马怡茗
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国海洋大学医药学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 新型β-琼胶酶AgaB的定向进化
- 琼胶酶AgaB是本试验室从海洋假别单胞菌CY24中克隆得到的一个新颖的胞外琼胶酶。研究表明AgaB是一个结构和功能全新的β-琼胶酶，降解琼脂糖的主要产物为新琼八糖和十糖，最小底物为十二糖，作用机制为倒位型，在家族划分上该...
- 马怡茗
- 关键词：琼胶酶定向进化易错PCR跨膜转运碱基突变
- 文献传递
- 荧光标记糖电泳在新琼寡糖定性和定量分析中的应用
- 2007年
- 目的:建立荧光辅助糖电泳(FACE)对系列新琼寡糖进行定性、定量分析的方法。方法:将系列新琼寡糖用7-氨基-1,3-萘胺二磺酸钾(AGA)氨化还原衍生后,在浓度梯度为18%-25%的聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离,于波长264nm直接检测寡糖衍生物,得到聚合度为4-14的新琼寡糖衍生物电泳分析图谱。结果:寡糖衍生物的相对电迁移率与其分子量的负三分之二次方成线性关系;运用图像分析软件对电泳图谱进行数字化转换,发现寡糖衍生物的灰度积分面积与样品浓度呈线形关系。结论:建立了快速、精确的新琼寡糖微量定性、定量分析的方法,为新琼寡糖的质量分析提供了技术支撑。
- 马怡茗路新枝李京宝于文功
- β-琼胶酶AgaB催化活性的定向进化
- 2008年
- 用体外定向进化技术提高了β-琼胶酶 AgaB 热稳定突变酶 M446的催化活性。采用易错 PCR 和化学诱变法相结合的方法,构建了 M446的突变体文库;利用琼胶酶降解琼胶在平板上产生水解圈的特性,建立了阳性克隆的高通量筛选体系。最终筛选得到酶活性得到提高且保持较高耐热性的突变酶 M117,其酶活提高为突变酶 M446的3倍。测序分析发现编码突变酶 M117的 DNA 序列中有4处点突变,其中2处为同义突变,另外2处引发氨基酸替换,分别为 R9K 和 I111V。对突变酶 M117与 M446的动力学常数进行了比较,发现 M117的 Km 值降低了93.4%,Kcat/Km 值提高了15倍,由此可以推断突变酶M117比活力提高的主要原因是酶与底物的亲和能力提高。
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- 关键词：定向进化易错PCR化学诱变酶活力Β-琼胶酶
