任维华
- 作品数：5 被引量：16H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金国家杰出青年科学基金长江学者奖励计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 高效建立纯系基因剔除小鼠模型的方法
- 2005年
- 该发明专利提供了一种用于产生纯系基因剔除小鼠模型的转基因非人哺乳动物。
- 王铸钢赵旭东任维华
- 关键词：小鼠模型转基因技术哺乳动物
- 人多形性腺瘤PLAG1转基因小鼠模型的建立及其Wnt信号传导通路研究
- ＜正＞目的:研究表明人中常可发现多形性腺瘤基因1（PLAG1）的重组和激活。PLAG1编码一种发育相关的转录因子,体外研究表明其异位表达在唾液腺多形性腺瘤的发生起重要作用。本研究拟应用转基因技术产生表达PLAG1的小鼠模...
- 杨雯君赵旭东俞志维任维华王龙陈万涛张陈平王铸钢
- 文献传递
- 多形性腺瘤基因1高表达转基因小鼠动物模型的建立被引量：10
- 2003年
- 目的 克隆人多形性腺瘤基因 1(pleomorphic adenoma gene1,PL AG1)基因 ,构建 PL AG1组织非特异性和特异性表达载体 ,并建立 PL AG1转基因小鼠模型 ,阐明 PL AG1基因的高表达与唾液腺肿瘤发生的关系。方法 取 PL AG1高表达的瘤组织或正常胎盘组织 ,提取总 RNA,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增获得 PL AG1c DNA全部编码框序列。将PL AG1分别克隆至 p CMV-EGFP和 p MMTV-EGFR-stop载体获得 p CMV-EGFP/PL AG1和 p MMTV-PL AG1表达载体。用 p CMV-EGFP/PL AG1瞬时转染 NIH3 T3细胞以观察融合基因的表达及 PL AG1的细胞内定位。经显微注射分别获得 p CMV-EGFP/PL AG1和 p MMTV-PL AG1转基因小鼠。结果 从不同组织来源的 RNA克隆的 PL AG1c DNA,经测序后发现与 Gen Bank中的 PL AG1基因 (Gen Bank No.U650 0 2 )比较有一个碱基差 ,相应氨基酸由苏氨酸变为脯氨酸。构建的组织非特异性表达载体 p CMV-EGFP/PL AG1和组织特异性表达载体 p MMTV-PL AG1经酶切和测序鉴定 ,证实 PL AG1序列及插入方向正确。用 p CMV-EGFP/PL AG1转染 NIH3 T3细胞 ,在细胞水平证明 PL AG1的表达及其在细胞核的定位。两种表达载体分别经显微注射 ,获得了多个转基因阳性小鼠
- 赵旭东杨雯珺王龙孔辉任维华张梅费俭张陈平王铸钢
- 关键词：转基因小鼠基因表达动物模型肿瘤基因突变
- Adiponectin基因剔除LacZ基因敲入小鼠模型的建立被引量：6
- 2006年
- adiponectin是脂肪细胞特异分泌的一种活性蛋白质,具有增加胰岛素敏感性、抗炎及抗动脉硬化等活性.建立adiponectin基因剔除β-半乳糖苷酶基因(LacZ)敲入小鼠模型,可为整体动物水平研究adiponectin基因功能及其表达调控机制等提供理想工具.根据生物信息学方法获得adiponectin基因组序列,设计基因剔除及敲入策略,在adiponectin基因第2和第3号外显子剔除的同时,在其ATG和信号肽序列后顺接LacZ基因完整编码序列,构建完成了Adipo-LacZ-XpPNT基因剔除质粒.通过电穿孔将打靶质粒转入ES细胞,以G418和ganciclovir进行药物筛选,获得药物抗性的ES细胞克隆,PCR和DNA印迹鉴定出正确同源重组克隆.将同源重组的ES细胞克隆注入小鼠囊胚得到嵌合体小鼠,嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配产生杂合子小鼠,杂合子间交配获得adiponectin基因剔除LacZ基因敲入纯合子小鼠.经RT-PCR、RNA印迹和ELISA检测证实纯合子小鼠脂肪和血清中adiponectin基因表达呈阴性.RT-PCR、RNA印迹及蛋白质印迹检测发现,LacZ基因在突变小鼠脂肪组织中有特异性表达,其表达谱与内源性adiponectin基因的表达谱一致.但在脂肪组织及外周血中未能检测到LacZ活性,且血清中LacZ蛋白亦呈阴性.由此成功建立了adiponectin基因完全灭活及LacZ基因以内源性adiponectin基因表达谱表达的小鼠模型,为进一步研究该基因功能及其表达调控创造了有利条件.
- 任维华李西华王芳乔建瓯党素英孔辉王龙陆顺元孙霞徐国江傅继梁费俭王铸钢
- 关键词：ADIPONECTIN基因剔除基因敲入
- 人多形性腺瘤PLAG1转基因小鼠模型的建立及其Wnt信号传导通路研究
- 目的:研究表明人中常可发现多形性腺瘤基因1 （PLAG1）的重组和激活。PLAG1编码一种发育相关的转录因子,体外研究表明其异位表达往唾液腺多形性腺瘤的发生起重要作用。本研究拟应用转基因技术产生表达PLAG1的小鼠模型,...
- 杨雯君赵旭东俞志维任维华王龙陈万涛张陈平王铸钢
- 文献传递
