朱淑芬
- 作品数：5 被引量：24H指数：3
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家科技基础性工作专项国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒核酸检测标准物质的制备研究被引量：8
- 2012年
- 针对目前口蹄疫病毒核酸扩增检测缺乏标准物质的现状,以口蹄疫病毒亚洲Ⅰ型核酸为模板,分别设计引物扩增具有检测意义的5′端1nt～2208nt的片段(含完整的5′NCR)和3012nt～5155nt片段(含完整1D～2B区域),并克隆于pMD20-T。测序后采用体外转录方法制备2种RNA纯品,进行初步定量稀释后等量混合分装。采用荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验后,委托外部实验室对RNA片段进行拷贝数定值。结果显示,制备的标准品均匀性和稳定性良好。
- 吴亚琼高志强吴延功张鹤晓乔彩霞张利峰单虎尹燕博朱淑芬王慧珊
- 关键词：口蹄疫病毒核酸扩增标准物质
- 伪狂犬病毒gB基因在毕赤酵母中的表达及初步应用
- 伪狂犬病(Pseudorabies，PR)又称Aujeszky's病，其病原伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)是疱疹病毒科(Herpes viridae)，α-疱疹病毒亚科(Alpha herpe...
- 朱淑芬
- 关键词：伪狂犬病毒GB基因毕赤酵母免疫原性
- 文献传递
- 检测伪狂犬病毒gB基因荧光定量PCR方法的建立被引量：8
- 2012年
- 利用DNAMAN软件对GenBank登录的伪狂犬病病毒(PRV)各毒株gB基因序列进行比对分析,选择其保守区域设计合成特异性的引物和TaqMan探针,同时利用普通PCR技术扩增获得全长的伪狂犬病毒gB基因,并克隆到pMD20-T载体上作为阳性标准品。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了一种快速检测伪狂犬病病毒的荧光定量PCR技术。该检测技术具有较高的灵敏性、特异性和可靠性。对制备的pMD-gB阳性标准品的检测结果表明,所建立的伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR最低检测极限可达1.50×102拷贝/反应;同时相比于普通PCR方法其灵敏度高100～1 000倍以上,并且重复性好。在对60份临床样品的检测中,荧光定量PCR不仅检出了普通PCR检测为阳性的样品,且检出了2份普通PCR未检出的样品,进一步证实了该方法快速、灵敏性好,可用于PRV感染的早期快速定量检测和肉类食品进出口检疫。
- 朱淑芬朱瑞良乔彩霞高志强张利峰张鹤晓吴亚琼王慧珊
- 关键词：伪狂犬病毒GB基因荧光定量PCR
- 基于VP1重组蛋白的口蹄疫病毒O型间接ELISA检测技术被引量：2
- 2012年
- 采用RT-PCR方法扩增O型口蹄疫病毒VP1基因片段,将其克隆于pET-32a。将重组质粒转化宿主菌Rosetta,经1.0mmol/L IPTG诱导,外源基因获高效表达。通过Western-blot以及ELISA试验证明,重组VP1蛋白与标准阳性血清发生反应。以纯化的VP1蛋白作为检测抗原包被酶标板建立了检测口蹄疫病毒O型抗体的间接ELISA方法。对355份临床血清样品的检测结果显示,建立的方法与口蹄疫病毒O型液相阻断试剂盒符合率为98.87%。表明建立的方法能够用于口蹄疫病毒O型抗体的快速分型检测。
- 于军超张乐萃高志强张鹤晓马贵平蒲静张利峰吴亚琼王慧珊朱淑芬张伟谷强
- 关键词：VP1基因间接ELISA
- 猪传染性胃肠炎病毒与猪呼吸道冠状病毒荧光RT-PCR鉴别检测方法建立与应用被引量：4
- 2011年
- 本研究根据Genbank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和S基因保守区序列设计合成了两对引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测TGEV的方法。该方法能有效地鉴别序列密切相关的猪传染性胃肠炎病毒与呼吸道冠状病毒。与常规RT-PCR试验比较表明,所建立的荧光RT-PCR检测技术快速、敏感,检测时限3个小时以内,具有很好的特异性和重复性。通过对39份临床样品进行检测,结果表明所建立的检测方法直接检测样品中猪传染性胃肠炎病毒。
- 王慧珊高志强王金宝张鹤晓乔彩霞吴亚琼邢佑尚朱淑芬
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒猪呼吸道冠状病毒荧光RT-PCR
