王玲玲
- 作品数：8 被引量：24H指数：3
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏高校优势学科建设工程资助项目江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学环境科学与工程生物学理学更多>>
- 镉损伤肝细胞体外模型的建立被引量：3
- 2013年
- 在建立大鼠原代肝细胞体外培养的基础上,研究了不同浓度的醋酸镉对肝细胞存活率的影响。在原代肝细胞体外培养的不同时间点(4、7、10、24 h),用不同浓度的醋酸镉(0、0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L)处理3 h,MTT法测定细胞的相对存活率。结果显示,随着镉剂量的增加,细胞的相对存活率降低。当醋酸镉浓度为4.0μmol/L,细胞的相对存活率为78.35%,与对照组有极显著性差异(P<0.01);用4.0μmol/L醋酸镉在不同时间点处理肝细胞,与对照组相比,细胞存活率均极显著降低(P<0.01)。表明镉损害肝细胞具有一定的浓度依赖性。
- 杨建泉倪慧王玲玲韩涛刘学忠
- 关键词：镉肝细胞
- 镉对体外培养大鼠肝细胞自噬的影响
- 2013年
- 选用体外培养原代大鼠肝细胞为模型,醋酸镉处理之后,用Western blot和免疫荧光法检测了自噬标记分子LC3的表达水平,在此基础上,利用自噬激活剂(雷帕霉素)诱导自噬水平的升高,用MTT法分析了镉对细胞存活率的影响。结果显示,原代大鼠肝细胞在体外培养过程中自噬水平具有缓慢上升的趋势,而镉处理延缓了这种趋势,降低了自噬的水平和细胞存活率;利用激活剂增强自噬后不能减弱镉的损伤,表明镉有可能通过抑制自噬的保护作用,造成对肝细胞的损伤。
- 朱家桥王玲玲程来洋王棋文王亨刘学忠刘宗平
- 关键词：镉自噬原代肝细胞
- 镉对体外培养大鼠肝细胞DNA甲基化的影响被引量：7
- 2014年
- 选用体外培养原代大鼠肝细胞为模型,用醋酸镉进行处理,用免疫荧光法检测了基因组DNA甲基化水平,用偏重亚硫酸氢盐测序法检测了MT、p53和Line1基因的DNA甲基化水平,用qRT-PCR检测了DNMTs基因的mRNA水平。结果显示,原代大鼠肝细胞在体外培养过程中基因组DNA甲基化水平具有缓慢下降的趋势,镉处理加速了这种下降的趋势;但p53、MT和Line1基因的DNA甲基化均未受镉的影响;维持DNA甲基化稳定的DNMTs表达水平受镉的影响呈现下降的趋势。表明镉对肝细胞的损害作用可能是通过降低DNMTs的表达水平,进而破坏基因组DNA甲基化的稳定来完成的;而镉对MT表达水平的影响似乎并非通过DNA甲基化途径来完成,因为在镉处理之前MT的DNA甲基化就已经处在较低的水平。
- 朱家桥王玲玲程来洋王棋文王亨刘学忠刘宗平
- 关键词：镉DNA甲基化原代肝细胞
- 原代大鼠肝细胞分离培养方法改良被引量：2
- 2013年
- 改进传统的两步原位胶原酶灌流法,调整灌流液及灌流条件,梯度离心纯化肝细胞。结果表明,分离出的大鼠肝细胞产量、纯度、活力均较高。该方法为一高效实用的原代大鼠肝细胞分离技术。
- 张义冉王玲玲王家晶姚路连顾建红刘学忠刘宗平
- 关键词：肝细胞灌流法
- 大鼠原代肝细胞培养方法的建立被引量：3
- 2013年
- 体外培养大鼠原代肝细胞的方法很多,但均存在一些缺陷。对胶原酶灌流法进行改良,采用细胞密度为6×105个/mL,细胞生长状态好,既能保证细胞活率,又能满足下一步试验要求。用胰酶代替胶原酶进行肝脏灌注,胰酶最适浓度为0.18%,且灌流时维持最适温度37℃,分离得到的肝细胞存活率大于90%,且纯度很高,是一种操作简便、细胞存活率和纯度较高的新的大鼠原代肝细胞体外培养方法。
- 倪慧王玲玲韩涛刘学忠
- 关键词：细胞培养
- 镉对大鼠肝细胞基因甲基化的影响
- 2013年
- 采用已建立的镉损伤肝细胞体外模型(4μmol/L醋酸镉处理3 h),通过偏重亚硫酸氢盐测序法和结合偏重亚硫酸氢盐的限制性酶切分析,研究镉对p53、MT和LINE1基因DNA甲基化的影响。结果显示,p53、MT和LINE1基因DNA甲基化均未受镉的影响。
- 倪慧王玲玲韩涛刘学忠
- 关键词：镉肝细胞基因甲基化
- 玉米赤霉烯酮对大鼠睾丸支持细胞Fas/FasL凋亡信号通路的影响被引量：5
- 2018年
- 为探讨玉米赤霉烯酮（zearalenon,ZEA）诱导睾丸支持细胞（sertoli cell,SC）凋亡的影响,试验以分离大鼠原代SC为材料,不同浓度ZEA处理SC 24 h,采用CCK-8法观察支持细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的影响,q RT-PCR检测Fas、Fas L转录水平的变化,Western-blot法检测Fas、Fas L等凋亡相关蛋白表达的情况。结果显示,与对照组相比,随着ZEA浓度的升高,睾丸支持细胞的活力受到明显的抑制（P〈0.05或P〈0.01）;流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,10、20 mol/L ZEA染毒组细胞凋亡率呈极显著升高（P〈0.01）;q RT-PCR结果分析显示,10、20 mol/L染毒组细胞Fas和Fas L转录水平呈显著或极显著升高（P〈0.05或P〈0.01）;凋亡相关蛋白检测结果显示,与对照组相比,5 mol/L以上ZEA染毒组Fas、Fas L、FADD、Cleaved-caspase8、Cleaved-caspase3蛋白表达均出现显著或极显著性升高（P〈0.05或P〈0.01）。结果表明,ZEA可以通过Fas/Fas L途径诱导睾丸支持细胞发生凋亡。
- 司梦雪刘利王玲玲王涛邹辉顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春
- 关键词：玉米赤霉烯酮睾丸支持细胞FAS/FASL途径
- 镉致大鼠BRL 3A细胞DNA及线粒体损伤被引量：4
- 2013年
- 为了研究镉对大鼠肝细胞系(BRL 3A细胞)DNA及线粒体损伤的作用,本研究选用0、10、20、40μmol/L的醋酸镉分别作用于BRL 3A细胞12h,利用四氮唑蓝比色分析法(MTT法)测定细胞存活率,显微镜观察各组细胞形态,通过彗星试验法检测细胞DNA的损伤,用透射电镜观察细胞线粒体超微结构,并检测细胞Caspase 3,9的活力。结果显示,随镉浓度的增大(10～40μmol/L),BRL 3A细胞存活率降低,拖尾率、尾长、尾部DNA含量、细胞Caspase 3,9的活力和线粒体变形肿胀以及空泡现象均呈增加趋势;表明镉可致BRL 3A细胞DNA及线粒体损伤,并呈剂量依赖关系。
- 张义冉胡迪王家晶王玲玲姚路连袁燕顾建红刘学忠刘宗平
- 关键词：DNA损伤线粒体损伤彗星试验
