何国平
- 作品数：2 被引量：11H指数：2
- 供职机构：香港理工大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人DNA拓扑异构酶Ⅰ在毕赤酵母中的表达及发酵条件优化被引量：4
- 2004年
- 为了在体外以人DNA拓扑异构酶Ⅰ (hTopoⅠ )为靶位进行抗肿瘤化合物的快速筛选 ,用RT PCR法从Hela细胞中克隆了hTopoⅠ基因ORF并在毕赤酵母中首次成功表达 ,表达产物可分泌到发酵上清 ,易于制备。蛋白酶A缺陷的重组酵母 (SMD hTopoI)分泌重组酶的能力比具有蛋白酶A活性的重组酵母 (X3 3 hTopoI和KM hTopoI)更高。通过发酵条件的优化 ,使用BMMY(pH 7 2 5) ,于 2 0℃ ,每隔 2 4h补加 0 5% (V V)的甲醇和 3 % (V V)的营养液 ,SMD hTopoⅠ诱导 72h后可表达最高的酶活力 (43 0 0 0u mL) ,发酵上清中hTopoⅠ可达 11mg L ,约占总蛋白的 10 %。SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,表达的hTopoⅠ为 91kD蛋白 。
- 杨国武袁保红何国平戴欣林永成周世宁
- 关键词：DNA拓扑异构酶分泌表达毕赤酵母发酵条件细胞代谢
- 以重组人DNA拓扑异构酶Ⅰ为靶位从天然产物及其衍生物中筛选抗肿瘤化合物被引量：7
- 2004年
- 为了在体外以人DNA拓扑异构酶Ⅰ(hTopoⅠ)为靶位进行抗肿瘤化合物的快速筛选,首次使用毕赤酵母表达了hTopoⅠ。在微量反应体系中,测定了化合物抑制hTopoⅠ松驰活性的能力,并用MTT实验验证筛选到的hTopoⅠ抑制剂的抗肿瘤活性。从74个结构新颖的天然产物及人工合成的黄酮类衍生物中筛到6个hTopoⅠ抑制剂,有4个化合物抑制肿瘤细胞生长的能力较强。
- 杨国武田新莉何国平林永成周世宁
- 关键词：抑制剂抗肿瘤
