周红娟
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：浙江大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金杭州市医药卫生科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 共表达H7N9 M2蛋白和H5N1 HA蛋白的流感病毒样颗粒的制备
- 2021年
- 目的应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备共表达H7N9 M2蛋白及高致病性禽流感H5N1 HA蛋白的病毒样颗粒(VLPs)。方法将H7N9亚型禽流感M2蛋白作为基础蛋白,与禽流感H5N1膜蛋白HA共表达,通过杆状病毒表达系统表达出VLPs,纯化后通过蛋白印迹试验鉴定VLPs中蛋白的表达情况,用透射电镜观察VLPs形态,血凝试验测定VLPs的活性。结果H5N1 HA、H7N9 M2蛋白可以在昆虫细胞中共表达,相对分子质量为76000,并组装成流感VLPs;电镜观察到VLPs的形态与流感病毒一致,直径70~80 nm;血凝试验显示该VLPs具有类似流感病毒的血凝活性。结论该方法可以制备流感VLPs,为H7N9与H5N1高致病性禽流感广谱疫苗研究提供了可行方案。
- 张风卫王珊珊周红娟商学钗蔡龙
- 关键词：流感病毒A型病毒样颗粒杆状病毒H5N1亚型
- 人原发性肝癌组织cDNA文库的构建及鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的构建人原发性肝癌组织cDNA文库,筛查与原发性肝癌发生特异相关的基因,为探讨原发性肝癌的发病机制及基因治疗奠定基础.方法提取人原发性肝癌组织总RNA并纯化其mRNA;逆转录合成单链cDNA,长距离聚合酶链反应(PCR)合成双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K水解并纯化后,进行SfiⅠ酶酶切;将酶切产物进行分级分离,回收0.4kb以上的组分,并与λTriplEx2载体连接;将连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库的滴度和重组效率后,进行文库扩增;检测扩增后文库的滴度和重组效率,随机挑取14个噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量.结果未扩增文库的滴度为1.37×106pfu/ml,重组效率为97.46%;扩增后文库滴度为1.28×109pfu/ml,重组效率为99.06%;插入片段平均长度为0.95kb,长度在1.0～2.0kb的4个,0.75～1.0kb的4个,0.5～0.75kb的6个.结论已成功构建一个乙型肝炎肝硬化基础上发生的人原发性肝癌组织cDNA文库.
- 陈晓红陈智朱海红陈峰周红娟姚航平
- 关键词：肝肿瘤基因文库
- 人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库的构建及鉴定被引量：6
- 2005年
- 目的构建人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库,为筛查与乙型肝炎肝硬化的发生特异相关的基因及探讨乙型肝炎肝硬化的发病机制奠定基础。方法用Trizol方法提取人乙型肝炎肝硬化组织总RNA,并用mRNA纯化试剂盒进行mRNA纯化;反转录合成单链cDNA,长距离PCR方法合成双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K水解、纯化后,用SfiI酶切;将酶切产物进行分级分离,回收0.4kb以上的cDNA组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;鉴定文库的滴度和重组效率后,进行文库扩增;鉴定扩增文库的滴度和重组效率;随机挑取11个噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量。结果未扩增文库滴度为1.03×106pfu/ml,重组效率为97.24%,扩增后文库滴度为1.36×109pfu/ml,重组效率为99.02%;用载体两端的通用引物进行PCR鉴定,插入片段平均长度为1.02kb,含1kb以上的占36.36%,0.5～1kb的占63.64%。结论已成功构建一高质量的人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库,为筛查与乙型肝炎肝硬化的发生特异相关的基因及探讨乙型肝炎肝硬化的发病机制奠定了基础。
- 陈晓红陈智陈峰朱海红周红娟姚航平
- 关键词：基因文库乙型肝炎肝硬化肝组织CDNA文库
- 人原发性肝癌组织cDNA文库的构建及鉴定
- 目的构建在乙型肝炎肝硬化基础上发生的原发性肝癌组织cDNA文库,筛查与原发性肝癌的发生特异相关的基因,从而为探讨原发性肝癌的发病机理及基因治疗奠定坚实的基础。方法原发性肝癌组织标本由浙医二院提供,新鲜切割的组织立即放在液...
- 陈晓红陈智朱海红陈峰周红娟姚航平
- 文献传递
