王青青
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：河北师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金河北省高等学校科学技术研究青年基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 巨大芽孢杆菌WSH-002丙氨酸脱氢酶066晶体制备及X-射线衍射分析（英文）
- 2015年
- 丙氨酸脱氢酶可逆催化丙氨酸脱氨生成丙酮酸,在氨基酸和酮酸的合成及代谢中至关重要.本研究通过PCR从巨大芽孢杆菌WSH-002中克隆并构建了丙氨酸脱氢酶基因(aldBM066)的原核表达载体,经原核表达后,采用Ni-NTA亲和层析法和阴离子交换色谱法纯化获得蛋白AldBM066,在289 K下以座滴法进行晶体生长条件筛选和制备.通过对蛋白质结晶条件的筛选,最终在蛋白质浓度为15 mg/mL及含有0.1 mol/L乙酸钠(p H 5.0)和2.4 mol/L甲酸钠的缓冲液中获得了理想的蛋白质晶体,晶体大小约为210μm×180μm×150μm,X-射线衍射数据显示,该蛋白质晶体衍射分辨率为2.88,空间群为三方晶系,晶胞参数为a=b=118.71,c=150.51,α=β=90°,γ=120°,每个不对称单位中含有1个AldBM066单体,马修斯系数为2.623/Da,溶剂含量约为53.02%.衍射数据的成功收集为解析巨大芽孢杆菌WSH-002中丙氨酸脱氢酶的三维结构奠定了前期基础,将有助于阐明以单体存在的丙氨酸脱氢酶的催化机制.
- 胡平雄王青青关婉怡鞠建松董辉徐书景
- 关键词：丙氨酸脱氢酶X-射线衍射
- 四氢嘧啶羟化酶的研究进展被引量：1
- 2014年
- 作为相容性物质,5-羟化四氢嘧啶不仅可以调节渗透压,还可以稳定蛋白结构,在医药、生物制造和化工行业具有广阔的发展前景。四氢嘧啶羟化酶属于Fe2+与2-酮戊二酸依赖型双加氧酶超家族,主要催化四氢嘧啶生成5-羟化四氢嘧啶。我们简要介绍了四氢嘧啶羟化酶的基因来源、活性检测、蛋白结构、催化机理及活性中心等方面的研究进展。
- 张庆王青青鞠建松徐书景
- 关键词：四氢嘧啶
- 假坚强芽孢杆菌铁蛋白基因的克隆与表达
- [目的]表达、纯化假坚强芽孢杆菌中铁蛋白，探究极端微生物中铁蛋白的作用。[方法]以假坚强芽孢杆菌基因组DNA为模板，通过PCR技术扩增获得铁蛋白基因(500bp)，将该基因与质粒pET22b连接，构建原核表达载体，表达、...
- 李莉王青青徐书景鞠建松
- 假坚强芽孢杆菌四氢嘧啶羟化酶的晶体制备及X-射线衍射研究（英文）被引量：1
- 2015年
- 【目的】假坚强芽孢杆菌四氢嘧啶羟化酶蛋白纯化、晶体制备及X-射线衍射研究。【方法】通过PCR从假坚强芽孢杆菌OF4中克隆获得四氢嘧啶羟化酶基因,构建原核表达载体,经过原核表达,采用Ni-NTA亲和层析法和分子排阻色谱法纯化蛋白,289 K下采用座滴法进行晶体筛选和制备,在低温100 K下通过X-射线衍射仪(Rigaku Micro Max-007 HF)收集晶体衍射数据。【结果】通过原核表达及纯化成功获得了适合晶体生长的蛋白Bp EctD。通过筛选最终在蛋白浓度为6.5 mg/mL及含有0.2 mol/L Mg Cl2·6H2O,0.1 mol/L Bis-Tris p H6.5,25%(W/V)聚乙二醇3,350的缓冲液中获得了理想的蛋白晶体,其大小约为360μm×240μm×60μm,并在100K下成功收集了衍射数据,晶体衍射分辨率为2.40,空间群为三斜晶系P1,晶胞参数为a=45.18,b=58.87,c=68.81,α=77.48°,β=86.03°,γ=66.97°,每个不对称单位中含有2个Bp EctD单体,马修斯系数为2.443/Da,溶剂含量约为49.53%。【结论】衍射数据的成功收集为假坚强芽孢杆菌OF4四氢嘧啶羟化酶三维结构的解析奠定了前期基础,将有助于阐明四氢嘧啶羟化酶的催化机制。
- 杨江丽王青青徐书景关婉怡赵宝华董辉鞠建松
- 关键词：X-射线衍射
