黄冠军
- 作品数：5 被引量：85H指数：4
- 供职机构：重庆大学生物工程学院基因工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 基于锁式探针的柑桔溃疡病菌检测新技术研究
- 柑桔溃疡病(Citrus Bacterial Canker Disease，CBCD)是严重危害世界柑桔种植业的一种细菌性病害，其病原物为地毯草黄单胞杆菌柑桔致病变种(Xanthomonos axonopodis pv....
- 黄冠军
- 关键词：锁式探针柑桔溃疡病菌
- 文献传递
- 柑橘溃疡病生防菌株CQBS03的鉴定及其培养特性研究被引量：27
- 2008年
- 【目的】筛选鉴定柑橘溃疡病菌拮抗菌,研究其培养特性及拮抗物质的初步性质,为柑橘溃疡病的生物制剂研制奠定基础。【方法】利用对峙培养法筛选对柑橘溃疡病菌具有良好抑制作用的生防菌,并通过对菌株形态、生理生化特征以及16SrDNA序列分析鉴定其分类地位;以单因素试验和正交设计方法对影响CQBS03菌株抑菌活性物质产生的各种培养条件进行优化;利用硫酸铵沉淀获得抑菌物质粗提物并测定其对温度、蛋白酶及氯仿的敏感性。【结果】经鉴定CQBS03为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。CQBS03抑菌活性成分主要存在于培养液中,能被80%饱和度硫酸铵沉淀,最高可耐受的温度范围为60～70℃;活性成分在280nm处有最大吸收峰,分子量大于10kD,对蛋白酶K和胰蛋白酶稳定,而对氯仿部分敏感。培养特性研究表明,CQBS03最适培养基为YPG液体培养基,抑菌物质产生的最适培养条件为:pH8.0左右,28℃培养72h。【结论】枯草芽孢杆菌CQBS03所产生的抑菌物质主要成分是蛋白质,且属于外泌型蛋白;该抑菌蛋白对多种植物病原菌有抑菌作用,尤其对柑橘溃疡病菌抑菌活性高,稳定性好,是一株极具开发潜力的生防菌株。
- 陈力王中康黄冠军曹月青夏玉先殷幼平
- 关键词：枯草芽孢杆菌拮抗细菌生物防治柑橘溃疡病抑菌蛋白
- 柑桔溃疡病菌滚环扩增检测体系的建立被引量：25
- 2008年
- 根据柑桔溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri,Xac)独有的蛋白基因序列和锁式探针公共连接序列分别设计特异性的锁式探针及其扩增引物,优化系列反应条件,建立了特异性的柑桔溃疡病菌滚环扩增体系。初步检测结果表明该体系能够特异性地检出Xac的菌体细胞及其DNA,而检测不出供试的其它植物病原细菌和柑桔叶面常见的多种附生细菌;对Xac靶片段克隆质粒DNA的检测灵敏度为102copy/μL,对Xac菌悬液的检测灵敏度为20cfu/μL,比常规PCR的检测灵敏度稍高。用滚环扩增技术和常规PCR技术对田间采集的实际样品进行了检测,两种方法的检测结果没有显著差异(P>0.01)。由于锁式探针的公共连接序列对扩增的条件要求一致,本体系的建立可以为植物病原微生物多靶标检测和病害检疫检验提供新的技术支撑。
- 黄冠军殷幼平张仑李小焦葛建军陈洪俊王中康
- 关键词：柑桔溃疡病菌锁式探针滚环扩增
- 柑桔溃疡病菌实时荧光定量PCR检测与应用被引量：30
- 2007年
- 根据地毯草黄单孢Xac306菌株（Xanthomonas axonopodis pv.citri，Xac 306）已知全基因组中独有蛋白基因序列设计的特异性引物对和探针，建立并优化SYBR Green I（SGI）荧光染料和TaqMan探针实时荧光定量PCR检测体系，用于柑桔溃疡病早期诊断鉴定。结果表明，建立的两种定量PCR体系均能特异地检出Xac的细胞和其基因组DNA，而对其它测试的植物病原菌和柑桔表面的腐生黄单孢菌都不能检出。SGI法和TaqMan探针法对Xac细菌悬浮液的检测灵敏度均可达到1～5个细菌／反应，对Xac靶标片段DNA的检测灵敏度可达1fg／μL。两种定量PCR检测方法比常规PCR灵敏度高2～3个数量级。对田间采集的328个柑桔显症、疑似症状和无症带菌材料富集培养样品进行了实际检测，结果表明，实时荧光PCR适合柑桔无症带菌样品的早期检测。
- 殷幼平黄冠军赵云刘洪王中康
- 关键词：柑桔溃疡病菌定量PCR荧光染料TAQMAN探针
- 超分支滚环扩增法检测小麦矮腥黑穗菌被引量：10
- 2009年
- 【目的】建立小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa Kühn,TCK)的超分支滚环扩增(hyper-branched rolling cycle amplification,HRCA)检测体系,为小麦矮腥黑穗病的鉴定以及早期诊断提供了一种新的稳定、可靠的检测技术。【方法】锁式探针包含一个公共连接序列和在探针两端与靶DNA序列互补的2个序列。根据TCK的差异序列设计锁式探针两端序列,以此为基础建立了TCK超分支滚环扩增反应体系。以优化的HRCA反应条件为基础,确定检测体系的特异性和灵敏度。比较HRCA体系和常规PCR体系的性能,并利用这2种体系对来自中国出入检验检疫局截获的51个小麦样品进行了验证检测。【结果】HRCA体系能专一地检出小麦矮腥黑穗菌的DNA靶带,而TCT、TCL等近源种及健康小麦样品都不能扩增。HRCA检测TCK靶序列质粒DNA的下限为1fg·μl-1,检测基因组DNA的下限为10pg·μl-1,检测灵敏度比常规PCR检测体系高10倍。HRCA检测体系具有很好的特异性、灵敏度和准确性,更适合于TCK的检测及鉴定。【结论】稳定、灵敏、特异的小麦矮腥黑穗菌的HRCA检测体系的建立,为小麦矮腥黑穗病的早期诊断及其近源种的多靶标检测提供了同步检测技术。
- 蔡俊殷幼平葛建军陈洪俊黄冠军张雯迪王中康
- 关键词：小麦矮腥黑穗病锁式探针
