宋红卫
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：东北林业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 绵羊成纤维细胞及精子Sox2基因启动子甲基化状态检测被引量：1
- 2020年
- 为了探明绵羊成纤维细胞及精子中Sox2基因启动子甲基化状态的差异,试验对绵羊Sox2基因启动子进行序列查询和甲基化岛分析,提取绵羊成纤维细胞和精子基因组,用重亚硫酸盐处理,进行甲基化特异性PCR、连接和酶切鉴定,最终分别随机选取10个测序结果进行甲基化状态分析,比较二者的甲基化状态。结果表明:在精子的350个甲基化位点中,有194个位点处于非甲基化状态,156个位点处于甲基化状态,甲基化率为44.6%;在成纤维细胞的350个甲基化位点中,93个位点处于非甲基化状态,257个位点处于甲基化状态,甲基化率为73.4%;χ~2检验表明二者的甲基化状态差异极显著(P<0.01)。说明绵羊精子和成纤维细胞的Sox2基因启动子区域甲基化状态存在较大差异。
- 陈胜男宋红卫李松美朴善花王春生
- 关键词：绵羊精子启动子DNA甲基化
- MSTN基因敲低绵羊成纤维细胞株的筛选被引量：1
- 2014年
- 为了获得绵羊MSTN基因敲低成纤维细胞株,克隆获得MSTN基因序列构建其真核表达载体;设计合成并筛选3种MSTN基因干涉序列(M1、M2和M3),构建相应的3种RNA干涉载体;将MSTN基因真核表达载体单独或分别与3种RNA干涉载体共转染绵羊成纤维细胞后,分别检测其对MSTN基因表达的干涉效率以获得最佳的MSTN基因RNA干涉载体;将筛选的RNA干涉载体线性化后转染绵羊成纤维细胞,通过筛选获得转基因细胞株。结果显示,成功克隆得到与GenBank中序列同源性为100%的绵羊MSTN基因序列,并获得真核表达载体pcDNA3.1(+)-MSTN;构建获得MSTN基因RNA干涉载体pRNAT-M1、pRNAT-M2和pRNAT-M3;与单独转染pcDNA3.1(+)-MSTN后293GP细胞中MSTN基因的相对表达量相比,转染干涉载体后MSTN基因相对表达量明显下降,其中pRNAT-M1干涉效率最佳;将pRNAT-M1线性化后转染绵羊成纤维细胞并利用G418筛选获得转基因阳性细胞;获得的转基因阳性细胞的细胞形态、生物学特性均呈现正常;PCR检测结果显示,pRNAT-M1已整合到细胞基因组中。上述结果表明,成功获得了MSTN基因敲低的绵羊成纤维细胞株。
- 李昊薛超张秋婷王春生朴善花宋红卫安铁洙
- 关键词：绵羊成纤维细胞MSTN基因RNA干涉转基因细胞
- 哺乳动物DNA甲基化及其在体细胞诱导重编程中的作用被引量：3
- 2014年
- 诱导多能干细胞(Induced pluripotent stem cell,iPS)技术提供了将终末分化的细胞逆转为多潜能干细胞的可能,在干细胞基础理论研究和再生医学中具有重要意义。然而,目前体细胞诱导重编程方法效率极低,常发生不完全的重编程。研究表明,在不完全重编程的细胞中存在体细胞的表观遗传记忆,而DNA甲基化作为相对长期和稳定的表观遗传修饰,是影响重编程效率和iPS细胞分化能力的重要因素之一。哺乳动物DNA甲基化是指胞嘧啶第五位碳原子上的甲基化修饰,常发生于CpG位点。DNA甲基化能够调节体细胞特异基因和多能性基因的表达,因此其在哺乳动物基因调控、胚胎发育和细胞重编程过程中发挥着重要作用。此外,异常DNA甲基化可能导致iPS细胞基因印记的异常和X染色体的失活。文章重点围绕DNA甲基化的机制、分布特点、及其在体细胞诱导重编程中的作用进行了综述。
- 宋红卫安铁洙朴善花王春生
- 关键词：DNA甲基化诱导多能干细胞体细胞重编程
- 绵羊Oct4基因启动子序列的克隆及其与猪和牛序列的比较分析
- 2016年
- 为探明绵羊Oct4基因启动子的结构特点,用PCR方法克隆获得了绵羊Oct4基因启动子,并对绵羊、牛和猪Oct4基因的上游调控序列进行对比分析。结果显示,成功扩增获得长度为2 951 bp的绵羊Oct4基因启动子;绵羊、牛和猪Oct4基因的上游调控序列均含有4个保守区域(CR1–CR4),且4个保守区域在3个物种间具有高度同源性;CR1区域富含GC碱基对,且序列上的Sp1/Sp3位点与激素反应元件HRE在3个物种中具有100%的同源性;绵羊和牛、猪的上游调控序列富含GC,并存在大量的CCC(A/T)CCC位点。
- 李昊郭虎王春生宋红卫朴善花安铁洙
- 关键词：绵羊
- 转B2C/拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选
- 2016年
- 为了建立绵羊被毛特异表达蜘蛛拖丝蛋白基因的方法,研究利用前期工作获得的绵羊高硫角蛋白结合蛋白基因B2C启动子和人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体(2S),构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,进行线性化后,采用脂质体法转染进绵羊成纤维细胞并经G418筛选获得转基因阳性细胞,再进行PCR检测和冷冻复苏后进行生物学特性检测。结果表明:成功构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,将其整合入转基因阳性细胞的基因组中;转基因阳性细胞经冷冻复苏后,其细胞形态仍保持成纤维细胞的梭形形态,且在续培养中呈现正常细胞相近的"S"型生长曲线。说明试验成功获得转pc DNA3.1-B2C-2S绵羊成纤维细胞株。
- 安铁洙李昊王春生王子竹宋红卫郑仁玖朴善花
- 关键词：转染细胞株
