徐雍 作品数:26 被引量:226 H指数:6 供职机构: 首都医科大学附属北京友谊医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 北京市科技新星计划 北京市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 化学工程 生物学 农业科学 更多>>
荧光定量聚合酶链反应检测基质金属蛋白酶组织抑制因子-1方法的建立 被引量:11 2005年 目的构建含有金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的重组质粒并以其为模板建立荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测TIMP-1的标准曲线,为荧光定量PCR准确检测TIMP-1奠定基础.方法提取大鼠星状细胞系HSC-T6的mRNA,经RT-PCR扩增TIMP-1基因后与pGMT-Vector 连接,转化到大肠杆菌DH5α,以筛选得到的阳性克隆质粒作为标准品进行梯度稀释,分别用Taqman荧光探针技术和SYBR Green I荧光染料技术进行荧光定量PCR检测,建立标准曲线,并对两者结果进行了对比.同时进行普通PCR检测,与荧光定量PCR方法检测结果进行比较.结果重组质粒经PCR扩增及序列测定,表明pGMT-TIMP-1基因已成功克隆.以不同稀释水平的标准品质粒进行荧光定量PCR扩增, 应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线的线性检测范围为7×104~7×108拷贝,检测灵敏度为7×104拷贝;应用SYBR Green I荧光染料技术的线性检测范围为7×106~7×108拷贝,检测灵敏度为7×106拷贝,且熔解曲线显示出现非特异性扩增;两种技术相对于普通PCR技术均具有定量功能.结论所构建的pGMT-TIMP-1基因荧光定量PCR检测标准品应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线线性关系好, 灵敏度和特异性高,准确可靠,此方法可作为荧光定量PCR检测TIMP-1基因的标准方法. 丛敏 阎钟钰 王萍 张岩 徐雍 卢炎 王宝恩 贾继东 尤红关键词:基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 荧光定量聚合酶链反应检测 荧光定量PCR方法 RT-PCR扩增 HSC-T6 SYBR 建立荧光定量聚合酶链反应检测金属蛋白酶组织抑制因子-1方法的研究 目的构建含有金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的重组质粒并以其为模板建立荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测TIMP-1的标准曲线,为荧光定量PCR准确检测TIMP-1奠定基础。方法提取大鼠呈状细胞系HSC-T... 丛敏 阎钟钰 王萍 张岩 徐雍 卢炎 王宝恩 贾继东 尤红文献传递 骨疏康对成骨细胞刺激作用的研究 被引量:38 2000年 目的 通过体外成骨细胞培养 ,观察补肾中药骨疏康对成骨细胞的直接刺激作用。方法 采用第 2代成骨细胞加入浓度为 5μg/ ml、10 μg/ ml、2 0 μg/ ml的骨疏康药液 ,测定 AKP、BGP、PDY的含量并进行细胞计数。结果 加药后细胞数随药物浓度增加而增加 ,AKP和 BGP水平也相应提高。2 0μg/ml组的 L AP和 BGP水平较 5μg/ ml组和 10μg/ ml组增加明显 ,有显著差异 P<0 .0 5。 PYD含量随药液浓度增加而减小 ,2 0μg/ ml组与 5μg/ ml组间有显著差异 P<0 .0 5。结论 认为骨疏康有直接刺激成骨细胞增殖及加强其活性的作用 ,这种作用随浓度增加而增大 ,浓度为 2 0μg/ ml时效果明显。骨疏康可能有抑制破骨的作用。 唐海涛 唐海 罗先正 徐雍 唐淑珍关键词:成骨细胞 体外培养 骨疏康 药理 中药 腺相关病毒为载体携带HBV抗原刺激树突状细胞引起特异性免疫杀伤作用 尤红 丛敏 刘天会 王萍 唐淑珍 徐雍 马红 贾继东 王宝恩 1.该研究系统观察了分别包装有HBV–C,S,X抗原的重组腺相关病毒刺激外周血单核细胞后,应用不同细胞生长因子,作用不同时间对其成熟为树突状细胞(DC)的影响,建立了一整套在体外分离外周血单核细胞进而以最优化方式培养为D...关键词:关键词:腺相关病毒 细胞毒性T淋巴细胞 乙肝病毒 腺相关病毒载体携带HBV抗原刺激树突状细胞引起特异性免疫杀伤 尤红 丛敏 刘天会 王萍 唐淑珍 徐雍 马红 贾继东 王宝恩 该项目所属“医疗卫生”技术领域。主要研究开发内容是应用腺相关病毒AAV为载体的重组病毒,将其分别携带有HBV的S,C或X基因,分别转化刺激人外周血培养的树突状细胞,观察感染转化效率和抗原的表达,以及由树突状细胞提呈抗原引...关键词:关键词:HBV抗原 腺相关病毒 树突状细胞 免疫杀伤 腺相关病毒介导的小干扰RNA对大鼠肝星状细胞金属蛋白酶组织抑制因子-1及基质金属蛋白酶13表达的影响 被引量:4 2007年 目的观察以腺相关病毒(AAV)为载体含有针对金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1具有较强抑制作用的小干扰RNA(siRNA)感染大鼠星状细胞系HSC-T6后TIMP-1及基质金属蛋白酶13(MMP13)的表达情况。方法将对大鼠TIMP-1基因具有最强抑制作用的一对siRNA,在体外构建为短发夹siRNA表达载体后,将其包装为重组AAV-rAAV/siRNA-TIMP-1/neo并感染HSC-T6,于感染后4周及12周应用荧光定量PCR方法及Western blot方法分别检测TIMP-1及MMP13mRNA及蛋白质表达情况。结果经PCR、酶切及序列测定证实抑制作用最强的1对siRNA在体外构建的shRNA表达载体成功克隆。将重组质粒包装成病毒后感染HSC-T6细胞,与对照组细胞相比,rAAV/siRNA-TIMP-1/neo感染组在感染后4周及12周细胞TIMP-1mRNA及蛋白质表达水平明显降低(P<0.01),而MMP13mRNA及蛋白质表达水平明显增高(P<0.01)。结论化学合成的siRNA在短时期内可有效地抑制TIMP-1基因的表达,重组病毒rAAV/siRNA-TIMP-1/neo可长期有效地抑制TIMP-1基因表达。 丛敏 刘天会 徐雍 卢炎 唐淑珍 刘晓明 王宝恩 贾继东 尤红关键词:金属蛋白酶组织抑制因子 小干扰RNA 腺相关病毒 肝星状细胞 表达细胞色素P2E1 C3A肝细胞系的建立及其对增殖的影响 被引量:2 2006年 细胞色素P450 2E1(Cytochrome-P450)2E1,CYP2E1)在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发病机制中发挥重要作用.CYP2E1广泛与细胞物质代谢,是否影响肝细胞增殖是一个值得探讨的问题,我们对CYP2E1对C3A肝细胞增殖的影响进行了初步探索. 刘天会 徐有青 尤红 徐雍 丛敏 王萍 贾继东 王宝恩关键词:细胞色素P450 细胞系 C3A 非酒精性 系统性红斑狼疮患者血清抗内皮细胞抗体检测的临床意义 被引量:3 1997年 检测系统性红斑狼疮患者血清抗内皮细胞抗体并探索其临床意义,实验结果表明,抗内皮细胞抗体与系统性红斑狼疮患者多数临床症状无关,与血管炎及狼疮性肾炎显著相关,且多见于狼疮性肾炎活动期,故可将抗内皮细胞抗体视为活动性狼疮性肾炎的标志之一。 徐雍 沈静关键词:系统性红斑狼疮 抗内皮细胞抗体 带HBV基因的重组腺相关病毒刺激树突状细胞引起特异性CTL杀伤作用的研究 目的研究腺相关病毒(AAV)为载体的含有HBV-S、C或X基因的重组病毒(rAAV-HBV-S、 C、X)通过刺激树突状细胞(DC),产生对HBV感染的靶细胞特异性的缅胞毒杀作用。方法分别构建含有HBV-S、C和X基因的... 尤红 丛敏 王萍 刘天会 唐淑珍 徐雍 卢炎 刘晓明 王宝恩 贾继东文献传递 以腺相关病毒为载体的小干扰RNA对肝星状细胞中金属蛋白酶组织抑制因子的抑制作用 被引量:1 2006年 目的观察以腺相关病毒(AAV)为载体含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1具有较强抑制作用的小干扰RNA(siRNA)感染大鼠星状细胞系HSC-T6后TIMP-1的表达抑制作用。方法针对大鼠TIMP-1 mRNA基因序列挑选一段22bp片段,在体外构建为短发夹siRNA (shon hairpin siRNA,shRNA)表达载体后,将其包装为重组AAV并感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后,于感染后30d及90d应用荧光定量PCR方法及Western blot方法分别检测TIMP-1 mRNA及蛋白质表达情况,同时通过PCR技术以感染后细胞的基因组DNA为模板扩增外源基因验证其长效表达。结果经PCR、酶切及序列测定证实含有siRNA-TIMP-1基因的重组AAV载体质粒已成功克隆。将重组质粒包装成病毒后感染HSC-T6细胞,与对照组细胞相比,感染后30d及90d细胞TIMP-1 mRNA水平明显降低(P<0.01),感染后30d TIMP-1蛋白表达水平较对照组细胞相比下降约60%,而感染后90d,TIMP-1蛋白表达几乎下降90%。PCR结果显示在重组病毒感染后90d细胞基因组DNA中仍可扩增出外源基因,证实外源基因可长期表达。结论重组病毒rAAV/siPtNA-TIMP-1/neo可长期有效地抑制TIMP-1基因的表达。 丛敏 王萍 刘天会 徐雍 卢炎 唐淑珍 刘晓明 王宝恩 贾继东 尤红关键词:金属蛋白酶组织抑制因子 小干扰RNA 腺相关病毒 肝星状细胞