王洪敏
- 作品数：10 被引量：80H指数：5
- 供职机构：南方医科大学分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒被引量：23
- 2003年
- 目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行测序鉴定。结果被检样品扩增出特异片段,经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列,证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。
- 王艳马文丽宋艳斌肖维威张宝黄海王洪敏马晓冬郑文岭
- 关键词：SARS冠状病毒
- 制备炭疽芽胞杆菌检测基因芯片的初步研究被引量：1
- 2004年
- 建立制备炭疽芽胞杆菌检测基因芯片的技术 ,并探讨研制检测炭疽芽胞杆菌基因芯片的方法。酶切炭疽芽胞杆菌的毒素质粒和荚膜质粒 ,通过建立质粒DNA文库的方法获取探针 ,并打印在经过氨基化修饰的玻片上 ,制成用于炭疽芽胞杆菌检测的基因芯片。收集了 2 90个阳性克隆探针 ,制备了检测炭疽芽胞杆菌的基因芯片。提取炭疽芽胞杆菌质粒DNA与基因芯片杂交 ,经ScanArrayLite芯片阅读仪扫描得到初步的杂交荧光图像。通过分析探针的杂交信号初步筛选出 2
- 马晓冬马文丽孙朝晖吕梁郑文岭王洪敏石嵘
- 关键词：炭疽芽胞杆菌基因芯片分子探针
- 应用PCR快速制备细小病毒B19诊断芯片探针(英文)被引量：3
- 2003年
- 目的制备细小病毒诊断芯片探针。方法利用Primer Premier 5.0针对细小病毒B19基因保守区域设计PCR引物,将PCR产物克隆pMD-18 T载体。结果序列分析显示,PCR产物均为细小病毒B19特异保守基因。结论利用PCR扩增产物制备诊断芯片探针是一种简便有效的方法。
- 吕梁马文丽王洪敏马晓冬孙朝晖郑文岭
- 关键词：PCR细小病毒B19探针
- 痘苗病毒寡核苷酸检测芯片的设计及研制被引量：11
- 2004年
- 目的对痘苗病毒进行寡核苷酸检测芯片的初步研究,为建立寡核苷酸芯片检测该类病毒提供初步研究依据。方法根据痘苗病毒特异基因设计寡核苷酸探针,人工合成探针后制备寡核苷酸芯片。在病毒感染的不同阶段提取病毒样品DNA及阴性样品DNA,采用限制性显示技术标记,标记样品与芯片杂交后,用Agilent芯片扫描仪检测杂交结果。结果芯片与病毒样品杂交有较强的杂交信号,而与阴性样品杂交除阳性探针外均无信号。结论病毒样品与阴性样品杂交信号区别明显,在病毒感染的各个时段也都有明显的杂交信号,反映了寡核苷酸芯片具有较高的特异性和灵敏度。
- 王艳马文丽毛向明吴清华李凌王洪敏肖维威郑文岭
- 关键词：寡核苷酸痘苗病毒核酸探针DNA芯片疫苗天花
- 2型登革病毒检测基因芯片的研制被引量：7
- 2003年
- 利用长片断PCR扩增含几乎全长的2型登革病毒cDNA,酶切PCR扩增产物,通过建立2型登革病毒cDNA文库获取芯片探针.用点样仪将探针制备成2型登革病毒检测基因芯片.杂交时采用限制性显示(Re strictionDisplayRD)技术标记样品,ScanArray芯片扫描仪检测杂交信号.杂交结果显示,样品和2型登革病毒基因芯片杂交的敏感性强、特异性高.
- 肖维威马文丽王洪敏黄海王艳张宝郑文岭
- 关键词：基因芯片基因诊断2型登革病毒
- 两种氨基修饰的基因芯片表面制备方法比较被引量：5
- 2005年
- 目的探讨两种氨基化方法修饰玻片表面的过程及其在基因芯片制备中应用的可行性。方法玻片经清洗、硅烷化后,一种用多组分多氨化合物包被,经次亚苯基二异硫氰酸盐表面活化;另一种方法采用的包被剂是丙烯酸-丙烯酰胺单体,活化剂是碳二亚胺/N-羟基琥珀亚胺酯官能团分子。将被修饰好的玻片用于λ噬菌体基因组DNA芯片的制备,并进行杂交检测分析。结果经两种方法修饰后玻片表面分别形成分支结构和聚合物涂层,与商业化的芯片比较发现,两种芯片杂交、扫描检测后显示所得点阵的杂交信号均匀、稳定、清晰,杂交点饱满、同一性好。结论两种方法修饰的玻片用于制备基因芯片均取得了成功,其中丙烯酸-丙烯酰胺聚合物包被法处理过程简单、成本低廉、能大规模生产,是一种较理想的芯片表面制备方法。
- 吴清华马文丽王洪敏毛向明张宝李凌郑文岭
- 关键词：基因芯片Λ噬菌体
- 一种用于PCR模板制备的电泳产物简易回收方法被引量：3
- 2003年
- 为了探索一种简便、有效而且能从琼脂糖凝胶中大量回收用于第2次PCR扩增的DNA电泳条带的方法,采用刀片切胶法和牙签插胶法从琼脂糖中回收DNA,并进行了两种方法的比较.结果显示牙签插胶法回收的DNA用作第2次PCR的模板,获得了清晰、稳定的PCR产物电泳条带,用该法成功地制备了一批DNA微阵列探针.由此可见牙签插胶法是一种简便、快速、有效的用于PCR模板的DNA琼脂糖凝胶回收法.
- 王洪敏马文丽黄海郑文岭
- 关键词：回收方法聚合酶链反应DNA微阵列基因芯片
- 不同PCR联合用于鼠疫耶尔森菌的检测被引量：2
- 2003年
- 目的 建立一种用 4对不同引物快速鉴定鼠疫耶尔森菌的PCR方法。方法 分别采用 4对针对V抗原 ,caf1,pla和inv 4种基因的引物 ,在 4只管中进行相同循环参数的扩增。结果 用这 4对引物能特异性地扩增出鼠疫耶尔森菌 2 17,478,52 4,2 95bp的目的DNA片段。结论 该法可用于鼠疫耶尔森菌简便、快速和准确的检测。
- 黄海马文丽王洪敏董兴齐郑文岭
- 关键词：PCR鼠疫耶尔森菌聚合酶链反应
- 用巢式PCR方法制备基因芯片的探针被引量：5
- 2003年
- 制备出高纯度的探针,用于诊断基因芯片的打印.采用巢式PCR技术,M13作为外侧引物并自行设计内侧引物,扩增克隆在T载体上的基因片段.可制备出成分单一,上下游仅含19bp和20bp的短载体序列的探针,能使打印出的芯片得到较好的杂交效果.该法充分利用巢式PCR的优点,对制备探针的方法进行改进,且简便快速,能得到更高质量的探针,满足打印芯片的要求.
- 黄海马文丽王洪敏肖维威王艳郑文岭
- 关键词：巢式PCR基因芯片探针T载体
- 霍乱弧菌的致病性与流行性研究进展被引量：21
- 2003年
- 综述了近年来霍乱弧菌的致病性和流行性的研究进展 ,并讨论了流行性和致病性的关系 .编码霍乱毒素CT的基因ctxAB并不是霍乱弧菌基因组自身的成分 ,而是CTXΦ噬菌体基因组的一部分 .CTXΦ能特异性地感染并整合至霍乱弧菌的基因组 ,成为CTX原噬菌体 ;携带有CTX原噬菌体的霍乱弧菌在环境因素的诱导下 ,也能向外界分泌CTXΦ噬菌体 .RS1基因元件与CTX基因元件在染色体位置上紧邻 ,它们在功能上也紧密相关 ,RS1元件能利用CTXΦ的基因形成一个丝状噬菌体RS1Φ ,并能向细胞外分泌 ,进行水平传播 ;VPI来源于VPIΦ ,VPIΦ能在霍乱弧菌的菌株之间传播 ;VPI是霍乱弧菌获得CTX基因元件的桥梁 .最近 ,又发现了两个与霍乱大流行相关的两个基因区域 ,VSP Ⅰ和VSP Ⅱ .
- 王洪敏马文丽郑文岭
- 关键词：霍乱弧菌流行性
