- 人参皂苷Rg1调控辐射导致造血干/祖细胞衰老的机理
- 实验目的: 衰老相关研究是近年来生命科学的一个热点，老年性疾病的高发率及社会人口老龄化进程的不断加快，使得衰老相关机理的研究和延缓衰老的研究不再单单是一个医学问题，更成为一个社会问题。机体最基本的构成单位和功能单位是细...
- 张琛
- 关键词：老年性疾病人参皂苷RG1祖细胞细胞衰老DNA损伤
- 免疫磁性活化细胞分选方法优化及纯化后细胞的生物学特性检测被引量：13
- 2012年
- 目的:改良常规免疫磁性活化细胞分选(MACS)的分离纯化方法,提高分选后细胞的纯度并确保细胞仍具有良好活性及功能。方法:以干细胞抗原-1(Sca-1)标记的Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)为例,分别用改良后和常规MACS法分选出小鼠骨髓细胞Sca-1+细胞,流式细胞术检测两种分选方法获得Sca-1+细胞纯度;计算阳性细胞回收率;台酚蓝染色检测分选细胞存活百分率;CCK-8检测细胞增殖,混合造血祖细胞(CFU-Mix)体外培养评价分选Sca-1+细胞分化能力。结果:改良MACS法分选获得的Sca-1+细胞纯度达93%以上(常规MACS法仅为87%),阳性细胞的回收率可达73%(常规法仅为62.3%);细胞存活率、细胞增殖和CFU-Mix集落形成能力两种分选方法无明显差别。结论:改良法能明显提高细胞分选纯度及回收率,细胞活性和功能保持良好,值得各种细胞免疫磁性分选参考采用。
- 耿珊张琛刘俊刘典锋周玥王亚平
- 关键词：生物学特征
- 过氧化损伤及抗氧化能力时间动态变化与造血干/祖细胞衰老的相关性被引量：5
- 2013年
- 目的探讨增龄过程中小鼠Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)过氧化损伤及抗氧化能力的动态变化与其衰老的关系。方法 C57BL/6J雄性小鼠分为幼年组(3～4周龄),青年组(2月龄),中年组(6月龄),中老年组(12月龄),老年组(18月龄)。提取各组小鼠骨髓单个核细胞,免疫磁性吸附细胞分选法(MACS)分离纯化Sca-1+细胞群,WST法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)含量,TNB显色法检测细胞总谷胱甘肽(GSSG+GSH)含量,WST-1法检测超氧化物含量,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察各年龄组阳性细胞百分比,造血祖细胞混合集落培养比较各年龄组Sca-1+细胞形成集落能力。结果总SOD活力值、GSSG+GSH含量、超氧化物含量吸光度、MDA含量、SA-β-Gal阳性细胞百分比及混合集落形成率分别在幼年组为(27.51±1.11)U/g、(28.78±0.77)μmol/L、(0.114±0.005)、(2.06±0.54)nmol/mg、(2.26±0.65)%、(8.79±0.56);青年组为(38.23±3.50)U/g、(31.48±2.03)μmol/L、(0.109±0.005)、(0.81±0.35)nmol/mg、(9.08±2.74)%、(9.48±0.74);中年组为(28.85±0.65)U/g、(47.62±4.93)μmol/L、(0.133±0.002)、(2.69±0.62)nmol/mg、(11.58±0.89)%、(5.14±0.89);中老年组(12.67±0.89)U/g、(25.63±1.23)μmol/L、(0.151±0.009)、(11.44±1.19)nmol/mg、(35.34±2.50)%、(1.56±0.23);老年组为(17.52±1.27)U/g、(39.10±2.19)μmol/L、(0.141±0.005)、(7.06±0.95)nmol/mg、(15.76±1.23)%、(0.98±0.50)。结论随年龄增加Sca-1+HSC/HPC的SA-β-Gal阳性细胞百分比逐渐增高,混合集落形成能力下降,SOD活性、GSSG+GSH含量逐步降低,而超氧化物、MDA含量逐渐增加,提示在增龄过程Sca-1+HSC/HPC过氧化损伤,抗氧化能力逐渐降低是造血干细胞衰老的可能机制之一。
- 耿珊张琛徐春燕姜蓉王璐王建伟王亚平
- 关键词：祖细胞谷胱甘肽超氧化物
- 中医气虚血虚模型与造血干／祖细胞衰老
- 2012年
- 目的:构建中医"气虚血虚"模型,探讨造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老及检测相关生物学指标,为阐释中医"气虚血虚"的现代生物学机理和探讨"补气生血"药物的作用提供理论与实验依据。方法:6.5Gy的x射线一次性全身辐射C57小鼠,辐射6h内腹腔注射盐酸苯肼40mg/kg,建立"气虚血虚"模型(即骨髓抑制与贫血模型),分别在第3、7、14、28d观察小鼠的行为学变化、外周血象、骨髓单个核细胞总数、免疫磁性分选法分离鉴定小鼠Sca-1+HSC/HPC、检测骨髓单个核细胞数(MNCs)与造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)数量、衰老SA-β-半乳糖苷酶染色检测Sca-1+HSC/HPC阳性率、Sca-1+HSC/HPC细胞周期分布、脾指数与脾脏病理变化。结果:与对照组相比,在各时间段上模型组小鼠均表现出精神萎靡,行为迟缓,进食量下降等中医"气虚血虚"症候、外周血象各项指标降低,MNCs数下降,Sca-1+HSC/HPC数下降、SA-β-半乳糖苷酶染色阳性百分率(11.82±3.24)%,高于对照组〔(2.07±2.21)%,P<0.05〕、细胞周期G1期阻滞,G0/G1期比例为(86.70±3.79)%,高于对照组〔(69.31±3.07)%,P<0.05〕,S期比例减少、脾指数降低和脾脏退行性变化显著。结论:辐射和盐酸苯肼并用法可成功的建立中医"气虚血虚"动物模型,并导致造血干/祖细胞衰老。
- 刘典锋周王月蔡世忠何轩耿珊张琛孙可王亚平
- 关键词：衰老
- 氧化低密度脂蛋白诱导造血干细胞衰老及机制研究
- 探讨氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）体外诱导对小鼠造血干细胞（HSC）衰老的作用及可能机制。免疫磁性分选法分离纯化Sca-1+小鼠HSC,并与不同浓度ox-LDL共培养不同时间,通过观察细胞形态、衰老β-半乳糖苷酶、细胞...
- 张先平刘俊刘典峰耿珊张琛徐春燕王亚平
- 辐射损伤导致造血干/祖细胞衰老的机理研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨辐射损伤导致骨髓造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老的可能机制。方法雄性C57BL/6J小鼠随机分为辐照组和假辐照组,辐照组小鼠经6.5 Gy的X射线全身一次性辐照,假辐照组小鼠处理同辐照组,但不辐照。辐照后24 h免疫磁珠分选法分离并计数两组小鼠的Sca-1+造血干/祖细胞细胞(Sca-1+HSC/HPC),流式细胞术检测细胞周期,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老细胞百分率;混合造血祖细胞集落(CFU-Mix)培养观察分选细胞增殖分化能力,单细胞凝胶电泳(SCGE)检测辐照导致细胞的DNA损伤,RT-PCR检测细胞衰老相关基因p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA的表达;Westernblot法检测p16INK4a、p21Cip1/Waf1蛋白表达。结果免疫磁性分析法分离纯度的Sca-1+HSC/HPC可达94%,辐照后小鼠每支股骨的Sca-1+HSC/HPC数量急剧下降,细胞出现G1期阻滞;形成CFU-Mix集落数量和形成集落的细胞数明显降低;SA-β-Gal染色阳性率显著增高,彗星实验显示细胞拖尾明显延长;p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA表达明显增强,p16INK4a、p21Cip1/Waf1蛋白的表达水平上调。结论辐射导致HSC/HPC DNA的损伤和衰老相关生物学改变,p16INK4a-Rb和p19Arf-p53-p21Cip1/Waf1信号通路可能起一定作用。
- 张琛孙可耿珊刘典锋张先平刘俊徐春燕王建伟王亚平
- 关键词：造血干祖细胞电离辐照细胞衰老DNA损伤
- 人参皂苷Rg1诱导白血病K562细胞衰老及机理
- 探讨天然中药人参的有效成分—人参皂苷Rg1诱导白血病K562细胞衰老作用及其可能机制,为人参用于白血病的辅助治疗提供理论与实验依据。MTT比色法筛选人参皂苷Rg1抑制细胞增殖的最佳浓度及时间,并以此浓度和作用时间进行细胞...
- 刘俊蔡世忠张先平徐春燕刘典峰耿珊张琛王亚平
- 骨髓造血基质细胞衰老的动态生物学研究
- 本研究检测不同年龄段小鼠骨髓基质细胞衰老的生物学特征,探讨年龄与造血微环境衰老的动态生物学关系。小鼠按年龄分为:2～3周龄(A组)、6～8周龄(B组)、5～6月龄(C组)、11～13月龄(D组)和18～20月龄(E组)。...
- 张琛姜蓉耿珊孙可刘俊张先平王亚平
- Sca-1+造血干/祖细胞免疫磁性分选方法改良及其生物学特征
- 干细胞的分离纯化是研究其生物学与临床应用的重要基础,现应用最广泛的是MACS免疫磁珠分选技术,常规的磁性分选方法分选出的造血干细胞经常纯度低,回收率不理想,这些严重影响着后期对造血干细胞进行的各种实验研究的真实可信性。本...
- 耿珊张琛刘典锋张先平刘俊王亚平
- 造血干/祖细胞衰老的动态生物学研究
- 造血干细胞(HSC)衰老与机体衰老有密切的联系,但HSC衰老的动态生物学还未有相关研究报道。本研究探讨不同年龄小鼠HSC衰老的动态生物学,实验分2～3周龄(A组)、6～8周龄(B组)、5～6月龄(C组)、11～13月龄(...
- 耿珊姜蓉张琛刘典锋张先平刘俊王亚平
