钱晓龙
- 作品数：27 被引量：67H指数：5
- 供职机构：天津医科大学肿瘤医院乳腺病理研究室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- EphA3受体截短突变体variant b在前列腺癌细胞中的分泌表达
- 2010年
- 目的:验证EphA3受体截短突变体variant b是否是一种分泌蛋白,并探索其内源分泌的特点,在细胞水平看其是否有作为前列腺癌血清标志物的潜质。方法:构建EphA3 variant b真核表达载体,应用标签抗体、特异性抗体和Western印迹检测前列腺癌细胞培养液中EphA3 variant b的表达,用RT-PCR方法分析EphA3 variant b在8种细胞系中的表达谱和对雄激素刺激的应答。结果:验证了EphA3 variant b是一种分泌蛋白,在雄激素受体阳性的前列腺癌细胞系中特异性表达,雄激素以剂量依赖方式诱导EphA3 variant b表达。结论:EphA3 variant b是一种分泌蛋白,其表达与雄激素受体信号通路相关,有作为前列腺癌血清标志物的潜质。
- 钱晓龙庞博施庆国武瑞琴俞岚李山虎周建光
- 关键词：前列腺癌血清标志物分泌蛋白
- Hsp27在乳腺浸润性微乳头状癌中的表达及其意义被引量：5
- 2013年
- 目的:乳腺浸润性微乳头状癌(IMPC)具有特殊的组织学形态特征及淋巴结转移率高的生物学特性。本研究旨在通过比较蛋白质组学技术筛选,并验证乳腺IMPC与最常见的非特殊型浸润性导管癌(IDC-NOS)间差异表达的蛋白,从蛋白质角度研究探讨乳腺IMPC的特殊组织学形态及生物学行为机制。方法:双向电泳筛选1例乳腺IMPC和1例乳腺IDC-NOS冻存组织的蛋白表达差异点,质谱鉴定其所对应的蛋白质,免疫组织化学染色检测验证其在43例IMPC和30例IDC-NOS组织切片中的表达。结果:筛选出表达稳定差异的蛋白—热休克蛋白27(Hsp27),且Hsp27在IMPC中表达上调。免疫组织化学染色验证了Hsp27主要表达于肿瘤细胞质中,其在IMPC中的表达明显高于IDC-NOS(Z=-3.236,P=0.001),并与ER(r=0.319,P=0.037)及淋巴结转移数(r=0.444,P=0.003)呈正相关,而与患者年龄、病理学分期、PR和HER-2表达无明显相关性。结论:Hsp27在乳腺IMPC中过表达,且与淋巴结转移数呈正相关,提示Hsp27可能在IMPC淋巴结转移以及特殊的病理形态形成中起着重要作用。
- 高霞钱晓龙李崖青任美敬付丽
- 关键词：乳腺浸润性微乳头状癌热休克蛋白27淋巴结转移
- 两个新的前列腺癌相关分泌蛋白的鉴定和表达
- 2010年
- 为了获得代表不同前列腺癌进展阶段的细胞系的胞外蛋白表达谱,验证其中差异表达蛋白是否为分泌蛋白,在细胞水平看其是否有作为前列腺癌血清标志物的潜质,文章利用双向电泳寻找胞外蛋白中差异表达的点,并质谱鉴定其是何种蛋白质。应用RT-PCR方法分析候选分子在8种细胞系中的表达和对雄激素刺激的应答,构建了候选分子的真核表达载体,瞬时转染293T细胞,应用标签抗体Western blotting方法检测验证细胞培养基中候选分子的表达。结果表明:筛选出两个C4-2胞外高表达的分子--磷酸丙糖异构酶-1(Triosephosphate isomerase1,TPI1)和多配体聚糖结合蛋白(Syndecan binding protein,syntenin,ST1);转录水平发现它们与前列腺癌恶性程度相关,并且后者受雄激素的作用下调;二者均为分泌蛋白。磷酸丙糖异构酶-1和多配体聚糖结合蛋白均有作为指示前列腺癌发展阶段的血清标志物的潜质。
- 钱晓龙施庆国庞博武瑞琴俞岚李山虎王洪涛周建光
- 关键词：前列腺癌血清标志物分泌蛋白
- 基于胞外蛋白质组技术的前列腺癌血清标志物研究
- 前列腺癌是北美国家男性中最常见的恶性肿瘤之一,2008年美国新确诊为前列腺癌的患者占该年新确诊为恶性肿瘤患者的25％。在中国,随着人口结构逐步老龄化,前列腺癌的发病率也在逐年增高。 肿瘤血清标志物的是目前研究的热点。理...
- 钱晓龙
- 关键词：前列腺癌血清标志物病理机制
- 文献传递
- 寻找mRNA的选择性剪接被引量：3
- 2007年
- 在真核生物的基因中,mRNA选择性剪接现象十分普遍。mRNA选择性剪接导致一个基因多转录本的产生,被认为是高等生物增加蛋白质多样性的主要机制,且已发现与许多人类疾病密切相关。发现这些转录本的选择性剪接位点、新的外显子和外显子组合,乃至获得这些剪接变异体的完整克隆,对于基因功能的深入研究十分必要。简要介绍了几种在mRNA水平探索选择性剪接的方法。
- 钱晓龙周建光
- 关键词：选择性剪接剪接变异体表达序列标签MRNART-PCR
- 真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B的改构与应用被引量：6
- 2010年
- 目的:对真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B进行改构,以简化目的基因克隆的步骤。方法:用事先设计好的2条寡核苷酸链互相退火,替换pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中NotⅠ与HindⅢ间的部分;利用改构的真核表达载体,分别构建亲环蛋白A、胆绿素还原酶B和过氧化氢酶基因的重组真核表达载体,瞬时转染293T细胞后,用His标签抗体验证其表达。结果:测序结果证实已将预想的序列替换至pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中相应位置,改构为质粒pcDNA3.1(-)reconstruct;利用改构的真核表达载体表达了相应的目的基因。结论:改构的真核表达载体pcDNA3.1(-)reconstruct可以简化融合myc和His标签的目的基因克隆的过程,并且增加了限制性位点的可选择性。
- 钱晓龙周建光
- 关键词：改构
- 敲低前列腺癌相关基因PC-1的表达抑制前列腺癌细胞C4-2雄激素非依赖性生长
- 2010年
- 目的:研究敲低癌基因D52家族成员PC-1的表达对前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长的影响。方法:利用RNA干扰技术构建PC-1稳定低表达的C4-2细胞株;利用四唑盐(MTT)比色实验检测敲低PC-1基因表达对C4-2细胞雄激素非依赖生长的影响。结果:敲低PC-1表达抑制前列腺癌C4-2细胞的生长,并降低了C4-2细胞雄激素非依赖性生长的能力。结论:PC-1基因参与了前列腺癌向雄激素非依赖阶段发展和维持的过程,为进一步研究PC-1在促进前列腺癌细胞发生发展过程中的作用奠定了基础。
- 俞岚钱晓龙施庆国李山虎王洪涛王乐乐周建光
- 关键词：前列腺癌RNA干扰
- PC-1在前列腺癌细胞中促进c-myc基因的表达被引量：2
- 2010年
- 前列腺癌相关基因PC-1(Prostate and colon gene1)是属于癌基因D52家族成员,具有促进前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长的功能。为了研究PC-1发挥这种生物功能的分子机制,文章在PC-1高表达的LNCaP-pc-1及对照LNCaP-zero细胞中,利用RT-PCR和Western blotting等方法检测c-myc基因表达;提取两细胞胞质和胞核蛋白,利用Western blotting分析c-myc上游调节蛋白β-catenin变化;利用c-Myc蛋白抑制剂10058-F4作用前列腺癌细胞C4-2,Western blotting检测PC-1蛋白表达变化。发现PC-1促进c-myc基因表达,并促进β-catenin入核;c-Myc蛋白抑制剂10058-F4可抑制PC-1的表达。结果表明:PC-1在前列腺癌中促进c-myc基因的表达,并且这种促进作用可能是通过Wnt/β-catenin信号通路实现的。同时,PC-1与c-Myc蛋白间可相互促进,进一步促进前列腺癌细胞雄激素非依赖性生长。
- 俞岚施庆国钱晓龙李山虎王洪涛王乐乐周建光
- 关键词：前列腺癌C-MYC基因Β-CATENIN蛋白
- 乳腺癌HER-2检测的概况与进展被引量：15
- 2014年
- 人类表皮生长因子受体-2(HER-2/neu)是乳腺癌重要的预后和HER-2靶向药物治疗的预测指标,准确检测乳腺癌患者的HER-2状态对临床诊疗具有重要意义。目前美国临床肿瘤学会(ASCO)和美国病理医师学会(CAP)推荐免疫组织化学(IHC)、荧光原位杂交(FISH)和亮视野原位杂交(BISH)3种HER-2检测方法。虽存在各自的优势和不足,但在少数情况下仍无法检测部分患者HER-2的状态。银增强原位杂交(SISH)、多重连接探针扩增技术(MLPA)、定量逆转录聚合酶链反应(Q-RT-PCR)和RNA原位杂交(RNA-ISH)等新的检测方法也不断应用到HER-2检测中,因其自身的独特优势,满足了部分患者的HER-2检测需求,因而有很好的临床应用前景。本文将对这些技术的特点及其优势和存在的不足进行综述。
- 耿强钱晓龙付丽
- 关键词：人类表皮生长因子受体-2乳腺癌
- 重组酶Exo、Beta和Gam在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：1
- 2010年
- 目的:构建exo、beta和gam基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达、制备重组酶Exo、Beta和Gam。方法:将exo、beta和gam基因分别构建在原核表达载体pEGKG和pET28a上,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中获得可溶性表达蛋白,用柱层析方法纯化蛋白。结果:构建了原核表达质粒pET28a-exo、pET28a-beta、pET28a-gam和pEGKG-exo、pEGKG-beta、pEGKG-gam;SDS-PAGE结果表明重组酶融合蛋白His-Exo、GST-Exo、His-Beta、GST-Beta、His-Gam、GST-Gam得到可溶性表达;用His标签抗体和GST标签抗体通过Western印迹方法检测到纯化后的融合蛋白。结论:在大肠杆菌中诱导表达了λ噬菌体重组酶,并纯化获得了一定量的纯度较好的蛋白,为下一步制备检测用多克隆抗体奠定了基础。
- 施庆国李山虎钱晓龙周建光
- 关键词：重组酶BETAGAM纯化
