黎然
- 作品数：6 被引量：18H指数：2
- 供职机构：广东医学院附属医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- mir-520c-3p靶向GPC3对肝癌Huh-7细胞增生、迁移和侵袭能力的影响的研究被引量：2
- 2013年
- 目的研究mir-520c-3p靶向GPC3后对肝癌Huh-7细胞增生、迁移、侵袭能力的影响，为临床寻找治疗肝癌的方法提供新的理论依据。方法将实验分为三组：未转染mir-520c-3p的Huh-7细胞组（cell组），阴性对照组（NC组），以及转染mir-520c-30p的Huh-7细胞组（干扰组）。然后利用荧光定量PCR和WesternBlotting分别检测GPC3基因的mRNA和蛋白的表达量；通过EDU检测细胞增生的变化；通过Transwell检测细胞侵袭和迁移能力的改变。结果荧光定量PCR结果表明cell组、NC组和干扰组分别为1．13±0．23、1．28±0．15和1．05±0．19（P〉0．05），mir-520e-3p不影响GPC3的mRNA转录水平；而West—ernBlotting实验结果表明转染mir-520c-3p后GPC3蛋白表达水平明显降低，cell组、NC组和干扰组分别为2．16±0．08、1．99±0．04和0．499±0．05（P〈0．01）；EDU检测发现转染mir-520c-3p后肝癌Huh-7细胞增生能力明显受抑制，cell组、NC组和干扰组分别为（90．12±1．93）％、（91．02±0．35）％和（77．73±5．88）％（P〈0．05）；Transwell检测结果发现转mir-520c-3p后肝癌Huh-7细胞的侵袭能力受抑制，cell组、NC组和干扰组分别为0．071±0．008、0．105±0．001和0．048±0．002（P〈0．05）；迁移能力明显降低，其中cell组、NC组和干扰组分别为0．5464-0．010、0．328±0．002和0．151±0．002（P〈0．01）。结论mir-520c-3p能够靶向GPC3从而抑制肝癌Huh-7细胞的增生、侵袭、迁移能力。
- 刘忠考雷长江邱志东李明意黎然包仕廷缪辉来
- 关键词：肝细胞癌细胞增生
- GPC3-siRNA真核质粒载体的构建及Huh-7细胞转染被引量：2
- 2014年
- 目的探讨GPC3-siRNA真核质粒载体构建并转染Huh-7细胞的可行性。方法构建真核质粒载体pcDNA3.1+GPC3和GPC3-siRNA-1633,采用脂质体法瞬时转染至Huh-7细胞中。MTT法检测转染后Huh-7细胞的细胞活性,荧光定量PCR、Western blot分别检测GPC3 mRNA和蛋白表达。结果 GPC3-siRNA-1633基因和GPC3真核质粒载体转染Huh-7细胞后细胞存活率高,转染GPC3-siRNA-1633的Huh-7细胞出现GPC3 mRNA和蛋白表达下调。结论 GPC3-siRNA-1633可成功转染至Huh-7细胞,并抑制GPC3表达。
- 温继育邹文俊刘忠考黎然邱志东李明意缪辉来
- 关键词：GPC3转染HUH-7细胞
- 二氢杨梅素对肝癌细胞黏附、侵袭及迁移的抑制作用及机制被引量：10
- 2015年
- 目的:研究二氢杨梅素(DHM)对肝癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响及其可能机制。方法:用不同浓度DHM处理肝癌MHCC97L细胞后,分别检测细胞的黏附能力、迁移与侵袭能力,以及E-cadherin、MMP-2、MMP-9和VEGF蛋白表达。结果:与空白对照细胞比较,DHM处理后的MHCC97L细胞黏附力明显降低、侵袭与迁移力明显减弱(均P<0.05);E-cadherin表达明显上调,而MMP-9、VEGF蛋白表达明显下调的水平(均P<0.05),但MMP-2蛋白的表达无明显改变(均P>0.05)。结论:DHM可能通过调控E-cadherin、MMP-9和VEGF蛋白的表达抑制肝癌细胞的黏附、迁移和侵袭。
- 邱志东罗芳兰舒洋温小军张庆余廖雅琳黎然缪辉来
- 关键词：二氢杨梅素肿瘤侵润
- GPC3过表达载体的构建和表达检测被引量：1
- 2012年
- 目的构建并检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)真核表达重组质粒。方法提取肾组织RNA进行逆转录,扩增GPC3基因的编码区,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,酶切鉴定并测序;将克隆成功的质粒转染至Huh7细胞,用荧光定量PCR和Western blot检测GPC3的表达水平。结果成功扩增GPC3编码区,并克隆至载体pcDNA3.1中;GPC3过表达载体转染至Huh7细胞后,荧光定量PCR和Western Blotting检测结果显示GPC3mRNA和蛋白表达水平均明显增加。结论成功构建GPC3过表达载体可用于后续研究。
- 邱志东雷长江刘忠考黎然缪辉来
- 关键词：GLYPICAN-3质粒肝细胞癌
- GPC3特异的siRNA筛选和对肝癌细胞增殖能力的影响被引量：2
- 2012年
- 目的筛选特异靶向GPC3的siRNA和探讨GPC3在肝癌中的作用机制。方法设计靶向GPC3的siRNA,转染huh7细胞后荧光定量PCR检测其对GPC3表达的抑制效果;选用抑制效果明显的siRNA下调GPC3表达后,WesternBlot检测GPC3的蛋白表达水平,并用Edu检测方法对Huh7细胞的增殖能力进行检测。结果成功筛选出一条抑制效率达到74.87%的特异靶向GPC3的siRNA,其可以显著抑制GPC3的转录翻译;同时,Edu检测发现当GPC3表达下调后,Huh7细胞的增殖能力下降。结论 GPC3的表达有利于HCC的增殖,而有效靶向GPC3的siRNA可为更进一步的研究提供有利手段。
- 邱志东缪辉来雷长江刘忠考黎然包仕廷
- 关键词：GPC3SIRNA肝癌增殖HUH7
- 靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的小干扰RNA筛选和对肝癌细胞的作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）在肝细胞癌（HCC）发生发展中的作用机制。方法设计靶向GPC3的siRNA，转染Huh7细胞后实时荧光定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测其对GPC3表达的抑制效果；选用抑制效果明显的小干扰RNA（siRNA）下调GPC3表达后，Westernblot法检测GPC3的蛋白表达水平，并用流式细胞仪、荧光显微镜观察及Transwell法分别对Huh7细胞的周期、增殖和侵袭进行检测。结果成功筛选出1条抑制效率达到74．87％的特异靶向GPC3的siRNA，可以显著抑制GPC3的转录翻译；同时，可见Huh7细胞的增殖和侵袭受到抑制，但并不影响细胞周期。结论GPC3的表达有利于HCC的增殖侵袭，其表达降低不利于HCC的发生发展。
- 邱志东缪辉来雷长江刘忠考黎然包仕廷
- 关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖3小干扰RNAHUH7
