顾郁 作品数:7 被引量:15 H指数:3 供职机构: 北京师范大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
PAGE法分离CMLC的研究 1993年 采用了 PAGE 法,将由人心肌直接提取的粗提纯人心肌肌凝蛋白轻链(CMLC)进一步分离,每一次制备可以从凝胶中获得1—2 mg 电泳纯的 CMLC,量虽少,但具有抗原性,可用于建立临床诊断方法。 顾郁 何忠效 文杰关键词:心肌梗塞 凝胶电泳 PAGE 5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对HL-60细胞分化和DNA甲基化酶的影响 被引量:9 1995年 以5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)为诱导物,在0.5μmol/L的最佳浓度下,可诱导HL-60细胞分化达15%左右。同时,用[ ̄3H]-methyl-s-adenosylmethionine( ̄3H-SAM)为底物,通过同位素参入法,测定了不同浓度诱导物对HL-60细胞DNA甲基化酶活力的影响,发现在最佳诱导物浓度下,可使HL-60细胞DNA甲基化酶活力明显下降,此外,也比较了不同分化水平的HL-60细胞中具有不同甲基化水平的DNA在体外接受甲基的能力,从而证明5-aza-CdR诱导HL-60细胞分化与其DNA甲基化状态密切相关。 何忠效 顾郁 饶泓 白坚石 马晴关键词:HL60 细胞分化 DNA甲基化酶 5-AZA-CDR 人心肌肌凝蛋白轻链(CMLC)的分离及临床应用 1992年 从人心肌提取了肌凝蛋白,并检测了其ATP酶活力的稳定性。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法纯化并鉴定了人心肌肌凝蛋白轻链(CMLC),结果表明CMLCI的分子量为27000;CMLCⅡ的分子量为20 000。它们的紫外吸收光谱显示A260>A280,表明其高含苯丙氨酸。制备了兔抗人CMLC抗血清,免疫双扩散的结果表明,纯化后的CMLC与肌凝蛋白有相同的抗原性。用阳性的兔抗人CMLC抗血清为对照作ELISA实验,不仅从免疫学角度进一步证实了人心肌CMLC的特性且为其在临床诊断应用提供了可靠的方法。 顾郁 何忠效 袁煜关键词:肌凝蛋白 轻链 从基因工程菌分离纯化心钠素 被引量:3 1998年 以高效表达的基因工程菌为材料,对以包涵体形式存在的目的产物——心钠素(ANF)融合蛋白进行了酶切及分离纯化.先用TritonX-100和低浓度尿素、盐酸胍洗涤,提高包涵体的纯度.再用高浓度的尿素处理,使蛋白变性溶解,脱氧胆酸钠对蛋白有明显的促溶作用.解决变性蛋白质去除变性剂时的聚合问题.在非变性条件下进行SephadexG-75凝胶过滤,FPLC系统纯化,得到目的融合蛋白.用凝血酶对融合蛋白作特异性切割,释放出ANF小肽,经FPLC分离鉴定,与标准ANF有相同的TR值,说明其纯度已达均一.生物活性检测表明:有明显的放免活性和舒张血管。 马晴 何忠效 顾郁关键词:基因工程菌 心钠素 纯化 包涵体 凝血酶 鉴定人心肌肌凝蛋白轻链的指标探讨 1992年 供研究用的轻链是由人心肌提取的具有ATP酶活性的肌凝蛋白裂解而来,经SDS—PAGE方法纯化和鉴定,人心肌肌凝蛋白轻链CMLCⅠ,分子量27,000;CMLCⅡ,分子量20,000。本文除采用了一般测量分子量作为鉴定人心肌肌凝蛋白轻链的指标之外,观察到它具有特殊的紫外吸收光谱;在双向免疫扩散中它与免抗人CMLC抗血清形成免疫沉淀线并在酶联免疫实验中有呈色反应。 顾郁 何忠效 袁煜 文杰关键词:心肌 肌凝蛋白 轻链 甲基化作用对M.L.DMA大分子构象的影响 被引量:3 1990年 本文用Hha I DNA甲基化酶为工具酶,制备了不同甲基化水平的Micrococcus IuteusDNA,再用Sephadex G-100凝胶过滤将甲基化了的M.L.DNA分离出来.以园二色差光谱和紫外差光谱等手段检测了不同甲基化水平给M.L.DNA大分子造成的构象变化:随着DNA甲基化水平的的升高,其CD差光谱的值,及紫外差光谱的值均呈增加趋势.这说明DNA大分子的甲基化,使其分子在溶液中变得更为缩拢,而这种缩拢的程度与DNA大分子的甲基化水平呈正相关. 何忠效 顾郁 饶泓关键词:DNA 构象 鼠肝DNA甲基化酶的纯化及物理化学性质的研究 1996年 以Wistar大鼠肝为材料,确立了一个简便的纯化鼠肝DNA甲基化酶的程序,包括:细胞的超声破碎、去内源核酸、硫酸铵盐析、磷酸纤维素亲和层析、DEAE-SephadexA-50柱层析及SephadexG-150凝胶过滤。用不同浓度聚丙烯酰胺凝胶电泳和孔梯度凝胶电泳检测,纯化后的酶已达电泳均一,且酶的比活力提高112倍。以聚丙烯酰胺孔梯度凝胶电泳测得其天然酶的分子量为365kD,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶有两种亚基,大亚基为95kD,小亚基为85kD,推测该酶由两个大亚基和两个小亚基组成。 白坚石 何忠效 顾郁关键词:DNA甲基化酶 提纯 理化特性