肖恒
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 融合肽CTP-OD1和CTP-OD2对K562和K562G01细胞凋亡作用及分子机制研究
- 2013年
- 目的探讨融合肽CTP-OD1和CTP-OD2对伊马替尼(imatinib)敏感和耐药的慢性粒细胞白血病细胞株(K562、K562G01)的促凋亡生物学效应及其分子机制。方法将CTP-OD1、CTP-OD2融合肽分别处理K562和K562G01细胞,用瑞氏染色和DAPI染色检测两种细胞的凋亡形态学变化;western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及pBcr-Abl、pStat5、pCrkL变化。结果 CTP-OD1和CTP-OD2处理K562和K562G01细胞后,胞浆出现空泡,细胞核碎裂,染色质浓缩、边缘化;western blot结果表明,与阴性对照组相比,融合肽处理组Bax蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2、pBcr-Abl、pStat5、pCrkL蛋白均表达减少(P均<0.05)。结论 CTP-OD1和CTP-OD2通过抑制Bcr-Abl激酶活性促进imatinib敏感株K562和耐药株K562G01细胞凋亡。
- 王海霞肖恒曹唯希陶崑刘鑫李会黄世峰冯文莉
- 关键词：融合肽细胞凋亡
- 一种杀伤慢性粒细胞白血病细胞的小分子多肽
- 本发明公开了一种杀伤慢性粒细胞白血病细胞的小分子多肽，其特征在于：由OD2和S5连接构成SAH-OD2。本发明一种杀伤慢性粒细胞白血病细胞的小分子多肽，具有制备简单，药物使用浓度低，稳定性高，OD2不需要连接转导肽CTP...
- 冯文莉王海霞曾建明黄世峰肖恒
- 文献传递
- 一种杀伤慢性粒细胞白血病细胞的小分子多肽
- 本发明公开了一种杀伤慢性粒细胞白血病细胞的小分子多肽，其特征在于：由OD2和S5连接构成SAH-OD2。本发明一种杀伤慢性粒细胞白血病细胞的小分子多肽，具有制备简单，药物使用浓度低，稳定性高，OD2不需要连接转导肽CTP...
- 冯文莉王海霞曾建明黄世峰肖恒
- 文献传递
- 融合蛋白TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD1-HA的原核表达、纯化及其生物学活性
- 2014年
- 目的原核表达、纯化融合蛋白TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD1-HA,并检测其生物学活性。方法以pET32a(+)CTP-OD-HA为模板,PCR扩增OD序列中的第1-87 bp和第190-216 bp序列,并通过重叠PCR连接成为新序列,命名为OD1,克隆至pET32a(+)载体,构建原核表达质粒pET32a(+)CTP-OD1-HA;再分别以pET32a(+)CTP-OD-HA和pET32a(+)CTP-OD1-HA质粒为模板,PCR扩增CTP-OD-HA和CTP-OD1-HA片段,分别克隆至表达载体pCOLDTF-DNA,构建质粒pCOLD-TF-CTP-OD-HA和pCOLD-TF-CTP-OD1-HA,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达TF-CTPOD-HA和TF-CTP-OD1-HA融合蛋白;表达的融合蛋白经镍离子亲和层析纯化和脱盐浓缩后,采用MTT法和DAPI染色检测两种融合蛋白对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。结果重组原核表达质粒pCOLD-TF-CTP-OD-HA和pCOLD-TF-CTP-OD1-HA经菌落PCR及测序证实构建正确;表达的TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD1-HA融合蛋白相对分子质量分别约为67 000和63 000,主要为可溶性表达,表达量分别占总菌体蛋白的35%和20%,脱盐浓缩后,纯度分别约为98%和95%,均可与鼠抗HA单克隆抗体特异性结合;TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD1-HA对K562细胞的增殖抑制率分别为34%和31%,与PBS对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001);TF-CTP-OD-HA和TFCTP-OD1-HA处理的K562细胞胞核均具有细胞凋亡的典型特征。结论原核表达并纯化了TF-CTP-OD1-HA融合蛋白,该蛋白具有与TF-CTP-OD-HA相似的生物学活性,为今后开发治疗慢性粒细胞白血病的小分子多肽药物提供了新的策略。
- 王海霞肖恒陶崑钟梁李亚娟黄世峰冯文莉
- 关键词：融合蛋白纯化生物学活性
- TF-CTP-OD_2-HA融合蛋白的原核表达及纯化被引量：3
- 2013年
- 目的构建pCold-TF-CTP-OD2-HA原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白。方法以前期构建的质粒p32a(+)CTP-OD-HA为模板,PCR扩增寡聚化结构域(Oligomerization domain,OD)中起关键作用的OD2基因序列,与胞浆转导肽(Cytoplasmic transduction peptide,CTP)和流感病毒血凝素抗原表位(Hemagglutinin,HA)连接后,克隆至pCold-TF-DNA质粒中,构建质粒pCold-TF-CTP-OD2-HA,同时构建质粒pCold-TF-CTP-HA作为对照。将两种质粒分别转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的融合蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果质粒pCold-TF-CTP-OD2-HA和pCold-TF-CTP-HA经PCR、双酶切和测序鉴定构建正确;表达的融合蛋白TF-CTP-OD2-HA和TF-CTP-HA相对分子质量分别约为63 000和58 000,两种融合蛋白均主要存在于破菌上清中,表达量分别约占菌体总蛋白的32%和25%,破菌沉淀中有少量表达;纯化的融合蛋白纯度均达95%以上,均可与鼠抗HA-tag多克隆抗体特异性结合。结论成功构建了pCold-TF-CTP-OD2-HA原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了融合蛋白,为后续研究其在CML中的作用机制奠定了基础。
- 肖恒王海霞陶崑钟梁黄世峰祖白玲冯文莉
- 关键词：慢性粒细胞白血病融合蛋白
- CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA融合肽对白血病K562细胞裸鼠皮下移植瘤的作用被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨细胞质转导肽-寡聚化结构域1-血凝素(cytoplasmic transduction peptide-oligomerization domain 1-hemagglutinin,CTP-OD1-HA)和CTP-OD2-HA融合肽对白血病K562细胞裸鼠皮下移植瘤的作用。方法:CTP-OD-HA(阳性对照)、CTP-HA(阴性对照)、PBS(空白对照)、CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA分别预处理K562细胞,并将其分别注射入裸鼠皮下,观察裸鼠皮下移植瘤的生长情况,TUNEL法检测移植瘤组织中肿瘤细胞的凋亡,免疫组织化学法检测肿瘤组织中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况。结果:CTPOD1-HA和CTP-OD2-HA处理组移植瘤体积明显小于CTP-HA组(P<0.05),且肿瘤细胞内出现空泡样凋亡改变。TUNEL法检测结果显示,CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA处理组肿瘤细胞的凋亡改变比CTP-HA组更明显(P<0.05)。CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA处理组肿瘤组织中凋亡相关蛋白Bax蛋白的表达水平明显高于CTP-HA组(P<0.05),而Bcl-2蛋白的表达水平明显低于CTP-HA组(P<0.05)。结论:CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA融合肽能够抑制K562细胞在裸鼠体内的致瘤能力,并促进肿瘤细胞凋亡。
- 肖恒王海霞陶崑钟梁黄世峰冯文莉
- 关键词：白血病
- CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA融合肽在K562细胞中的定位及其与BCR-ABL蛋白的相互作用被引量：2
- 2013年
- 目的研究CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA两种融合肽在慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞中的定位及其与BCR-ABL蛋白的相互作用。方法将前期制备的CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA融合肽转导入K562细胞,采用免疫荧光和Western blotting方法检测其入胞情况及胞内定位,His-pull down和CoIP实验检测融合肽与BCR-ABL的相互作用。结果免疫荧光检测显示CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA融合肽均能穿过细胞膜进入细胞并定位于胞质,Western blotting也同时检测到进入细胞质中的两种融合肽。His-pull down实验结果表明,CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA融合肽在细胞外均可直接与BCR-ABL蛋白结合,CoIP实验结果显示两种融合肽在K562细胞内也能与BCR-ABL蛋白结合并形成复合物。结论 CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA融合肽均能成功进入白血病K562细胞并定位于细胞质,且可与BCR-ABL蛋白发生相互作用。
- 肖恒王海霞陶崑刘鑫钟梁黄世峰冯文莉
