肖胜华
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
- 供职机构：福建农林大学更多>>
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- 相关领域：农业科学更多>>
- 一种检测甘蔗条纹花叶病毒的荧光定量RT-PCR试剂盒
- 本发明涉及一种检测甘蔗条纹花叶病毒的荧光定量RT-PCR试剂盒，包括：（1）阳性标准品；（2）阴性对照；（3）RT-PCR反应液；（4）反应酶混合液；（5）探针溶液；（6）无RNase水。本试剂盒对甘蔗条纹花叶病毒的检测...
- 高三基付卫林肖胜华刘营航陈复资陈如凯傅华英
- 文献传递
- 甘蔗黄叶病毒P0蛋白分子特性及其抑制RNA沉默活性
- 2014年
- 【目的】甘蔗黄叶病(yellow leaf,YL)是一种主要的甘蔗病毒病害,在全球多数甘蔗种植国家或地区普遍发生,已对甘蔗生产造成严重威胁。其病原为甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV),属于黄症病毒科马铃薯卷叶病毒属成员。研究SCYLV编码的沉默抑制子P0蛋白的分子特征、保守结构域及其在自然寄主甘蔗上抑制RNA沉默的功能,为下一步从RNA沉默水平解析SCYLV致病分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR克隆技术获得SCYLV中国分离物CHN-FJ4编码的RNA沉默抑制子基因P0及其两个缺失突变体P0Δ2-15(N端缺失15个氨基酸)和P0Δ155-256(C端缺失102个氨基酸),然后定向克隆到单子叶植物表达载体p Ubi-nos(空载体)上,获得重组质粒。利用甘蔗嫩叶组织瞬时表达系统鉴定病毒RNA沉默抑制子技术,结合Image J软件定量分析P0及其两个缺失突变体抑制外源基因EYFP瞬时表达活性的变化。番茄丛矮病毒(Tomato bushy stunt virus,TBSV)编码的P19作为沉默抑制子阳性对照。【结果】P0核苷酸序列的遗传进化分析结果显示,所获得的SCYLV病毒分离物CHN-FJ4为BRA基因型,与其他BRA基因型分离物氨基酸序列一致性为96.1%—98.4%。利用MEME在线软件预测P0蛋白的保守结构域,结果表明P0蛋白含有3个显著的保守区。分别位于第1—60、76—125和161—210氨基酸残基。通过Datamonkey在线服务器(http://www.datamonkey.org)提供的5种运算方法分析P0蛋白氨基酸位点的选择压力,结果显示P0蛋白具有8个氨基酸正向选择位点。将含有P0及其缺失突变体的重组质粒连同含EYFP报告基因的p TEM12质粒采用基因枪轰击法分别导入甘蔗嫩叶组织细胞,轰击后48—120 h,P0和P19逐渐地提高EYFP荧光表达点数和荧光表达水平;在120 h,与p Ubi-nos空载体(不含沉默抑制子)对照组相比,P0和P19均显著地提高甘蔗嫩叶组织EYFP荧光表达点数和荧光表达水平,分别达1.6倍和4.0
- 林艺华肖胜华刘营航陈建生傅华英陈如凯高三基
- 关键词：甘蔗黄叶病毒RNA沉默抑制子黄色荧光蛋白
- 一种检测和鉴定侵染甘蔗的不同高粱花叶病毒基因型试剂盒
- 本发明涉及一种检测和鉴定侵染甘蔗的不同高粱花叶病毒基因型试剂盒。本发明的试剂盒中至少包括SrMV-CPF和SrMV-CPR简并引物对，试剂盒内还有RT反应液、PCR反应液、限制性内切酶反应液、ExTaq酶液、 Nsi I...
- 高三基孙生仁高钰曹敏嘉陈如凯傅华英肖胜华陈曦
- 文献传递
- 一种检测甘蔗条纹花叶病毒的荧光定量RT-PCR试剂盒
- 本发明涉及一种检测甘蔗条纹花叶病毒的荧光定量RT-PCR试剂盒，包括：（1）阳性标准品；（2）阴性对照；（3）RT-PCR反应液；（4）反应酶混合液；（5）探针溶液；（6）无RNase水。本试剂盒对甘蔗条纹花叶病毒的检测...
- 高三基付卫林肖胜华刘营航陈复资陈如凯傅华英
- 文献传递
- 我国甘蔗锈病病原菌及甘蔗品系抗褐锈病基因Bru1的分子检测被引量：6
- 2016年
- 为了解我国甘蔗锈病病原菌发生以及优良甘蔗新品种(系)抗褐锈病基因Bru1的分布频率情况,以来自我国5省(区)81份疑似甘蔗锈病叶片样品为材料,分别用Pm1-F/Pm1-R和Pk1-F/Pk1-R引物对进行褐锈病菌(Puccinia melanocephala)与黄锈病菌(Puccinia kuehnii)分子鉴定。结果表明,锈病病原菌检出率为40.7%,除了福建省福州市叶片样品仅检测到P.melanocephala外,其他省(区)的叶片样品均检测到2种锈病病原菌,且存在混合侵染现象。对24份黄锈病菌阳性PCR产物(527 bp)克隆并测序,结果发现P.kuehnii间隔区1(ITS1)第183个核苷酸存在单核苷酸多态性(SNP),其中,A碱基(183A)、G碱基(183G)位点的病菌分离物分别占29.2%和25.0%,2种碱基(183A/G)位点的混合病菌分离物有45.8%。通过R12H16与9020-F4/Rsa I两种分子标记对40份甘蔗新品种(系)抗褐锈病基因Bru1进行分子检测,结果表明,42.5%参试新品种(系)含抗褐锈病基因Bru1,这些材料可作为甘蔗抗褐锈病新品种加以推广应用。
- 傅华英肖胜华刘营航孙生仁吴小斌陈如凯高三基
- 关键词：甘蔗锈病病原菌分子检测
