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姚丰华: 作品数：17 被引量：64H指数：4; 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏省属高校自然科学基础研究项目转基因生物新品种培育专项更多>>; 相关领域：农业科学文化科学生物学更多>>

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肠炎沙门氏菌SEF14菌毛体外表达条件研究: 2013年; 为筛选肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)SEF14菌毛体外表达的最适培养条件,本研究对4种不同培养条件下S.enteritidis SEF14菌毛的体外表达情况进行了比较研究,并通过RT-PCR、透射电镜与免疫电镜观察和SDS-PAGE等方法进行验证。研究表明,其中以TSB肉汤25℃震荡培养24 h后转接20℃继续震荡培养24 h,最后转接粘附因子抗原培养基(CFA)(pH6.0)于37℃静置培养50 h^60 h的SEF14菌毛表达量最高。RT-PCR结果显示在该培养条件下SEF14菌毛主要亚单位蛋白编码基因sefA mRNA表达水平最高,在透射电镜和免疫电镜下均可观察到丰富的SEF14菌毛。SDS-PAGE结果显示,所抽提的菌毛蛋白大小为14.3 ku,与相关报道一致,而且等量菌泥的抽提量最大。; 朱春红段晓丽厚华艳龚建森张江英姚丰华孟霞朱国强; 关键词：肠炎沙门氏菌 RT-PCR 电镜观察

肠炎沙门菌间接ELISA检测方法的建立被引量：3: 2010年; 本试验建立和优化了重组蛋白rSEFA介导的间接ELISA方法以特异性检测肠炎沙门菌感染血清。确定其抗原最佳包被量为7.5μg/mL,血清最适稀释度1∶100,作用时间为60 min;酶标二抗最适稀释度为1∶4 000,作用时间为60 min;判定标准为OD值≥0.346。基于rSEFA介导的间接ELISA有较好的特异性,能特异性识别肠炎沙门菌和都柏林沙门菌感染血清,不能识别相近的鸡白痢沙门菌感染血清,此方法与菌体凝集反应同时检测临床血清样品100份,二者阳性率分别为67%和54%,结果符合率为80.6%。这一方法的建立对肠炎沙门菌特异性抗体检测有潜在的应用前景。; 康孟佼朱春红蒋颖姚丰华吴娟段小丽朱国强; 关键词：肠炎沙门菌间接ELISA

肠炎沙门菌SPI-19编码的hcp基因的克隆、表达及多抗制备被引量：1: 2014年; 利用PCR方法扩增2株肠炎沙门菌参考株CMCC(B)50336和SD-2 SPI-19毒力岛内的hcp基因,将其序列鉴定后克隆入原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒pET28a-hcp,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导重组细菌高效表达;表达产物以包涵体的形式存在,变性条件下用镍亲和柱纯化得到重组蛋白,以每只50μg剂量免疫小鼠3次,间接ELISA测定抗体效价,用Western blot验证免疫血清的特异性。测序结果显示,2个参考株hcp基因的核苷酸序列与已发表序列的同源性为100%。SDS-PAGE显示20 ku重组蛋白,主要以包涵体形式存在,通过镍亲、层析和尿素变性/复性获得了可溶性的纯化蛋白;免疫小鼠第5周抗体效价达1∶8 000,且能特异性检测出SPI-19 hcp+肠炎沙门菌和鸡伤寒沙门菌中表达的Hcp蛋白。上述结果表明,制备的外源性重组蛋白具有较好的免疫原性和反应原性,为进一步研究Ⅵ型分泌系统Hcp蛋白在肠炎沙门菌中的功能提供了重要的生物素材。; 姚丰华张钰朱国强; 关键词：肠炎沙门菌克隆

肠炎沙门氏菌SEF14菌毛亚单位sefA和sefD基因缺失株的致病性研究被引量：9: 2012年; 为研究SEF14菌毛在肠炎沙门氏菌中的致病作用,本实验将SEF14菌毛亚单位编码基因缺失的肠炎沙门氏菌突变株50336△sefA和50336△sefD分别接种6周龄BALB/c小鼠和1日龄清远麻鸡,比较它们与其亲本菌株50336的致病性差异。结果显示,亲本菌株50336以及突变株50336△sefA、50336△sefD对小鼠的半数致死量分别为19.95 cfu、7.94 cfu和7.94 cfu,表明两个突变株对小鼠的致病性显著增强;而且对雏鸡的致病性结果也显示,突变株50336△sefA致病力较强,其感染雏鸡组死亡率为15%,而亲本菌株组死亡率为8.6%;另外50336△sefA和50336△sefD感染组7日龄时平均增重分别为15.38 g和18.39 g,亲本菌株组为19.06 g,对照组为26.43 g。研究结果表明SEF14菌毛亚单位基因缺失对肠炎沙门氏菌的致病性具有增强作用。; 朱春红孟霞姚丰华胡艳束婧婷朱国强; 关键词：肠炎沙门氏菌半数致死量

北京鸭淋巴结中淋巴窦的超微结构被引量：1: 2008年; 采用透射电镜对6周龄健康北京鸭淋巴结中淋巴窦超微结构进行了研究,结果显示：被膜下淋巴窦窦壁由单层扁平淋巴内皮细胞及突起所组成,相邻细胞突起间呈重叠状并出现紧密连接。索间淋巴窦窦壁除呈现上皮性紧密连接外,还存在15～24 nm细胞间隙。淋巴窦内可见如下细胞：淋巴细胞（以小型为主,中型淋巴细胞较少）、浆细胞（包括浆母细胞和幼浆细胞）、网状细胞、巨噬细胞、有粒白细胞（包括嗜酸性白细胞和异嗜性白细胞）、红细胞（包括早幼红细胞、中幼红细胞及成熟红细胞,可见细胞分裂中期、染色体形成期的中幼红细胞,说明北京鸭红细胞在淋巴窦内存在成熟过程）、类分泌细胞（该细胞具有特殊颗粒,颗粒内有细小微粒,被界膜包裹,或颗粒内小管,有的小管呈现同心圆式排列;在淋巴窦和淋巴索内均有该细胞）。; 熊喜龙邓衔柏中国农业大学兽医学院姚丰华刘济五冀德君; 关键词：超微结构淋巴结北京鸭

肠炎沙门菌hcp基因对生物被膜形成的影响分析被引量：8: 2014年; 细菌生物被膜的形成主要受细菌AI-2群体感应和菌体表面黏附素调控和影响,本实验室前期研究表明肠炎沙门菌SPI-19编码的hcp基因缺失能下调SEF14菌毛和鞭毛的表达。为研究hcp基因对肠炎沙门菌生物被膜形成能力的影响和潜在机制,本实验通过结晶紫染色法测定肠炎沙门菌两个代表株50336株和SD-2株的hcp突变缺失株及相应回补株的生物被膜形成能力,并与sefA和fliC缺失突变株的生物被膜形成能力对比显示,50336Δhcp和SD-2Δhcp与相应亲本株相比生物被膜形成能力分别降低67%和69%。而50336ΔfliC和SD-2ΔfliC与相应亲本株相比生物被膜形成能力分别降低49%和54%,sefA缺失对生物被膜形成无显著影响。此外,实验还通过对野生株及hcp缺失株AI-2分子活性检测显示,AI-2群体感应系统并未受到显著影响。本研究结果表明,hcp基因缺失显著影响肠炎沙门菌生物被膜的形成。; 姚丰华董立伟张钰朱国强; 关键词：肠炎沙门菌生物被膜 HCP 缺失突变株

抗猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIV毒素单克隆抗体的制备及初步应用被引量：2: 2009年; 据猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,App）apxⅣ毒素基因5′端的保守区域设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出致病性App1~12血清型菌株的保守5′端序列片段,构建的重组质粒pETapxⅣN经IPTG诱导表达出分子量大小为35.3kDa的可溶性重组蛋白。以亲和层析试剂盒纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗ApxⅣ毒素单克隆抗体（McAb）。以间接ELISA法筛选到两株分泌稳定、抗体亚类均为IgGl的杂交瘤细胞5B7和5C11,其培养上清和小鼠腹水抗体效价分别为1∶64、1∶128和1∶64 000、1∶128 000.两株单抗与临床猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪呼吸道繁殖障碍综合征病毒、猪黄、白痢产肠毒素大肠杆菌和猪肺疫多杀性巴氏杆菌感染阳性血清均不发生交叉反应,显示出良好的特异性.竞争性结合试验表明两株单抗识别不同的抗原结合表位.以（NH4）2SO4盐析法纯化的5C11小鼠腹水单抗包被酶标板,生物素标记纯化的5B7单抗建立了检测ApxⅣ毒素的双抗体夹心ELISA法,其包被单抗最佳工作浓度为4μg/ml,生物素标记单抗最佳工作浓度为0.8μg/mL,对重组表达ApxⅣ毒素（rApxⅣ）的最低检出量为60pg/mL。从10份临床病猪血清样本中检出6份ApxⅣ毒素阳性,与细菌分离鉴定和PCR结果相符合,结果表明此法可用于App感染的临床诊断。; 张志妮张伟娟林燕清顾万军黄良宗朱军姚丰华朱国强; 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌单克隆抗体

细菌Ⅵ型分泌系统结构与调控的研究进展被引量：4: 2013年; VI型分泌系统(type VI secretion system,T6SS)具有转运效应蛋白分子到多种类型靶细胞的能力,广泛存在于革兰氏阴性菌,其结构复杂。当前T6SS结构模型表明其装置至少包含两个复合物:细胞膜跨膜相关装置和动态的噬菌体样结构。本文主要围绕T6SS分泌装置的结构、结构元件相互作用功能以及影响装置表达和活性的条件和信号来进行简要综述。; 姚丰华张钰朱国强

重组质粒pACYC184-hok/sok的构建及稳定性研究被引量：2: 2011年; 以低拷贝质粒pACYC184为载体,将hok/sok基因插入到载体BamHⅠ位点,构建重组质粒pACYC184-hok/sok稳定系统,同时构建hok/sok基因缺失突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M)。通过对构建的重组菌进行连续传代和对不同代次的重组质粒进行SphⅠ酶切,分析hok/sok基因的引入对宿主细胞生长的影响。结果表明,重组质粒pACYC184-hok/sok在无抗生素筛选压力下连续传代,传至第135代时质粒稳定率仍是100%,且传代前后的质粒SphⅠ酶切图谱没有发生变化,DNA序列测定表明,插入的hok/sok基因没有发生任何突变。突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M)传代前后的质粒SphⅠ酶切结果虽没有发生变化,但其相应的重组菌传至第15代,质粒几乎完全丢失。生长曲线的测定结果表明,与含pACYC184重组菌生长曲线相似,pACYC184-hok/sok重组菌生长较快,而pACYC184-hok/sok(M)重组菌生长缓慢。以上结果表明,含hok/sok稳定系统,其稳定性明显高于无hok/sok稳定系统的质粒pACYC184以及突变质粒pACYC184-hok/sok(M)。重组质粒pACYC184-hok/sok具有良好的结构稳定性和分离稳定性。; 康小燕蒋志伟郁磊羊扬舒燕姚丰华朱国强; 关键词：PSK

人的全面发展理论视野下农科类大学生创业教育思考: 2017年; 本文从人的全面发展理论入手,通过探讨农科类大学生创业教育的现状、面临的问题,就如何发展农科类大学生创业教育,以人的全面发展理论为基点,结合农科类大学生的实际对创业教育提出意见,以进一步提高农科类大学生创业教育水平,鼓励农科类大学生进行创业,从而提升大学生创业就业质量和层次。; 张钰姚丰华; 关键词：农科类大学生创业教育

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