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拟南芥QRAP2基因的克隆、表达、DNA结合能力及体外转录活性分析被引量：4: 2005年; 通过对拟南芥ATH1基因芯片数据的分析,从拟南芥中鉴定到一个受干旱胁迫高水平诱导的cDNA片段,并用RACE方法获得了其全长cDNA.PCR及定量实时PCR分析表明,该基因在经干旱、紫外线照射、脱落酸、高盐以及水杨酸等胁迫条件处理后表达量均有显著提高,特别是干旱处理后短时间内表达量迅速提高,3h后即提高到对照样品的430多倍.通过多序列比对和系统进化分析,我们将该基因归于DREB亚家族.由于该基因编码蛋白含有典型的AP2/EREBPDNA结合结构域,并在N端有一段富含谷氨酰氨残基的区域,所以将它命名为QRAP2(Glutamine-richAP2).凝胶阻滞实验结果显示,QRAP2蛋白能够特异结合DRE顺式元件序列但不能与mDRE和GCC等非相关元件结合.酵母单杂交实验表明,QRAP2蛋白全长序列或其N端112个氨基酸与GAL4DNA结合结构域形成的融合蛋白表现出转录激活功能,而其C端135个氨基酸与GAL4DNA结合结构域的融合蛋白则没有表现出转录激活活性.现有资料的分析表明,QRAP2是AP2/EREBP转录因子家族的新成员,可能在干旱胁迫条件下参与激活相关下游基因的表达.; 魏刚雷娟巩威朱玉贤; 关键词：DREB 酵母单杂交 CDNA片段体外转录拟南芥活性分析

水稻肉桂酰辅酶A还原酶基因的克隆与表达分析被引量：9: 2003年; 用现有的OsCCR基因片段筛选水稻核DNA文库,获得了长为3045 bp的核DNA.它包含4个内含子和5个外显子,推测的可读框长为337个氨基酸.OsCCR与其他植物中同类酶在氨基酸水平上有70％的相似性和30％的相同性,含有保守的辅酶Ⅱ(NADP)结合位点及可能为该酶催化位点的特征序列.Northern杂交证实,该基因产物广泛存在于水稻根、茎和叶等各组织中,在茎中表达量较高.组织原位杂交结果表明,OsCCR基因在维管束及新生侧根中有强烈的表达信号,与该基因编码的酶的木质素合成特性相吻合.OsCCR基因的克隆、组织定位及生物化学方面的研究将有助于深入了解木质素形成的分子机理,并为通过遗传工程的手段改善植物的机械性能以获得低木质素纸浆原料打下基础.; 白勇巩威刘天昀朱玉贤; 关键词：水稻肉桂酰辅酶A还原酶克隆基因表达维管束

利用Gateway克隆技术大规模克隆拟南芥转录因子被引量：27: 2004年; 随着越来越多基因组全序列的测定完成,基因组的研究进入了功能研究阶段。功能基因组的研究需要把大量基因连入不同载体,传统的酶切连接构建载体的方法不能满足这种大规模克隆的需要。Gateway技术是一种高效的大规模克隆系统,而且对载体和宿主没有依赖性。本文利用Gateway大规模克隆技术将16个拟南芥转录因子的ORF克隆入植物表达载pPTV和酵母表达载体pYTV中,酵母融合表达实验和West-ern-blot检测证明了该克隆途径的可行性,并且得到的His-Tag融合蛋白,为拟南芥转录因子的大规模蛋白质组学研究奠定了良好的基础,同时基因序列的聚类分析为将来进一步的功能研究提供了有利信息。; 梅文倩宋文强潘怡巩威朱玉贤; 关键词：拟南芥转录因子聚类分析功能基因组

利用蛋白芯片进行拟南芥转录因子性质研究: 本文首先进行了拟南芥转录因子开放阅读框的大规模克隆。一共有1282个转录因子的ORF(开放阅读框)被高通量克隆入pENTR载体(其中有994个克隆由国内其它8个实验室联合完成)，其中有411个基因的cDNA是首次被克隆。...; 巩威; 关键词：拟南芥转录因子蛋白芯片; 文献传递

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巩威