方晓明
- 作品数：6 被引量：35H指数：3
- 供职机构：浙江大学医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 5-氮-2′-脱氧胞苷对RKO结肠癌细胞株p16/CDKN2基因去甲基化的转录调节作用被引量：17
- 2003年
- 目的 探讨DNA 5′CpG岛去甲基化对RKO结肠癌细胞株p16 CDKN2抑癌基因的转录调控作用及对细胞株生长增殖的生物学影响 ,寻找抗癌治疗的新靶点。方法 用特异性DNA甲基转移酶抑制剂 5 氮 2′ 脱氧胞苷 (5 Aza 2′ deoxycytidine)作用结肠癌细胞株 72h后 ,甲基特异性PCR(Methylation specificPCR ,MSP)、T A克隆及DNA测序分析甲基化状态 ,四唑盐 (MTT)比色、逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)、荧光定量PCR(Real timePCR)、免疫组织化学染色 (IHC)及蛋白印迹 (Westernblot)检测用药前后RKO细胞株生长倍增时间以及对p16 CDKN2mRNA及蛋白表达的影响。结果 (1)未经 5 Aza deoxycytidine作用的对照组RKO细胞基因组DNA的胞嘧啶保持不变 ,而经 5 Aza CdR作用的RKO结肠癌细胞基因组DNA的胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶 ;(2 )与对照组相比 ,3组不同浓度 5 Aza 2′ deoxycytidine均能明显抑制肿瘤细胞生长 ,倍增时间分别增加了 1 4 9、1 6 4、1 87倍 ;(3)经 5 Aza 2′ deoxycytidine作用后 ,p16 CDKN2基因mRNA表达分别增加了 4 89、16 91、19 97倍 ,而DNA甲基转移酶mRNA表达显著降低 ;(4 )免疫组化染色和蛋白印迹均显示 ,经处理后的肿瘤细胞p16 CDKN2蛋白表达呈明显增强。结论 DNA异常甲基化与RKO结肠癌细胞有?
- 方晓明孙立峰彭佳萍董琦郑树
- 关键词：结肠癌CDKN2基因
- 原发性阑尾肿瘤临床误诊原因分析被引量：11
- 2004年
- 目的 探讨原发性阑尾肿瘤的误诊原因 ,提高阑尾肿瘤的急诊水平。方法 回顾性分析 2 7例住院手术并经病理确诊为阑尾肿瘤患者的临床资料。结果 2 7例阑尾肿瘤仅 2例术前获确诊。误诊为急性阑尾炎和慢性阑尾炎急性发作 16例 ,误诊为妇科肿瘤 3例 ,肠梗阻 4例 ,消化道出血 2例 ,误诊率 92 .6% ( 2 5 /2 7)。二次手术率为 2 9.6% ( 8/2 7)。病理诊断黏液腺癌 9例 ,类癌 7例 ,腺癌 3例 ,印戒细胞癌 2例 ,腺瘤 6例 (其中 2例发生恶变 )。术中可疑为肿瘤者行快速冷冻切片 ,病理检查确诊为恶性者行右半结肠切除术者 2 2例 ;良性肿瘤和肿瘤直径小于 1cm的类癌行阑尾单纯切除术者 5例。结论 阑尾肿瘤最易误诊为阑尾炎和慢性阑尾炎急性发作 ,对急诊患者应重视阑尾肿块的手术中探查及处理 ;对不能判定性质的肿块 ,术中应常规做冷冻切片行病理检查 。
- 刘建鲁令传方晓明郑树
- 关键词：原发性阑尾肿瘤类癌肿块临床误诊慢性阑尾炎急性发作病理检查
- 原发性阑尾肿瘤临床误诊原因分析
- 目的:探讨原发性阑尾肿瘤的误诊原因,提高阑尾肿瘤的急诊水平。方法:回顾性分析27例住院手术并经病理确诊为阑尾肿瘤患者的临床资料。结果:27例阑尾肿瘤仅2例术前获确诊。误诊为急性阑尾炎和慢性阑尾炎急性发作16 例,误诊为妇...
- 刘建鲁令传方晓明郑树
- 关键词：阑尾肿瘤误诊手术探查阑尾炎
- 文献传递
- SNC19/ST14表达对大肠癌细胞生物学行为的影响被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨SNC19/ST14表达对大肠癌细胞生物学行为的影响。方法 定向克隆法构建SNC19/ST14基因全长阅读开放框 (ORF)的真核表达载体 ;脂质体转染RKO结肠癌细胞株 ,筛选阳性克隆 ;用实时荧光定量聚合酶链反应、Western印迹和免疫组织化学法检测SNC19/ST14蛋白的表达 ;MTT法测定细胞的群体倍增时间 (TD) ;流式细胞仪测定细胞周期 ;罗丹明 鬼笔环肽标记细胞的骨架蛋白F 肌动蛋白 ,用激光共聚焦显微镜观察F 肌动蛋白的变化 ;并测定细胞对细胞外基质(ECM)的黏附能力。结果 成功构建了真核细胞表达载体 pSecTag2a SNC19/ST14 (ORF) ,并筛选到稳定表达SNC19/ST14蛋白的RKO SNC19/ST14细胞 ;观察到SNC19/ST14使细胞骨架蛋白F 肌动蛋白的排列发生改变 ,并使细胞对细胞外基质的黏附能力下降 ,但SNC19/ST14的表达对细胞增殖、凋亡和细胞周期影响不明显。结论 成功地使SNC19/ST14基因在真核细胞中稳定表达 ,并发现SNC19/ST14可能与细胞骨架蛋白F 肌动蛋白的聚集和极化有关 ,并可能通过此种作用影响到细胞对细胞外基质的黏附能力 ,但对细胞的增殖、凋亡及细胞周期影响不大。
- 孙立峰郑树史影方晓明葛维挺丁克峰
- 关键词：基因表达调控结肠肿瘤肌动蛋白类肿瘤生物学
- 原发性十二指肠恶性肿瘤67例诊断和治疗分析被引量：2
- 2004年
- 刘建林汉庭孙立峰方晓明刘金新郑树
- 关键词：原发性十二指肠恶性肿瘤预后
- 启动子区5′CpG岛去甲基化对人结肠癌细胞生物学表型的影响被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨DNA启动子区5′CpG岛甲基化状态与人结肠癌RKO细胞增殖凋亡等生物学特征的关系。方法:应用特异性DNA甲基转移酶(DNMTs)抑制剂-5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理肠癌RKO细胞72h,甲基化特异性PCR(methylation-specificPCR,MSP)及DNA测序法分析p16/CDKN2基因CpG岛甲基化状态;MTT、FCM、荧光染色及透射电镜检测启动子区去甲基化后细胞生长、形态和细胞周期凋亡的影响。结果:DNMTs抑制剂能较好地逆转启动子区胞嘧啶甲基化状态;CpG岛去甲基化后能明显地抑制肠癌细胞的生长,增加细胞群体倍增时间(P<0.01),诱导肠癌细胞凋亡,影响肠癌细胞周期分布,并具有良好的量效依赖关系。结论:通过逆转CpG岛高甲基化能有效地抑制肠癌细胞增殖,为临床治疗大肠癌提供新的作用靶点。
- 方晓明郑树陈功星孙立峰吕庆华
- 关键词：甲基化结直肠肿瘤脱氧胞苷
