刁玉梅
- 作品数：12 被引量：15H指数：3
- 供职机构：辽宁医学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划吉林省科技发展计划基金辽宁省教育厅高校重点实验室项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 五株隐孢子虫18S rRNA部分基因克隆和序列分析
- 2010年
- 设计Nested PCR引物扩增牛源微小隐孢子虫Cryptospordium parvum、羊源微小隐孢子虫C. parvum、牛源安氏隐孢子虫C. andersoni、鸡源贝氏隐孢子虫C. baileyi及猪源隐孢子虫C. suis 18S rRNA基因突变区,PCR产物经克隆测序,其片段大小分别为212、213、213、213和210 bp.将测得的序列用DNAStar软件分析并与NCBI数据库中相同与相近种株序列进行相似性比较, 进行相似性分析并用TREECON软件绘制系统发育进化树.结果表明测得的5株隐孢子虫与各自相同种相似性为98.1%～100%,与其他种相似性为90.1%～98.6%.分析显示在此突变区设置特异酶切位点能区分开C. parvum, C. andersoni, C. baileyi与C. suis,位点分别是TaqI、BstUI、MseI.本研究为我国隐孢子虫分类、分子流行病学研究提供了新的方法.
- 于师宇李巍宫鹏涛张西臣李建华李春雨苏利波刁玉梅
- 关键词：微小隐孢子虫RRNA
- 微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21的原核表达及鉴定
- 2011年
- 本研究旨在克隆微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21开放阅读框,构建其原核表达质粒,并对获得的融合蛋白进行鉴定。从含CP21基因的噬菌体中提取模板DNA,PCR扩增基因片段,构建pET-28a-CP21原核表达质粒,转化至埃希氏大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。用原核表达蛋白免疫小鼠,制备抗重组蛋白多抗,对蛋白进行定位。结果表明成功扩增出CP21基因,并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量为25 ku的融合蛋白,Western blotting证明表达的CP21融合蛋白能与抗C.parvum多克隆抗体产生特异性反应。免疫荧光结果表明:CP21基因在子孢子和卵囊期均表达,且表达产物位于子孢子表膜和卵囊壁表面。CP21是一种与侵入机制有关的黏附相关蛋白。研究结果为微小隐孢子虫的免疫学诊断及疫苗研制奠定了基础。
- 任保彦陈玉兰宫鹏涛李巍李建华苏利波李赫杨举刁玉梅张西臣
- 关键词：微小隐孢子虫原核表达免疫荧光定位
- IL-10基因修饰的大鼠树突状细胞表型分析及生物学特性的研究被引量：4
- 2012年
- 目的研究IL-10基因修饰后的大鼠树突状细胞(DC)的表型及其生物学特性。方法以含IL-10基因的重组腺病毒载体体外转染大鼠骨髓来源的DC,Western blot测定转染后各组DC中IL-10蛋白的表达,流式细胞仪检测各组DC表面抗原CD83、CD86分子的表达情况,混合淋巴细胞反应法测定各组DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。结果 IL-10基因修饰组DC可检测到IL-10高表达,表面抗原CD83、CD86低表达,其刺激T淋巴细胞增殖水平较其他各组低。结论 IL-10基因修饰的DC可有效的表达有功能的IL-10,为研究IL-10修饰的DC诱导同种异体移植免疫耐受奠定了基础。
- 田丽华李雪刁玉梅李兵
- 关键词：树突状细胞IL-10基因修饰
- 弓形虫RH株表面抗原SAG3去信号肽基因的蛋白原核表达及鉴定被引量：5
- 2012年
- 根据GenBank中弓形虫表面抗原SAG3基因序列,以弓形虫总RNA反转录的cDNA为模板,扩增出SAG3去除信号肽基因并进行原核表达。将重组pET-28a(+)-SAG3阳性表达质粒转入大肠杆菌BL(DE3)中,用IPTG进行诱导表达。通过SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定。结果表明:成功扩增了不含信号肽的SAG3基因,构建的原核表达质粒在大肠杆菌中得到了高效表达,能够与鼠抗弓形虫阳性血清发生特异性反应,去信号肽的SAG蛋白具有反应原性。
- 马亮刁玉梅任保彦宫鹏涛李建华张西臣
- 关键词：刚地弓形虫原核表达
- IL-10修饰的树突状细胞在大鼠角膜移植中的作用被引量：4
- 2011年
- 目的:探讨IL-10修饰的供体树突状细胞(dendritic cells,DC)在大鼠角膜移植中的作用。方法:建立Wistar-SD大鼠穿透性角膜移植动物模型,Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体。受体大鼠42只随机分为3组,每组14只。A组为对照组,受体不经任何预处理,即行角膜移植术;B组角膜移植前3d,每只受体鼠经尾静脉注射供体的未成熟DC,细胞数为2×107个;C组角膜移植前3d,每只受体鼠经尾静脉注射经IL-10修饰的供体未成熟DC,细胞数为2×107个。结果:以混浊、水肿和新生血管3项指标作为临床评估标准,观察各组角膜植片的存活时间。角膜植片的存活时间3组分别为:10.1±1.7,17.8±1.8,26.4±1.6d。各干预组与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。B,C组间比较差异有显著性(P<0.01)。结论:摄取供体抗原的不成熟DC能显著延长角膜植片的存活时间;IL-10修饰的DC可进一步延长角膜植片的存活时间。
- 苏海英刁玉梅李兵
- 关键词：IL-10树突状细胞角膜移植
- 细胞与角膜移植免疫耐受被引量：1
- 2010年
- 角膜移植术后免疫排斥反应是角膜移植失败的主要原因。免疫耐受是指抗原特异性的免疫无应答。诱导受体产生针对移植物的免疫耐受是彻底克服移植排斥反应的根本方法。角膜移植排斥反应是一个复杂且有多因素参与的过程。多种免疫细胞在抑制角膜移植术后排斥反应、诱导免疫耐受中,发挥着关键作用。因此,我们就近几年通过细胞诱导角膜移植免疫耐受的机制作一综述。
- 刁玉梅李兵
- 关键词：角膜移植免疫耐受排斥反应细胞
- 微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白抗体检测ELISA方法的建立被引量：1
- 2011年
- 为建立快捷的含病毒隐孢子虫的检测方法,本研究利用已构建的微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白重组表达质粒表达并纯化重组蛋白,建立以该重组衣壳蛋白为包被抗原检测抗体的间接ELISA检测方法。经优化后间接ELISA的最佳条件为:抗原包被浓度为0.25μg/孔,被检血清稀释度为1∶200,酶标二抗稀释度为1∶2000,封闭液为含5%脱脂奶粉的PBST溶液。该方法检测安氏隐孢子虫阳性血清,柔嫩艾美尔球虫阳性血清,蓝氏贾第虫阳性血清,弓形虫阳性血清与微小隐孢子虫阳性结果均为阴性。该方法灵敏度为1∶1600,特异性较强且具可重复性,可用于含病毒隐孢子虫的抗体检测及流行病学调查。
- 刁玉梅宫鹏涛李巍苏利波黄祥盛高华义李赫胡进平李建华张西臣
- 关键词：微小隐孢子虫衣壳蛋白间接ELISA
- IL-12及Th1/Th2细胞因子在IL-10修饰的树突状细胞诱导大鼠角膜移植免疫耐受中的作用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、Th1/Th2细胞因子在IL-10修饰的树突状细胞(dendriticcell,DC)诱导大鼠角膜移植免疫耐受中的作用。方法将雄性SD受体大鼠随机分为3组,每组14只,分别为对照组(术前3d尾静脉注射PBS0.1mL)、6-DC组(术前3d尾静脉注射第6天的imDC,每只鼠0.1mL共2×106个细胞)及IL-10-DC组(术前3d尾静脉注射IL-10修饰的imDC,每只鼠0.1mL共2×106个细胞)。以雌性Wistar大鼠为供体建立穿透性角膜移植模型。术后对受体大鼠角膜植片进行临床观察,记录角膜植片存活时间;移植术后第14天检测术眼角膜中细胞因子IL-12、Th1细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2细胞因子IL-4、IL-10mRNA的表达。结果对照组、6-DC组及IL-10-DC组角膜植片的存活时间分别为(10.63±2.00)d、(18.88±1.36)d及(24.50±2.07)d。6-DC组、IL-10-DC组与对照组比较,角膜植片存活时间明显延长(均为P<0.01);IL-10-DC组角膜植片存活时间显著长于6-DC组(P<0.01)。术后第14天,对照组角膜组织IL-12(0.80±0.00)及Th1细胞因子IL-2(1.03±0.06)、IFN-γ(0.97±0.03)的mRNA表达水平最高,而Th2细胞因子IL-4(0.13±0.00)、IL-10(0.34±0.02)的mRNA表达最低;IL-10-DC组IL-12(0.39±0.01)及Th1细胞因子IL-2(0.61±0.01)、IFN-γ(0.43±0.02)的mRNA表达水平最低,Th2细胞因子IL-4(0.19±0.00)、IL-10(0.88±0.01)的mRNA表达最高,三组比较差异具有统计学意义。结论 IL-10修饰的树突状细胞能诱导大鼠角膜移植免疫耐受;IL-12、Th1/Th2细胞因子在角膜移植免疫中起重要作用,IL-12mRNA低表达及Th1/Th2细胞因子偏离是IL-10修饰的树突状细胞诱导角膜移植免疫耐受机制之一。
- 李雪刁玉梅李兵
- 关键词：穿透性角膜移植术树突状细胞免疫耐受
- 隐孢子虫病毒衣壳蛋白抗体ELISA检测方法及试剂盒
- 本发明提供一种隐孢子虫病毒衣壳蛋白抗体ELISA检测方法及试剂盒，用于动物及人隐孢子虫感染血清抗体的检测，以隐孢子虫病毒衣壳蛋白为抗原包被于酶标板，隐孢子虫病毒蛋白标准阳性血清和标准阴性血清、底物显色液、洗涤液、终止液、...
- 张西臣刁玉梅李建华宫鹏涛杨举张国才李赫任文陟张楠高华义李淑红
- 文献传递
- 微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白单克隆抗体的制备及初步应用
- 隐孢子虫(Cryptosporidium)是一种人兽共患寄生性原虫,寄生于人和动物的胃肠道和呼吸道上皮细胞,引起腹泻疾病的爆发,是引起人类腹泻的三大肠病原体之一。含有隐孢子虫卵囊的人、家畜、宠物和野生动物的粪便,直接威胁...
- 刁玉梅
- 关键词：微小隐孢子虫单克隆抗体
- 文献传递
