王婉
- 作品数：15 被引量：37H指数：4
- 供职机构：安徽理工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- pCMV-LC3-Ag85B重组质粒DNA疫苗对结核的免疫保护作用被引量：2
- 2014年
- 目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-Ag85B质粒免疫BALB/c小鼠。末次免疫2周后,Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用H37Rv标准株尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏结核分枝杆菌载量。结果 pCMV-LC3-Ag85B在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性。与pCMV-Ag85B免疫组相比,pCMV-LC3-Ag85B免疫组的IL-2、IFN-γ分泌显著增加,而肺和脾脏内结核分枝杆菌载量降低。结论 pCMV-LC3-Ag85B可显著增强Th1型免疫应答,并显示较好的抗结核分枝杆菌免疫保护效应。
- 胡东杨小康王婉邢应如王文洋杜昭弘尤其章力陈丽萍吴静张荣波
- 关键词：LC3AG85B免疫保护
- pET28a-PTD-Ag85B质粒构建及原核表达条件的优化被引量：1
- 2015年
- 目的构建p ET28a-PTD-Ag85B原核表达载体,并对其在E.coli BL21(DE3)中表达条件进行优化。方法将TAT-PTD序列插入到用限制性内切酶Nhe I和Bam H I双酶切的p ET28a质粒中,获得p ET28a-PTD重组质粒;RT-PCR法扩增Ag85B基因并将其克隆至p ET28a-PTD质粒中,获得p ET28a-PTDAg85B重组质粒。将重组质粒p ET28a-PTD-Ag85B转化至大肠杆菌,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导PTD-Ag85B融合蛋白表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达产物。筛选最适诱导剂浓度、诱导温度和时间,尿素复性包涵体,并用His-tag离子亲和层析柱分离纯化融合蛋白。结果成功构建p ET28aPTD-Ag85B重组质粒,在E.coli BL21中能高效表达PTD-Ag85B融合蛋白。结论成功表达及纯化了PTD-Ag85B蛋白,为获得大量PTD-Ag85B融合蛋白提供了技术储备。
- 杜昭弘王婉戴京京何江王文洋杨小康邢应如尤其穆敏胡东吴静张荣波
- 关键词：AG85B原核表达融合蛋白
- 结核分枝杆菌分泌性酸性磷酸酶(SapM)抑制小鼠巨噬细胞自噬被引量：7
- 2016年
- 目的研究结核分枝杆菌分泌性酸性磷酸酶(Sap M)对小鼠巨噬细胞自噬的影响。方法分别用Sap M、渥曼青霉素、饥饿处理GFP-LC3-Raw264.7细胞。荧光显微镜下观察自噬体的形成,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ水平;再用Sap M处理GFP-LC3-Raw264.7细胞后加氯喹,Western blot法检测LC3Ⅱ水平。结果 Sap M和饥饿均导致GFP-LC3斑点增多和LC3Ⅱ水平增高,在Sap M处理的细胞中加入氯喹并没有引起LC3Ⅱ的进一步升高。结论 Sap M可阻断自噬体与溶酶体的融合,从而抑制小鼠巨噬细胞自噬。
- 胡东王婉赵润鹏徐雪维邢应如徐从景张荣波吴静
- 关键词：自噬
- SapM诱导的自噬体-溶酶体融合阻断依赖于SapM和Rab7的相互作用
- 2016年
- 目的研究Rab7在结核分枝杆菌毒力因子分泌性酸性磷酸酶(SapM)诱导的自噬体-溶酶体融合阻断中的作用。方法采用Rab7小干扰RNA(si Rab7)转染Raw264.7细胞,Western blot法检测P62蛋白水平。m Cherry-SapM转染Raw264.7细胞后免疫荧光检测SapM与Rab7共定位情况,免疫共沉淀分析SapM与Rab7的关系。用3种SapM的突变体SapM△ARCA,SapM△FRED和SapM△CT转染Raw264.7细胞,分析SapM的不同突变体与Rab7的关系。结果 si Rab7处理后,细胞P62水平显著增高;免疫组织化学染色结果显示SapM与Rab7在胞内共定位;免疫共沉淀分析显示SapM与Rab7可相互沉淀;3种不同突变形式的SapM中,只有SapM△CT不能与Rab7相互作用。结论 SapM诱导的自噬体-溶酶体融合阻断依赖于SapM与Rab7的相互作用。
- 胡东王婉赵润鹏徐雪维邢应如倪升发徐从景铁保贤张荣波吴静
- 关键词：自噬
- 稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株的建立被引量：5
- 2015年
- 目的建立能够稳定表达红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3(RFP-GFP-LC3)的小鼠RAW264.7巨噬细胞。方法构建含RFP-GFP-LC3基因的慢病毒重组质粒载体,将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,收集病毒上清后感染RAW264.7细胞。经嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株,用荧光显微镜和流式细胞术分析感染效率。饥饿处理稳定感染细胞,荧光显微镜下观察RFP-GFP-LC3斑点。结果成功构建了慢病毒p LV-CMV-RFPGFP-LC3,经感染和嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RFP-GFP-LC3-RAW264.7细胞;荧光显微镜和流式细胞术显示RFP和GFP荧光率均达到100%,饥饿处理后自噬斑点显著增多。结论成功建立稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株,为自噬研究建立了可靠细胞平台。
- 王婉张庆赵润鹏徐雪维邢应如张荣波吴静胡东
- 关键词：自噬慢病毒RAW264.7细胞
- LC3-LpqH增强Ag85B抗结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫保护作用被引量：2
- 2014年
- 目的探讨微管相关蛋白轻链3-脂蛋白前体-LpqH(LC3-LpqH)DNA佐剂对Ag85B抗结核分枝杆菌(MTB)DNA疫苗免疫保护作用的影响。方法分别用纯化的pCMV-Ag85B、pCMV-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-LpqH/pCMV-Ag85B、pCMV质粒DNA对BALB/c小鼠进行3次肌肉注射免疫。末次免疫2周后,ELISA检测血清中抗Ag85B IgG亚型及滴度。Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测血清白细胞介素2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用MTB标准毒株H37Rv尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏MTB载量并观察肺组织病理变化。结果与Ag85B免疫组相比,LC3-LpqH/Ag85B免疫组抗Ag85B的IgG2a水平显著提高,而IgG1水平显著降低,并伴随IL-2、IFN-γ分泌增加及IL-4、IL-10减少,肺和脾脏内MTB载量降低,肺组织病变程度减轻。结论 LC3-LpqH可显著增强Ag85B抗MTB疫苗的Th1型免疫应答,并显示较好的免疫保护效应。
- 胡东杨小康陈功吴静王婉戴京京陈天义张荣波
- 关键词：结核分枝杆菌DNA疫苗免疫保护
- Efficient induction of anti-tuberculosis immunity by a TAT-Ag85B fusion protein vaccine with T-bet in a murine model of tuberculosis
- The development of more effective anti-tuberculosis vaccines would contribute to the control of the global pro...
- 王婉
- 关键词：T-BETAG85B
- 文献传递
- Rab7在自噬体和溶酶体融合过程作用的研究进展被引量：4
- 2015年
- 自噬体与溶酶体的有效融合是细胞发挥自噬功能对细胞内多余物质进行降解和再利用的关键。自噬体与溶酶体的融合受控于复杂的信号通路网络,涉及多个环节及众多分子的协同作用,并与内吞机制有部分重叠。Ras相关蛋白7(Rab7,小GTP酶家族的成员)可能是自噬体与溶酶体的融合进程中最为重要的分子之一,在指导自噬体成熟、胞内负荷运输及与溶酶体的对接与融合过程中发挥重要调节功能。自噬体与溶酶体的融合障碍可引起先天性及适应性免疫应答异常,导致炎症、肿瘤及胞内微生物感染的加重。因此控制Rab7的活性可能成为治疗这些疾病的潜在靶点。
- 胡东王婉吴静张荣波
- 关键词：自噬溶酶体
- 一种多重PCR在败血症真菌检测中的应用
- 本发明名称为：一种多重PCR在败血症真菌检测中的应用。本发明涉及分子生物学技术领域。本发明公开了一种多重PCR体系对真菌性败血症进行快速诊断的方法。本发明设计了一种多重PCR体系，能够弥补已有真菌检测方法的不足，为发病急...
- 胡东张荣波吴静陈兆权刑应如杨小康何江王婉戴京京
- 文献传递
- 活性氧簇在白假丝酵母菌诱导RAW264.7细胞自噬中的作用被引量：5
- 2014年
- 目的探究活性氧簇(ROS)是否参与白假丝酵母菌诱导RAW264.7细胞的自噬活化并明确其来源。方法 RAW264.7细胞培养至对数生长期并分别以5种ROS生成系统抑制剂处理,白假丝酵母菌刺激细胞后采用二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)显示ROS水平,免疫印迹法检测LC3Ⅱ蛋白的表达量,免疫荧光技术观察LC3的表达与定位。结果白假丝酵母菌刺激后RAW264.7细胞的ROS与LC3Ⅱ表达水平显著升高,同时LC3呈斑点状聚集并与白假丝酵母菌共定位;NADPH氧化酶(NOX)抑制剂氯化二亚苯基碘鎓(DPI)处理后ROS与LC3Ⅱ表达量明显降低,并且LC3在细胞内弥散分布;其他药物处理后ROS水平无显著变化。结论在白假丝酵母菌作用下NOX来源的ROS介导了RAW264.7细胞的自噬活化。
- 杨小康何江张毅魏佳王婉胡东张荣波
- 关键词：自噬活性氧组分白假丝酵母菌NADPH氧化酶
