吴怀光
- 作品数：5 被引量：18H指数：2
- 供职机构：华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用S-层蛋白在细胞表面展示α-淀粉酶和金属硫蛋白被引量：8
- 2004年
- 选用苏云金芽胞杆菌CTC菌株细胞表面S 层蛋白作为表面展示载体 ,利用其N 端信号肽以及锚定序列分别将不同生物特性的外源蛋白带到胞外并锚定在细胞的表面。为研究外源蛋白的分子量和生化特性对表面展示以及对其在细胞表面生物活性的影响 ,选用分子量较大的分泌性蛋白α 淀粉酶和富含半胱氨酸的非分泌性蛋白金属硫蛋白作为目标蛋白。将α 淀粉酶的结构基因 (amy)和金属硫蛋白的结构基因 (smtA)与S 层蛋白的锚定区slh结合 ,构建融合蛋白基因slh amy及slh smtA ,克隆至穿梭载体pHT30 4上 ,得到重组质粒pBMBSA 30 4和pBMBSM 30 4 ;转入带有帮助质粒的重组菌株BMB171 pBMB CSA中 ,得到新的重组菌株BMBSAC和BMBSMC。SDS PAGE显示融合蛋白SLH AMY和SLH SMTA在重组菌的表面得到了表达。利用锥虫蓝染色 打孔加膜法表明重组菌SAC的确具有表面酶活性 ,α 淀粉酶被固定在细胞表面。碘液法测定的数据表明重组菌SAC的菌悬液样品较之受体菌BMB171菌悬液样品酶活提高了 4 2 4 %。Ni NTA 琼脂糖微球吸附试验显示重组菌SMC能够被微球所吸附 ,证实SMTA在重组菌表面具有活性。对游离镉离子的吸附试验显示重组菌对镉离子的吸附能力是对照受体菌的 4倍。
- 吴怀光刘欣孙明喻子牛
- 关键词：苏云金芽胞杆菌S-层蛋白细胞表面展示融合蛋白Α-淀粉酶
- 利用苏云金芽胞杆菌S－层蛋白为载体在细胞表面展示目标蛋白的方法及应用
- 本发明属于分子生物学领域，具体涉及利用来源于苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S-层蛋白在细胞表面展示目标蛋白的方法，本发明用以改善细胞表面结构或增强目标蛋白生物学功能，在众多领域都具有应用潜力。发明的具体步骤包括：将所说的目标...
- 孙明喻子牛李林陈守文王莉刘欣吴怀光
- 文献传递
- 利用Tn5401转座子构建解离载体并在苏云金芽胞杆菌中高效、稳定表达AiiA蛋白
- 苏云金芽胞杆菌的AiiA蛋白是一种胞内蛋白，能降解参与诱导调控多种植物病原菌致病基因表达的N-乙酰高丝氨酸内酯信号分子/(AHLs/)。AiiA蛋白在苏云金芽胞杆菌各亚种中广泛存在，但表达量低，对N-乙酰高丝氨酸内酯信号...
- 吴怀光
- 关键词：苏云金芽胞杆菌融合蛋白
- 文献传递
- 利用苏云金芽胞杆菌S－层蛋白为载体在细胞表面展示目标蛋白的方法及应用
- 本发明属于分子生物学领域，具体涉及利用来源于苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S－层蛋白在细胞表面展示目标蛋白的方法，本发明用以改善细胞表面结构或增强目标蛋白生物学功能，在众多领域都具有应用潜力。发明的具体步骤包括：将所说的目标...
- 孙明喻子牛李林陈守文王莉刘欣吴怀光
- 文献传递
- 在苏云金芽胞杆菌中高效和稳定表达AiiA蛋白被引量：8
- 2007年
- 【目的】摸索提高AiiA蛋白对AHLs分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制能力的方法。【方法】苏云金芽胞杆菌的AiiA蛋白是一种胞内蛋白,能降解参与诱导调控多种植物病原菌致病基因表达的N-乙酰高丝氨酸内酯信号分子。本文采用两种方式来提高AiiA蛋白的活性,即利用苏云金芽胞杆菌S-层蛋白在细胞表面表达该蛋白以及利用苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry3Aa启动子来提高aiiA基因的表达量。为此构建该蛋白基因与细胞表面S-层蛋白的锚定区结合而成的融合蛋白基因slh-aiiA以及带有基因cry3Aa启动子的融合基因pro3A-aiiA。为了提高表达的稳定性以及去掉重组菌中非苏云金芽胞杆菌片段,本文构建了解离载体pBMB5401,并将上述两个融合基因单独或同时装入解离载体pBMB5401,分别得到重组质粒pBMBcaiiA,pBMB3aiiA和pBMB3439。转化苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171,随后导入温度敏感型辅助质粒pEG922,重组质粒在整合酶的作用下发生体内重组,消除了抗性基因等非必需片段。【结果】得到3个重组菌BMBcaiiAR,BMB3aiiAR和BMB3439R,在无抗性选择压力下的稳定性均在90%以上。融合蛋白SLH-AiiA及pro3A-AiiA在解离后的重组菌中得到表达,具有对AHLs分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制能力。【结论】在苏云金芽胞杆菌中高效和稳定表达AiiA蛋白,可增强其对AHLs分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制能力,当同时结合两种方式来表达AiiA蛋白时效果最好。
- 吴怀光叶伟星喻子牛孙明
- 关键词：苏云金芽胞杆菌融合蛋白
