范忠义
- 作品数：35 被引量：83H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 敲减人HPIP基因表达抑制细胞生长增殖被引量：3
- 2011年
- 为了探讨人造血相关的PBX相互作用蛋白质基因(HPIP)在肿瘤发生发展中的生物学作用,构建了HPIP小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,验证其敲减效果并观察其对细胞生长增殖的影响.根据人HPIP的cDNA序列,设计了含有小发卡结构的寡核苷酸序列,将其克隆到siRNA表达载体上;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过实时定量RT-PCR及Western印迹分析检测HPIP基因的表达水平;结晶紫实验及流式细胞技术检测敲减HPIP基因表达对细胞生长和增殖的影响,软琼脂实验检测对肿瘤细胞非锚定依赖性生长的影响.结果显示,构建的siRNA能够有效抑制HPIP基因的表达;结晶紫实验与细胞周期分析实验显示,siRNA介导的HPIP表达沉默导致细胞生长增殖的显著抑制,软琼脂实验结果表明,稳定转染HPIP siRNA能够抑制肿瘤细胞的锚定非依赖性生长.上述结果初步表明,HPIP siRNA能明显抑制肿瘤细胞的生长与增殖,可能是一个潜在的肿瘤治疗新靶点.
- 徐小洁王凌雪范忠义丁丽华张浩杨智洪李杰之叶棋浓
- 关键词：小干扰RNA细胞生长细胞增殖
- 人自噬相关基因12真核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2015年
- 目的:构建带myc标签的自噬相关基因12(ATG12)的真核表达载体,获得myc-ATG12融合蛋白。方法:以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增人ATG12编码序列,将其插入p XJ-40-myc载体构建重组质粒,转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测表达情况;将重组质粒与ATG3表达质粒共转染293T细胞,免疫共沉淀法检测二者的相互作用。结果:myc-ATG12真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后融合蛋白获得表达,其相对分子质量约17×103,可与Flag-ATG3结合。结论:构建并表达了带myc标签的人ATG12真核表达载体,为进一步研究ATG12在自噬中的功能奠定了基础。
- 纪贝贝张鹏徐小洁梁迎春黄蓉范忠义李玲郭靖洪甜叶棋浓杜楠
- 关键词：克隆真核表达自噬
- 调控DNA损伤修复基因的微小RNA被引量：1
- 2011年
- 随着对DNA损伤修复基因研究的深入,其信号转导路径及调控网络也进一步明了,调控DNA损伤修复基因的微小RNA(miRNA)也越来越多地被认识和发现。简要综述了DNA损伤途径中调控主要的损伤修复基因的miRNA,有助于深入阐明DNA损伤修复机制,为开发抗辐射药物和临床上DNA损伤修复异常相关肿瘤的基因治疗提供新的靶点。
- 范忠义徐小洁杜楠叶棋浓
- 关键词：DNA损伤修复基因微小RNA
- 人自噬相关基因5真核表达载体的构建及表达鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的:构建带Flag标签的自噬相关基因5(ATG5)的真核表达载体,获得Flag-ATG5融合蛋白。方法:以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增人ATG5编码序列,将其插入pc DNA3-Flag载体,转染人胚肾293T细胞后,Western印迹检测其表达情况;将该重组质粒与ATG12表达质粒共转染293T细胞,通过免疫共沉淀法检测2个蛋白的相互作用。结果:Flag-ATG5真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后融合蛋白获得表达,其相对分子质量约33×103;Flag-ATG5可与Myc-ATG12结合。结论:构建了带Flag标签的人ATG5真核表达载体,为进一步研究ATG5在自噬中的功能奠定了基础。
- 纪贝贝赵晖徐小洁梁迎春黄蓉范忠义李玲郭靖洪甜冀全博叶棋浓杜楠
- 关键词：克隆真核表达自噬
- 人LC3B基因的真核表达及鉴定
- 2015年
- 目的:构建带HA标签的重组人LC3B基因的真核表达载体,获得HA-LC3B融合蛋白,并初步检测其生物学功能。方法:从人乳腺文库中通过PCR技术扩增LC3B基因编码序列,将其插入pc DNA3.0-HA载体,获得HA-LC3B真核表达载体;将重组质粒与空载体分别转染人胚肾293T细胞,通过Western印迹检测转染细胞的表达情况,免疫共沉淀实验证实其生物学活性。结果:双酶切和测序结果表明HA-LC3B真核表达质粒构建成功,Western印迹表明重组质粒转染293T细胞后获得表达;免疫共沉淀实验显示HA-LC3B融合蛋白可以和Atg4B蛋白相互作用,具有较好的生物学活性。结论:在真核表达系统中表达了带HA标签的人LC3B,为进一步研究细胞自噬奠定了基础。
- 董倩徐小洁纪贝贝范忠义梁迎春王涛叶棋浓胡毅
- 关键词：克隆真核表达
- MiR-125a调控宫颈癌生长和转移的功能研究
- 宫颈癌是女性生殖系统的常见肿瘤，在女性恶性肿瘤发病率位于第三位，死亡率位于第四位。其中80％的病例发生于发展中国家。虽然放疗，化疗和手术治疗已经成为进展期病人标准的治疗方案，但其5年生存率仍不理想。淋巴结和远处脏器的转移...
- 范忠义
- 关键词：宫颈癌细胞生长肿瘤转移
- 人激活转录因子5基因真核表达载体的构建及其生物学功能研究
- 2014年
- 目的:构建带myc标签的人激活转录因子5(ATF5)的真核表达载体,获得myc-ATF5融合蛋白,并对其生物学功能进行初步检测。方法:以本实验室保存的带有XL5标签的ATF5质粒为模板,采用PCR技术扩增ATF5编码序列,将其插入pXJ-40-myc载体中,Western印迹检测其表达;将重组质粒与空载体分别转染人胚肾293T细胞,通过Western印迹和qRT-PCR检测其下游基因哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在蛋白和mRNA水平的变化。结果:双酶切和测序结果表明myc-ATF5真核表达质粒构建成功,转染293T细胞后获得表达;Western印迹和qRT-PCR证明myc-ATF5可升高mTOR的转录和蛋白水平。结论:构建了带myc标签的人ATF5真核表达载体,为进一步研究ATF5在自噬中的功能奠定了基础。
- 符静徐小洁刘家宏田沛荣范忠义吕朝晖王涛朱建华陆菊明叶棋浓
- 关键词：真核表达生物学功能
- 人组蛋白H1基因的原核表达、纯化及其活性检测被引量：8
- 2011年
- 目的:克隆人组蛋白H1全长编码区基因,获得其原核表达产物,并对融合蛋白进行纯化以及活性检测。方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人组蛋白H1全长编码区基因,将其克隆到pGEX-KG载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和珠对原核表达产物进行纯化,以SDS-PAGE和Western blot鉴定表达与纯化产物。结果:从人乳腺文库中扩增获得约650 bp的DNA片段,并成功克隆至pGEX-KG载体上,经测序与目的序列完全一致;在Rossate菌中诱导表达出相对分子质量(Mr)约为52 000的目的蛋白,经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白GST-H1,激酶实验证明该蛋白活性良好。结论:成功获得了活性良好的重组蛋白GST-H1,为后续研究细胞周期蛋白调控奠定了实验基础。
- 徐小洁范忠义王凌雪张浩丁丽华杜楠叶棋浓
- 关键词：原核表达纯化
- 一种小肽及其应用
- 本发明公开了一种肽及其应用。本发明提供的一种小肽，其氨基酸序列为<Image file="DDA0001185552760000011.GIF" he="57" imgContent="drawing" imgForma...
- 叶棋浓徐小洁李玲梁迎春范忠义
- 文献传递
- 人Six1真核表达载体的构建及应用被引量：3
- 2015年
- Six1（sineoculis homeobox homolog 1,Six1）是一种转录调控因子,属于同源盒基因家族成员,是转录因子E2F1的转录靶基因,激活G1/S期的转录,增加S期转录水平,并通过激活靶基因如细胞周期蛋白A1（cyclin A1）、cyclin D1等,启动靶基因转录,从而抑制与DNA结合能力,最后被蛋白酶水解[1]。当Six1过表达时,这一作用则被削弱,
- 周丽英徐小洁李玲王涛张立范忠义郑志兵叶棋浓
- 关键词：真核表达载体绿色荧光蛋白
