黄海宁
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 转座子标签法对阴沟肠杆菌B8拮抗水稻白叶枯病菌相关基因片段的克隆与检测被引量：5
- 2006年
- 阴沟肠杆菌B8是从水稻叶面分离获得的具有拮抗水稻白叶枯病菌等多种病原细菌的广谱拮抗菌.为研究其拮抗机理,我们应用转座子标签法对阴沟肠杆菌B8中与抗水稻白叶枯病菌拮抗活性相关的DNA片段进行了克隆.通过自杀性质粒pZJ25介导,将Tn5转座到B8的染色体上,从而筛选到2株拮抗活性丧失的菌株B8B和B8F;用Tn5片段为探针,分别对B8、B8B、B8F进行Southern杂交,结果在B8中无特异条带,而在B8B和B8F中各有一条约20 kb和9 kb的EcoRⅠ特异条带;分别提取二株突变菌株的基因组DNA,BamHⅠ酶切,克隆于pBS的BamHⅠ位点上,利用Tn5上的Kan抗性,分别筛选到质粒pTLB和pTLF,获得包含Tn5部分序列的B和F二个基因片段,大小约为6 kb和7 kb;应用pTLB全质粒和pTLF中约0.8 kb的BamHⅠ+HpaⅠ外源F片段为探针,对B8、B8B、B8F进行Southern杂交,证实我们克隆到Tn5转座位点周围的二个片段,且他们分别位于B8菌株染色体DNA的二个不同位置.
- 黄海宁余旭平陈卫良龚鸿飞李德葆
- 关键词：水稻白叶枯病克隆
- 阴沟肠杆菌B8拮抗活性相关基因的克隆与分析
- 2004年
- 为研究具有广谱拮抗活性的阴沟肠杆菌B8的拮抗机理,应用自杀性质粒pZJ25,将Tn5转座到B8的染色体上,筛选到2株拮抗活性丧失的菌株.选择其中B8F突变株,应用Tn5上的Kanr基因作为标签,对Tn5插入位点右侧的拮抗活性相关基因片段进行了克隆,筛选得到质粒pTLF,经亚克隆后测序,获得F片段735bp的序列.提取原始菌株B8基因组DNA,酶切后与PstⅠ接头连接,应用接头引物和根据F片段设计的特异引物,在F片段的左右两侧进行染色体步行,获得了F片段(Tn5插入位点)左侧的1106bp序列和F片段右侧的664bp序列.生物信息学分析显示,获得的B8菌株拮抗相关基因序列包含3个ORF,与Pantoeaagglomerans的andrimid生物合成基因簇(基因GenBank登录号AY192157)有较高的同源性,分别对应于admM,admN和admO共3个基因.被Tn5插入破坏的ORF(命名为anrF基因)对应于admM(Polyketide合酶基因),插入位点位于终止密码前214bp处.由此证明,anrF基因与B8菌株的拮抗活性相关,推测B8菌株产生的拮抗物质为andrimid.
- 余旭平朱军莉姚学萍何世成黄海宁陈卫良李德葆
- 关键词：拮抗机理基因克隆生物防治
