蛋白,并进行初步的凝血、结合活性鉴定。结果:成功构建了3种rmFⅦ-pPIC9K表达载体(M1:LCmFⅦ-pHC9K;M2:K341AmFⅦ-pPIC9K;M3:QEAmFⅦ-pPIC9K),并通过酵母表达获得相应蛋白,经初步活性鉴定其中两种符合设计目的。结论:毕赤酵母表达rmFⅦ蛋白,为抗肿瘤血管药物的研究、肿瘤的分子靶向性治疗奠定了基础。
- 杨峥嵘何飞王蒙粟永萍程天民
- 关键词：毕赤酵母定点突变
- Delta1基因对人牙髓干细胞增殖、分化的影响
- 本研究拟在分离鉴定人牙髓干细胞的基础上，采用逆转录病毒基因转导技术，将Notch配体—Delta1基因导入该细胞，探讨Delta1基因对DPSCs增殖、分化的影响，并对此基因转导细胞作为组织工程种子细胞的可行性进行初步探...
- 何飞
- 关键词：牙髓干细胞细胞增殖逆转录病毒NOTCH信号信号转导
- 文献传递
- bFGF-PLA-Ns对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化的影响被引量：9
- 2007年
- 目的观察制备的碱性成纤维生长因子聚乳酸纳米微球缓释系统(bFGF-PLA-Ns)对体外培养的兔成骨细胞的增殖、分化和矿化能力的影响。方法体外培养兔成骨细胞并鉴定,将bFGF-PLA-Ns和第4代成骨细胞一起培养,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞ALP活性,茜素红染色方法观察矿化结节的形成,并与单纯bFGF和空白组的作用进行比较。结果bFGF-PLA-Ns具有良好的生物活性,能显著促进兔成骨细胞的分化和矿化,其效应高于单纯施加bFGF和空白组的效应。结论制备的bFGF-PLA-Ns比单纯的bFGF对体外培养的成骨细胞有更为显著的生物学效应,在骨创伤的治疗中有良好的前景。
- 张纲亓连军谭颖徽卢来春裘松波何飞
- 关键词：BFGF纳米微球成骨细胞
- 短期职业暴露对个体心理健康影响的初步研究被引量：2
- 2008年
- 目的:通过评估短期职业暴露前后人员的心理健康状况,探讨短期职业暴露对个体心理健康的影响特点,为职业暴露引发的心理问题提供心理干预依据.方法:运用症状自评量表(SCL-90),焦虑自评量表(SAS),抑郁自评量表(SDS)和状态-特质焦虑问卷(STAI),比较25名职业暴露人员暴露前和暴露后(暴露1wk)的心理健康状况.结果:SCL-90各项得分均高于职业暴露后,其中躯体化、强迫、人际关系、抑郁、偏执、精神病性、阳性项目数、总分均达到统计学显著水平(P<0.05),但焦虑、敌对和恐怖等因子未达到统计学显著水平(P>0.05).暴露前,SDS抑郁指数得分0.49±0.05,SAS得分55.16±5.25,S-AI得分2.02±0.28;暴露后,SDS抑郁指数得分0.47±0.06,SAS得分39.64±5.45,S-AI得分1.52±0.26.暴露前SDS,SAS和S-AI得分均显著高于暴露后的水平.结论:短期职业暴露前的心理健康水平较暴露后差,提示对该职业暴露个体在暴露前的专业教育和心理教育非常必要,同时暴露期间的心理干预不容忽视.
- 李皎皎杨业兵陈波艳何飞刘旭峰
- 关键词：精神卫生心理测定学
- Notch配体Delta1对人牙髓干细胞分化的影响被引量：6
- 2005年
- 目的:探讨Notch配体Delta1对体外人牙髓干细胞(dentalpulpstemcells,DPSCs)向成牙本质细胞分化能力的影响。方法:利用逆转录病毒载体建立高表达人Delta1基因的人牙髓干细胞系;实验分三组,正常牙髓干细胞组、转导细胞组及混合组(正常与转导细胞比例为100∶1),分别进行体外分化诱导。倒置显微镜观测各组细胞各生长期出现的时间;VonKossa染色计数各组形成钙化结节数;Westernblot法检测各组细胞牙本质涎磷蛋白表达。结果:与正常牙髓干细胞相比,转导细胞各生长期出现时间明显提前,形成的钙化细胞结节数目显著增加,牙本质涎磷蛋白表达显著升高。结论:Delta1基因转导牙髓干细胞仍保持了体外向成牙本质细胞分化的能力;Notch-Delta1信号与分化诱导因子协同作用可促进人牙髓干细胞向成牙本质细胞分化。
- 何飞杨峥嵘谭颖徽
- 关键词：DELTANOTCH人牙髓干细胞成牙本质细胞分化
- rhBMP_2对人牙髓干细胞分化及Delta蛋白表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:研究重组人骨形成蛋白2(rhBMP2)对人牙髓干细胞分化及Delta蛋白表达的影响,为人牙髓干细胞的研究提供理论依据。方法:酶消化法获得人牙髓干细胞,光镜下进行形态学观察,免疫荧光法检测细胞表面标志的表达;取第5代牙髓干细胞,分为实验组(加含50μg·L-1 rhBMP2的培养液)及阴性对照组(只加入培养液),检测碱性磷酸酶活性和Delta蛋白表达的变化。结果:人牙髓干细胞呈集落状生长,免疫组织化学检测显示nestin、vimentin染色呈阳性,免疫荧光法检测STRO-1呈阳性。与阴性对照组比较,实验组第7、14及21天碱性磷酸酶活性均明显升高(P<0.01),第21天Western blotting法检测Delta蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:培养的牙髓干细胞具有干细胞特性,并且rhBMP2可使其碱性磷酸酶活性增高并上调Delta蛋白表达,提示Delta蛋白可能参与牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化的过程。
- 于娜何飞谭颖徽
- 关键词：重组人骨形成蛋白2牙髓干细胞
- 前列腺素E_2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)mRNA表达的影响。方法:将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度(10-9、10-8、10-7、10-6mol/L)的PGE2分别处理2、8、24、48h,使用Trizol抽提总RNA,通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)来观察人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达强度变化。结果:10-9～10-6mol/LPGE2在2～24h可上调人牙周膜成纤维细胞RANKL mRNA的表达,但抑制OPGmRNA的表达,且RANKL/OPG比率呈上升趋势。结论:PGE2有可能通过调节人牙周膜成纤维细胞的RANKL/OPG mRNA表达比例,从而间接地调节破骨细胞的分化和活性。
- 任莉裘松波谭颖徽何飞
- 关键词：前列腺素E2人牙周膜成纤维细胞核因子-ΚB受体活化因子配体骨保护素
