於葛华
- 作品数：95 被引量：303H指数：10
- 供职机构：苏州大学医学部免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江苏省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 共刺激分子4-1BBL和B7-1对人T淋巴细胞的协同激发作用被引量：2
- 2003年
- 目的 :探讨 4 1BBL和B7 1这 2种共刺激分子在人外周血T淋巴细胞活化、增殖中的作用和机制。方法 :采用免疫磁珠阴性选择方法分离纯化人外周血T淋巴细胞 ;单向混合淋巴细胞反应 (MLR)分析共刺激分子对T细胞的激发作用 ;3H TdR掺入法测定细胞增殖 ;免疫荧光标记和流式细胞仪表型分析 ;ELISA检测细胞因子。结果 :经免疫磁珠阴性选择分离获外周血单个核细胞中的T细胞纯度 >90 %;人多发性骨髓瘤细胞株 (XG细胞 )转染 4 1BBL和B7 1cDNA后 ,细胞膜表面能稳定高表达这 2个分子 ,4 1BBL和B7 1转基因细胞也均能使同种异体T细胞发生活化、增殖、存活时间延长和介导细胞因子IL 2的分泌 ,且 2种共刺激分子具有一定的协同效应。结论 :4 1BBL和B7 1分子具有赋予XG细胞对T细胞的体外激发、促增殖和分泌IL 2的作用 ,4 1BBL和B7 1分子能产生协同效应。
- 沈丽琴徐颖邓忠彬於葛华张学光
- 关键词：共刺激分子4-1BBLB7-1人T淋巴细胞
- ITP患儿外周血免疫调节分子与临床的相关性
- 2007年
- 目的探讨共信号分子CD154、CD69在儿童ITP发病机制中的作用。方法采用免疫荧光流式术检测28例ITP儿童治疗前外周血CD4+T细胞表面CD154、CD69的表达。结果CD4+T细胞表面CD154的表达率为16.7%±8.1%,明显高于健康儿童CD4+T细胞CD154的表达(4.3%±2.9%),两者之间差异显著(P<0.05)。CD4+T细胞表面CD69的表达率为13.9%±7.1%,显著高于健康儿童CD69的表达(5.8%±2.9%),两者有显著差异(P<0.05)。结论细胞表面CD154水平的测定可以为ITP的辅助诊断、疗效估价和预后判断提供有价值的实验室参数。
- 谢秋徐敏樊一笋黄益萍於葛华殷昌硕张学光
- 关键词：ITP患儿免疫调节分子外周血CD4^+T细胞CD154CD69
- 人TACI-Fc融合蛋白对XG6细胞体外生长的调节作用被引量：1
- 2005年
- 目的建立人TACI-Fc基因转染细胞,获得该融合蛋白,研究其对多发性骨髓瘤细胞系XG6的生物学作用。方法利用RT-PCR方法从扁桃体细胞中克隆全长TACI cDNA片段,将该基因的胞外段sTACI与人IgG1Fc段连接到pcDNA真核表达载体上,使两者融合表达。脂质体法将重组质粒pcDNA-sTACI-Fc转入小鼠成纤维细胞系L929,ELISA法测定转染TACI-Fc基因的L929细胞培养上清中TACI2Fc的含量,培养上清经亲和层析柱纯化,获得纯化的融合蛋白TACI-Fc。然后应用台盼蓝染色活细胞计数和3H2TdR掺入法检测其对XG6细胞的生长和增殖的调节作用。结果经RT-PCR和ELISA方法检测表明,成功构建了稳定表达sTACI-Fc融合蛋白的基因转染细胞。基因转染细胞的培养上清经亲和层析柱纯化,得到TACI-Fc融合蛋白。体外检测其生物学活性结果表明,该融合蛋白可有效地阻断Blys对骨髓瘤细胞株XG6的促增殖作用。结论本实验成功地将TACI胞外段与人IgG1Fc段在真核细胞中进行融合表达,表达的蛋白质具有良好的生物学功能,这为进一步对TACI基因进行功能研究奠定了物质基础。
- 徐海燕王泳於葛华马泓冰徐颖施勤张学光
- 关键词：基因转染细胞增殖
- 两株抗人CD40配体单克隆抗体的制备及生物学特性的研究被引量：11
- 2002年
- 目的 :研制功能性抗CD4 0L单克隆抗体 ,探讨其生物学特性及其运用价值。方法 :采用B淋巴细胞融合、免疫荧光、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人CD4 0LmAb ,通过Daudi细胞生长抑制试验、混合淋巴细胞反应观察抗CD4 0LmAb的生物学功能。结果 :经表型分析、Westernblot和竞争抑制试验 ,证实mAbB1、mAb4F1是识别人CD4 0L分子的特异性单抗 ,且识别的位点不同 ;mAbB1、mAb4F1均能不同程度地拮抗CD4 0L TC介导的Daudi细胞生长抑制和抑制混合淋巴细胞反应。结论 :成功地获得两株能稳定分泌特异性抗人CD4 0L单克隆抗体的杂交瘤 (1B1、4F1) ,这两株单抗对CD4 0L的生物学功能具有明显的阻断作用 。
- 樊一笋张学光邱玉华朱华亭於葛华
- 关键词：生物学特性CD40L单克隆抗体DAUDI细胞混合淋巴细胞反应
- 共刺激分子在Graves病甲状腺组织中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的探讨共刺激分子在Graves病(GD)的甲状腺组织中的表达及其免疫病理意义。方法运用细胞培养、流式细胞术和RT-PCR技术,检测10例GD组织和10例非毒性甲状腺肿(NTG)组织中共刺激分子基因的表达水平,原代培养的甲状腺滤泡细胞(TFCs)共刺激分子的表达及细胞因子对其表面共刺激分子表达的调节作用。结果GD组织一系列共刺激分子基因的表达明显高于NTG组,其中共刺激分子CD40、CD40L、OX40L和ICOS基因表达尤为显著;炎症类细胞因子可上调原代培养的TFCs表达共刺激分子CD40和GL50。结论共刺激分子在GD组织异常表达,提示CD40-CD40L、ICOS-GI50及OX40-OX40L信号在GD的局部免疫病理过程中起重要作用。
- 陈蕾李廷居颂光於葛华蒋联吴敏张学光
- 关键词：共刺激分子GRAVES病甲状腺滤泡细胞
- Flt3配体重组腺病毒治疗小鼠胃癌的实验研究被引量：1
- 2006年
- Flt3配体（FL）是新的早期造血生长因子。研究表明。它能显著增加树突状细胞（DC）、自然杀伤细胞（NK）的数量和功能。DC和NK细胞在机体抗肿瘤免疫反应中起着关键作用，因此如何增加DC、NK细胞的数量和功能，一直是我们研究的热点。虽然Flt3有此作用。但其在体内表达的水平很低，时间短。不能达到抗肿瘤的需要，
- 匡玉庭郑世营李德春赵华汪良於葛华
- 关键词：FLT3配体病毒治疗抗肿瘤免疫反应胃癌小鼠造血生长因子
- 抗人4-1BB功能性单克隆抗体的研制及生物学特性研究
- 2007年
- 研制鼠抗人4-1BB功能性单克隆抗体及其在T细胞活化、增殖及信号转导中的作用。以小鼠肾肿瘤细胞转染人4- 1BB基因的细胞株4-1BB/293T为免疫原.采用B淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌特异性4-1BB单抗的杂交瘤细胞株。以体内诱生法产生腹水,Protein G亲和层析法进行纯化,快速定性试纸法鉴定单抗的亚类,MTT法检测单抗对T细胞的刺激作用,流式法检测单抗对T细胞凋亡的影响。结果显示:成功获得1株持续分泌特异性抗人4-1BB单抗的细胞株(命名为5D5).属于IgG2b。该单抗能特异识别人4-1BB分子,介导有效的共刺激信号,体外促进T细胞的增殖,抑制活化诱导的T细胞凋亡。总之,成功获得1株功能性4-1BB单抗,具有重要的研究和潜在应用价值。
- 田晓静周春刚李道明徐颖於葛华张学光顾宗江
- 关键词：4-1BB单克隆抗体T细胞
- 5株鼠抗人CD28单克隆抗体的研制及生物学特性的研究被引量：12
- 2005年
- 目的:制备鼠抗人CD28分子功能性单克隆抗体,研究其对T细胞活化、增殖及信号转导等方面的生物学效应。方法:以天然高表达CD28分子的人多发性骨髓瘤细胞株U266和小鼠淋巴瘤细胞转人CD28基因细胞株CD28-T分别作为免疫原和检测细胞株,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行单抗的研制;以快速定性试纸法鉴定单抗亚类;腹水诱生法和免疫亲和层析法进行单抗的制备和纯化;经间接免疫荧光法分析单抗对不同细胞膜表面CD28分子的识别;采用竞争抑制法分析单抗识别的抗原位点;利用3H-TdR掺入法分析单抗对PBTC的刺激效应和免疫荧光法分析PBTC活化前后的表型变化。结果:成功获得5株鼠抗人CD28功能性单克隆抗体,分别命名为2D5、2F5、3B6、3F8和8G8,其中2D5为IgG2a亚类,其余均为IgG1亚类;流式细胞仪分析结果显示,5株单抗均能良好识别CD28-T、U266、XG1和Jurkat细胞表面的CD28分子;竞争抑制试验表明,2D5和8G8能完全阻断标准抗人CD28单抗与U266膜CD28分子的结合,其余3株为部分阻断;3H-TdR掺入法实验结果表明,单抗8G8联合激发型CD3单抗能明显促进PBTC的增殖,刺激指数为7.4,活化细胞CD4、CD25、ICOS、41BB及OX40分子的表达上调。结论:5株单抗均为抗人CD28单克隆抗体,具有重要的基础研究及潜在的临床应用价值。
- 孙中文陶然陆艳红石云杰於葛华邱玉华张学光
- 关键词：CD28杂交瘤单克隆抗体增殖效应协同刺激分子
- PD-L1和PD-L2在树突状细胞上的表达及其生物学意义被引量：6
- 2004年
- 探讨小鼠髓系DC (CD8α )中PD L1和PD L2的表达及其在T淋巴细胞活化中的作用。采用mCD4 0L CHO和TNF α分别刺激凋亡肿瘤细胞负载DC 4 8h ;免疫荧光标记检测DC表型 ;RT PCR和realtime PCR检测PD L1和PD L2mRNA转录水平 ;ELISA测定IL 2的分泌水平 ;3 H TdR掺入试验和51Cr释放试验测定DC体外激发T细胞的增殖和细胞毒杀伤率。结果显示 :PD L1和PD L2随着DC的成熟呈上调表达 ,CD4 0配基化DC的PD L1和PD L2均为中度表达 ,TNF α激发的DC为高度表达 ,二者呈现差异性表达 (P <0 0 5 ) ;CD4 0配基化髓系DC分泌IL 2的量明显高于TNF α组 (P <0 0 5 ) ,体外刺激T增殖和激活CTL能力在CD4 0配基化DC组最高 (P <0 0 5 )。提示CD4 0配基化的小鼠髓系DC呈现PD L1和PD L2的中度表达 ,IL 2大量分泌 。
- 古涛李敏陈成朱一蓓周时勇周桓陈永井於葛华张学光
- 关键词：树突状细胞
- CD40信号对肺癌细胞化疗敏感性影响的实验研究被引量：3
- 2004年
- 目的 观察激发CD4 0分子对肺癌细胞的化疗敏感性影响。方法 以肺癌细胞株A5 4 9和SPC A 1为研究对象 ,以可溶性CD4 0配体 (sCD4 0L)及激发型CD4 0单克隆抗体 5C11处理A5 4 9和SPC A 1细胞 ,采用四氮唑盐(MTT)比色法比较CD4 0激发前后化疗药物顺铂 (DDP)或丝裂霉素 (MMC)对细胞增殖的影响 ,免疫荧光标记和流式细胞术测定激发CD4 0分子前后化疗药物对肺癌细胞的杀伤作用。结果 激发CD4 0分子可增强DDP及MMC对CD4 0表达肺癌细胞株A5 4 9增殖的抑制率 (P <0 .0 5 )以及增强DDP及MMC对该细胞株的杀伤效应 (P <0 .0 5 ) ;而CD4 0不表达细胞株SPC A 1经sCD4 0L或 5C11处理不能产生类似的作用。结论 激发CD4 0信号可引起CD4 0表达肺癌细胞A5 4 9对化疗药物DDP及MMC的敏感性增加 ,可能在肺癌的治疗中具有潜在的应用价值。
- 王天立黄建安於葛华雷伟张学光
- 关键词：CD40肺癌细胞株流式细胞术
