吴永彬
- 作品数：7 被引量：62H指数：6
- 供职机构：南方医科大学基础医学院基因工程研究所更多>>
- 发文基金：国家公益性行业科研专项广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程农业科学医药卫生生物学更多>>
- 改良Chelex-100法快速提取转基因农产品DNA被引量：6
- 2011年
- 旨在建立一种从转基因农产品中快速提取DNA的方法。分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取转基因大豆GTS40-3-2基因组DNA,测其浓度和纯度,PCR扩增其内源基因(Lectin)、启动子(CaMV35S)和品系特异性序列,对两种方法进行比较和评价,并研究两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果,以及改良Chelex-100法在玉米、小麦和水稻等其他转基因农产品的应用效果。结果表明,改良Chelex-100法能够快速在1.5 h之内从样品中提取DNA,所提取的DNA直接用于PCR扩增反应,产物电泳条带清晰明亮。两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果未见明显差别。该方法在玉米、小麦和水稻等转基因农产品的应用效果稳定。因此,改良Chelex-100法提取的DNA可以作为PCR扩增模板用于转基因农产品检测。该方法具有经济、简便、快速、安全的特点,适合转基因农产品大规模筛选和鉴别。
- 蔡翠霞肖维威康文杰周琳华吴永彬郑远金马文丽
- 关键词：CTAB法DNA提取PCR
- 苏云金芽孢杆菌Cry1A(b)抗虫基因LAMP检测方法的建立与应用被引量：7
- 2012年
- 以转基因玉米MON810为模板,针对Cry1A(b)抗虫基因核酸保守序列设计特异性引物,建立LAMP检测体系。对该体系的可行性、灵敏性、特异性进行分析,并应用于转基因产品的检测。研究结果显示该方法快速简单、灵敏度特异性高、结果可视化,可应用于转基因产品中Cry1A(b)基因的初步筛选。
- 周琳华肖维威吴永彬蔡翠霞康文杰刘唐书马文丽
- 关键词：苏云金芽孢杆菌环介导等温扩增技术
- 植物油DNA的高效提取方法研究被引量：10
- 2014年
- 针对植物油中DNA含量极低、DNA序列片段短、破坏严重的特点,以食用植物油为原料,旨在建立一种从植物油中稳定、高效提取DNA的方法。实验采用硅膜吸附柱法提取植物油基因组DNA,PCR扩增其相应内源基因进行质量鉴定,再针对通用的外源基因CaMV35S启动子进行PCR、LAMP和实时荧光PCR检测对该方法进行评价。结果表明:该方法提取的DNA质量可靠,采用PCR、LAMP和实时荧光PCR技术成功地检测出了植物油中的CaMV35S启动子。因此,硅膜吸附柱法提取的植物油DNA可以作为PCR、LAMP、实时荧光PCR扩增模板用于转基因成分的检测,该方法经济、稳定、安全,为植物油的基因检测奠定了基础。
- 蔡翠霞肖维威吴慧慧周琳华吴永彬耿启斌马文丽
- 关键词：植物油DNA提取转基因检测
- 实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测领域中的应用被引量：10
- 2011年
- 随着基因工程技术在农业生产中应用的深入,越来越多具有改良特征的转基因植物在全球范围内得到广泛种植,随之而来的转基因食品也迅猛发展,转基因产品大规模商业化引起了对安全性问题的担忧。为保证转基因产品标签制度的顺利实施,建立快速、准确、高通量的定量检测方法十分必要。我们综述了国内外转基因食品检测技术的研究进展,重点阐述了实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测领域中的应用,并展望了通过构建质粒标准分子的方法来实现对更多转基因植物品系的定量检测。
- 吴永彬肖维威马文丽
- 关键词：转基因食品实时荧光定量PCR
- LAMP技术检测食品中转基因成分CaMV35S启动子的研究被引量：8
- 2013年
- 目的:建立一种快速检测CaMV35S启动子基因的环介导等温扩增技术检测方法。方法:针对CaMV35S启动子设计4对特异性引物,在链置换酶(Bst酶)作用下,65℃扩增1h。通过对转基因大豆GTS40-3-2等8种转基因标准品的检测,对该方法进行特异性评价。以F3、B3为引物,转基因大豆GTS40-3-2为模板,纯化后的PCR扩增产物与pMD-18T载体连接,构建含有CaMV35s启动子的质粒标准分子。配制7个浓度梯度的标准质粒分子,进行灵敏度分析。同时应用该方法和荧光PCR方法检测35种农产品及其加工品。结果:该方法特异性强,结果可视,检测灵敏度达200copies/μL,35种样品的检测结果与SYBRGreen荧光PCR检测结果一致。结论:建立的LAMP法具有快速,简单,可视化,灵敏度高和特异性强等优点,可应用于转基因产品的初步筛选。
- 肖维威周琳华吴永彬蔡翠霞马文丽刘唐书
- 关键词：花椰菜花叶病毒环介导等温扩增技术转基因食品
- 转基因大豆、玉米、油菜和水稻品系特异性检测质粒标准分子的快速构建及应用被引量：11
- 2011年
- 本文采用重叠延伸PCR技术快速构建了转基因大豆GTS40-3-2、玉米NK603、油菜RT73和水稻TT51-1的4种品系作物的质粒标准分子.经快速PCR鉴定及测序分析验证后,将构建的阳性质粒标准分子应用于实时荧光定量PCR标准曲线的构建,并建立其相应的荧光定量PCR检测体系,同时对该体系的扩增效率、精确度、灵敏度等指标进行了评估.结果显示,建立的实时荧光定量PCR检测体系中,目标序列的扩增效率均在97.434%～101.479%正常范围内(R2≥0.995),定量极限为20 copies,表明我们已成功构建了这4种转基因作物的品系质粒标准分子,并能有效应用于实时荧光定量PCR标准曲线的构建.
- 吴永彬肖维威张宝蔡翠霞康文杰周琳华刘唐书马文丽
- 关键词：转基因重叠延伸PCR实时荧光定量PCR
