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精源性新基因ssp411在男性生殖细胞中的功能研究: 本文为探讨精子细胞特异表达的新基因ssp411在男性生殖细胞中的功能，通过构建体外氧化损伤模型，研究不同大小的人ssp411基因在细胞中的表达定位，设计、构建并筛选以ssp411基因为靶点的RNA干扰表达载体siRNA—...; 华敏敏; 关键词：RNA干扰基因多态性

ssp411基因siRNA表达载体的构建与有效干扰质粒的筛选: 2009年; 目的为探索精子细胞特异表达的新基因ssp411在受精及早胚发育中的功能，设计并构建了以ssp411基因为靶点的RNA干扰表达载体siRNA-ssp411s，筛选其中对ssp411基因有显著干扰作用的表达质粒。方法根据已知的ssp411 mRNA序列，选择设计三条带发卡结构的核苷酸序列，克隆到含有U6启动子的载体pRNAT—U6．1中并测序分析。用脂质体转染的方法将干扰质粒与表达质粒ssp411-pDsRed共转染293T细胞，24h后，荧光倒置显微镜观察转染效率，并收集细胞，通过实时定量PCR方法检测不同干扰质粒对ssp411mRNA的干扰效果。结果3个ssp411的siRNA片断被成功克隆到pRNAT-U6.1质粒载体中，插入片段测序结果与设计的序列完全一致。实时定量PCR结果表明，针对ssp411基因蛋白编码区3—22序列构建的干扰质粒效果最好，干扰效率可达71％。结论成功构建了能表达ssp411 shRNA（small hairpin RNA）的重组质粒，同时通过共转染技术，筛选到一个干扰效果达70％以上的干扰片断，为建立转基因RNA干扰小鼠模型，在体内研究ssp411基因及蛋白的生殖生物学功能打好基础。; 华敏敏李玉华李润生施惠娟欧伶; 关键词：RNA干扰短发夹RNA 实时定量PCR

用Transgreen/PI荧光复染法检测精子的存活率被引量：10: 2008年; 目的探讨Transgreen/碘化丙锭(PI)荧光复染法用于检测人类精子存活率的可行性。方法以Invitrogen公司的Live/Dead Sperm Viability Kit的存活率结果为参考值,比较Transgreen/PI复染后精子的存活率结果与该试剂盒存活率结果的一致性;研究检测过程中试剂Transgreen和PI的加入顺序对存活率结果的影响;研究2h内Transgreen和PI染料对精子运动的影响。结果用Transgreen/PI复染法和Live/Dead Sperm Viability Kit复染法检测人类精子存活率,其结果无显著差异(P>0.05);精液中Transgreen和PI的加入顺序对精液存活率的检测结果没有影响(P>0.05);与空白对照相比,精液中加入Transgreen、PI及Transgreen/PI后2h内,精子的各项运动参数没有明显改变(P>0.05)。结论Transgreen/PI复染法与Live/Dead Sperm Vi-ability Kit一样,具有灵敏度高、重复性好及快速简便的优点,而且Transgreen/PI复染法价格低廉,可以作为检测精子存活率的常规实验室方法。; 赵洪鑫袁瑶华敏敏张慧琴施惠娟; 关键词：荧光染色精子存活率

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华敏敏