张彩娥
- 作品数：29 被引量：44H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 加载HPV6E7抗原肽的HLA-A2单体及其四聚体的制备和鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的制备可生物素化的可溶性HLA-A2/HPV6E7单体,进一步组装成PE标记的可溶性HLA-A2/HPV6E7四聚体。方法以原核表达的sHLA-A2BSP为重链,β2m为轻链,与人工合成的HPV6E7(22-30)抗原肽(GLH-CYEQLV)利用稀释法进行共折叠复性得到单体。利用HLAI类分子单抗(W6/3)和抗Bzm抗体进行Westernblot和ELISA鉴定折叠产物的构象。以BirA酶对其进行生物素化,经过超滤离心后得到纯化的sHLA-A2/HPV6E7单体,再与Streptavidin-PE按4:1比例混合形成四聚体。结果该四聚体具有与HLA-A2阳性HPV6感染的CA患者的抗原特异性CTL结合活性。结论成功获得了天然构象的sHLA-A2/HPV6E7单体及PE标记的HLA-A2/HPV6E7四聚体。
- 张彩娥邓云华吴雄文梁智辉翁秀芳卢小玲夏芳珍钟茂华陆盛军
- 关键词：HLA-A2尖锐湿疣细胞毒性T细胞
- HLA-A*0206-BSP和-A*0207-BSP融合基因的构建与表达
- 2007年
- 采用RT-PCR技术从HLA-A*0206和-A*0207阳性个体的PBMC中分别克隆出HLA-A*0206和-A*0207基因的全长cDNA序列,构建HLA-A*0206和-A*0207克隆载体。再利用PCR技术从构建的克隆载体中扩增HLA-A*0206和-A*0207的α链(重链)胞外段序列,分别经双酶切置换本室保存的HLA-A*0201-BSP重组体中的HLA-A*0201胞外段序列,使HLA-A*0206和-A*0207与BirA酶底物肽(BirA substrate peptide,BSP)序列融合,构建HLA-A*0206-BSP和-A*0207-BSP融合基因的表达载体,经限制性酶切和DNA测序证实。然后将该表达载体转化E.coliBL21(DE3)后获得表达产物,通过体外稀释复性,初步纯化的表达产物通过ELISA和Western blot检测证明能够与β2微球蛋白(HLA I类分子轻链)及HLA-A2限制性抗原肽(HBV core 18-27)折叠形成具有HLA I类分子天然构象的抗原肽/HLA-A2复合物单体。为进一步构建HLA-A*0206和-A*0207四聚体,探讨相应HLA-A2亚型的功能特点提供了物质基础。
- 朱丽君梁兵梁智辉李佳楠张彩娥翁秀芳吴雄文
- 关键词：克隆
- 自身肽结合于HLA-A2分子上能够在体外诱导抗原肽特异性的同种T细胞
- 目的:证实通过长期混合淋巴细胞培养(LTMLC)方法能够诱生抗原肽／MHC复合物(pMHC)特异性的同种T细胞。方法:本研究利用仅表达HLA-A2、TAP缺陷的T2细胞,将酪氨酸激酶来源的自身抗原肽(Tyr369-377...
- 翁秀芳梁智辉卢小玲钟茂华陆盛军张彩娥梁兵邓靖吴雄文
- 关键词：特异性
- 文献传递
- 膜表达的HLA-G1对同种反应性PBMC分泌Th1/Th2型细胞因子的影响被引量：3
- 2005年
- 目的研究人脐静脉内皮细胞系(ECV304)表达的HLA-G1对同种异体外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2型细胞因子分泌的影响。方法采用脂质体介导的基因转染技术将pcDNA3-HLA-G1转入ECV304,以间接免疫荧光技术在蛋白质水平上检测HLA-G1分子在ECV304上的表达;以表达HLA-G1的ECV304作为刺激细胞,灭活后,与健康人PBMC共同培养,用ELISA检测上清液中Th1/Th2型细胞因子的浓度,观察HLA-G1对同种异体抗原激活的PBMC分泌Th1/Th2型细胞因子的影响。结果与转染pcDNA3空质粒的对照组相比,HLA-G1能使PBMC的IL-10分泌增加(P<0.05),而IL-2,IFN-γI、L-4分泌无明显影响。结论HLA-G1能引起由同种异体抗原激活的PBMC分泌IL-10增加,提示HLA-G1有可能使Th1/Th2型细胞因子向Th2型偏移。
- 杨惠军吴雄文张彩娥梁智辉韩军艳黄亚非龚非力
- 关键词：HLA-G1ECV304TH1/TH2型细胞因子
- 可溶性HLA-G1-肽复合物的体外折叠和鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的合成可溶性HLA-G1-肽复合物。方法利用原核高效表达的可溶性HLA-G1重链和轻链(β2m),在人工合成的HLA-G1限制性九肽(KGPPAALTL)存在的条件下,通过稀释复性折叠成可溶性HLA-G1-肽复合物。利用特异性抗体(W6/32及兔抗人β2m抗体)进行免疫印迹及酶联免疫吸附试验,检测稀释复性的折叠产物。结果折叠复合物含有35%可溶性HLA-G1-肽复合物、5%可溶性HLA-G1重链聚合体及60%复性的β2m3种成分。结论通过原核表达、体外折叠能够获得大量可溶性HLA-G1-肽复合物。
- 夏芳珍吴雄文钟茂华褚利霞翁秀芳张彩娥卢小玲梁智辉
- 关键词：MHCI类可溶性稀释复性
- 人源性Rab38荧光融合蛋白表达载体的构建及功能鉴定
- 2016年
- 目的构建人源性Rab38与EGFP融合蛋白表达载体pEGFP-Rab38,观察Rab38在人黑素细胞瘤细胞系A375中的细胞定位情况,为进一步研究Rab38在黑素代谢中的作用提供实验依据。方法收集A375细胞,提取总RNA并逆转录成cDNA。特异性引物PCR扩增Rab38片段并插入pEGFP-C3载体,随后转化至感受态大肠杆菌DH5α中,挑取单克隆菌落进行鉴定。将鉴定正确的重组表达载体转染A375细胞,检测细胞中Rab38和Tyrp1(酪氨酸酶相关蛋白1)的表达并观察Rab38的亚细胞定位。结果 pEGFP-Rab38重组质粒经菌液PCR、双酶切和测序鉴定正确;转染A375细胞后,激光共聚焦显微镜观察到Rab38定位于胞浆中,且大量聚集于细胞核周围;实时定量PCR和Western blot可检测出细胞中EGFP-Rab38融合蛋白的表达,且细胞中Tyrp1的表达明显升高。结论融合蛋白表达载体pEGFP-Rab38成功构建,观察了Rab38在细胞中的定位并初步研究了其对黑素合成关键蛋白Tyrp1的影响,为进一步研究Rab38在黑素代谢中的作用奠定了良好的基础。
- 李宏文刘晓丽张艳红邓云华张彩娥
- 关键词：重组质粒亚细胞定位
- 血管内皮细胞系表达的HLA-G1抑制同种T细胞增殖及活性被引量：2
- 2005年
- 目的研究血管内皮细胞系人脐静脉内皮细胞(ECV304)表达的HLAG1分子对同种异体T细胞增殖的作用。方法采用脂质体介导的DNA转染技术,将构建的真核表达质粒pcDNA3HLAG1转染ECV304,用免疫荧光法检测其表达的HLAG1分子。将表达HLAG1的ECV304与同种异体T细胞进行混合细胞培养后,用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测ECV304表达HLAG1对外周血T细胞增殖和抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的影响。结果ECV304转染pcDNA3HLAG1后可稳定表达HLAG1分子;转染空质粒pcDNA3和转染pcDNA3HLAG1的T细胞的刺激指数分别为(1.59±0.41)和(1.33±0.46),二组比较,差异有统计学意义(P<0.05);细胞毒实验显示,抗原特异性CTL对转染空质粒pcDNA3和转染pcDNA3HLAG1的ECV304的杀伤率分别为(64.81±3.07)%和(52.33±4.48)%,二组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HLAG1分子可以抑制同种异体T细胞的增殖和CTL的细胞毒作用。
- 张彩娥邓云华吴雄文韩军艳杨惠军梁智辉龚非力
- 关键词：HLA内皮血管T淋巴细胞
- 性病恐怖症之社会因素初探被引量：5
- 2001年
- 为明确与性病恐怖症发病相关的社会因素 ,文章对 6 2例性病恐怖症患者进行了问卷调查 ,结果表明 :对性病患者及其亲属排斥的社会氛围、不规范宣传资料及医务人员不良语言或行为等刺激是主要影响因素。为避免这些因素的影响 ,应加强性知识和性病知识的社会宣教、规范化管理相关广告、严格整顿和管理性病医疗市场。
- 邓云华张彩娥
- 关键词：性病恐怖症社会因素健康教育性知识
- HGPRT缺陷型T淋巴瘤细胞系的建立与鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的通过突变诱导次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型的T淋巴瘤细胞系,为制备T细胞杂交瘤提供利于筛选的亲代细胞。方法通过乙基甲磺酸对Jurkat细胞进行突变,逐步提高培养液中6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的浓度,筛选出对6-TG具有稳定抗性的单克隆细胞株Jur16-TG细胞。比较Jurkat细胞与Jur16-TG细胞在含6-TG培养液和HAT培养液中的生长情况。结果在含20μg/ml 6-TG的培养液中,Jur16-TG细胞能够稳定生长,而Jurkat细胞在培养1周后基本死亡。在HAT培养液中氨基喋呤的浓度为4×10-8mol/L或8×10-8mol/L时,Jur16-TG细胞4 d内基本死亡,而Jurkat细胞至少能存活7~10 d。Jur16-TG细胞与正常外周血淋巴细胞(PBL)的融合实验显示,35%的Jur16-TG细胞与PBL融合。结论突变筛选出的单克隆细胞株Jur16-TG具有6-TG抗性和在HAT培养液中不能生长的特性,证实该细胞为HGPRT缺陷型细胞株,并且该细胞株可有效地与原代淋巴细胞融合,从而为T细胞杂交瘤的制备提供了利于筛选的亲代永生化的T细胞。
- 翁秀芳吴雄文梁智辉陆盛军卢小玲张彩娥钟茂华陈雪玲龚非力
- 人工抗原提呈细胞的制备和应用的研究
- 2006年
- 目的制备人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cell,aAPC)并用它从HLA-A2阳性健康个体外周血单个核细胞(PBMC)中诱导和扩增特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法将HLA-A2-EBV四聚体分子和抗CD28抗体分子吸附固定在细胞大小的聚苯乙烯乳胶微球(5μm)表面制成aAPC；采用流式细胞仪表型分析；aAPC和HLA-A2阳性个体人外周血单核细胞进行混合淋巴细胞反应；用HLA-A*0201-EBV四聚体染色法检测特异性CTL的频率；应用细胞内细胞因子染色法检测特异性CTL功能性细胞因子IFN-γ的分泌；采用LDH释放法检测特异性CTL的特异杀伤活性。结果流式细胞仪分析显示微球表面吸附有HLA-A2-EBV四聚体分子和抗CD28抗体分子；四聚体检测及细胞内细胞因子染色法检测与经典细胞毒试验结果一致,结果表明aAPC在体外可诱导抗原特异性CTL的生成。结论aAPC制备成功,并在体外有效地诱导抗原特异性CTL的生成。
- 梁智辉卢小玲吴雄文翁秀芳张彩娥陆盛军夏芳珍龚非力
- 关键词：细胞毒性T淋巴细胞四聚体
