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UBAP1蛋白在鼻咽癌细胞中的表达和定位被引量：1: 2005年; 目的:研究泛肽相关新基因编码产物的特性和在鼻咽癌细胞内定位与表达。方法:利用生物信息学分析编码蛋白的一般性质并预测其定位,构建增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent prote in,EGFP)与UBAP1融合基因的真核表达载体pEGFP-C2-UBAP1,通过脂质体介导转染人鼻咽癌细胞系HNE1,荧光显微镜观察UBAP1基因编码蛋白在HNE1活细胞内定位。结果:融合蛋白可在HNE1细胞中高表达,主要定位在细胞核,有较为明显的核膜聚集现象。结论:UBAP1基因编码产物在HNE1中的表达差异可能是NPC发生的原因之一。; 曾朝阳钱骏熊炜周艳宏张文玲李小玲唐珂李伟芳李桂源; 关键词：鼻咽癌绿色荧光蛋白细胞定位

鼻咽上皮组织定向cDNA文库的快速构建被引量：7: 2001年; 目的　采用SMART (switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)技术 ,快速构建了高质量的成人鼻咽上皮组织定向cDNA文库。方法　从成人正常鼻咽上皮组织分离总RNA ,利用经修饰的oligo(dT)引物 (含sfiIB酶切位点 )合成cDNA第一链 ,同时根据真核生物mRNA 5′端帽子结构特点 ,利用SMART核苷酸 (含sfiIA酶切位点 )作为cDNA第二链在mRNA 5′端延伸出去的模板 ,进而以此序列为引物利用LD PCR(Long distance PCR)合成双链cDNA ,双链cDNA经sfiI(IA&IB)酶切和过柱分级分离后 ,克隆入经sfiI酶切的λTripIEX2载体后经体外包装而成cDNA文库。结果　获得 1.5× 10 6个重组子 ,重组率达 10 0 %。文库扩增后 ,滴度达 3.8× 10 9pfu/ml,插入cDNA平均长度为 1.5kb。结论构建的成人鼻咽cDNA文库具有良好的质量 ,该cDNA文库为进一步筛选。; 张必成余鹰邱元正钱骏周鸣李忠花张小慧向娟娟朱诗国李桂源; 关键词：鼻咽肿瘤 DNA重组基因文库遗传学技术 CDNA SMART

应用EST策略鉴定人类新基因UBAP1的数字化差异表达图谱被引量：13: 2002年; 背景与目的:UBAP1(ubiquitinassociatedprotein1)基因是我们先前在人类染色体9p21-22鼻咽癌杂合性丢失(lossofheterozygosity,LOH)高频区所获得的一个鼻咽癌相关新基因。进一步地,我们应用EST策略鉴定UBAP1基因在多种肿瘤组织中的差异表达谱。方法:采用基于生物信息学的电子杂交方法,即以UBAP1基因的全长cDNA为“探针”,利用计算机对人类表达序列标签(expressedsequencetag,EST)和Unigene等数据库中代表UBAP1的EST在各类肿瘤及相应正常组织cDNA文库中的分布进行综合分析,研究UBAP1基因的数字化差异表达图谱。同时采用差异RT-PCR方法对UBAP1在3种肿瘤活检组织中的差异表达进行验证。结果:电子杂交结果表明UBAP1基因不仅在42种人类正常组织中广泛表达,而且在11种肿瘤组织中存在可能的表达差异,尤其是在脑瘤、乳腺癌、结肠癌、皮肤癌、睾丸癌和宫颈癌等肿瘤组织中表达显著下调(P<0.05),而在肾癌、胰腺癌中高表达(P<0.05)。进一步采用差异RT-PCR方法发现UBAP1基因在64%的脑膜瘤和72%的结直肠癌活检组织中具有明显表达缺失/下调。结论:UBAP1基因有可能与多种肿瘤的发生发展密切相关,有必要深入研究UBAP1基因的表达异常参与肿瘤发生发展的分子机制。; 钱骏张晓梅李小玲王洁如李伟芳王蓉李桂源; 关键词：表达序列标签基因表达数字化鼻咽癌

表达序列标签数据库搜索鉴定小鼠UBAP1基因及其数字化表达分析被引量：13: 2002年; UBAP1(ubiquitinassociatedprotein 1)基因是最近克隆的一个定位于人类染色体 9p2 1 2 2鼻咽癌杂合性丢失高频区的泛肽相关蛋白家族新成员 .为了深入研究UBAP1基因的功能 ,利用计算机对表达序列标签(expressedsequencetag ,EST)、UniGene等数据库进行综合搜索分析 ,结合cDNA克隆测序的方法 ,成功地获得了UBAP1基因在小鼠中的同源基因 .小鼠UBAP1基因cDNA全长为 2 6 76bp ,编码一个由 44 1个氨基酸组成的蛋白质 ,在其蛋白质C端只有一个泛肽相关功能域 (UBAdomain) .与人UBAP1基因相比 ,两者编码的氨基酸序列有 89%相同 .基于EST的数字化表达分析显示UBAP1基因在小鼠正常组织中广泛高表达 .; 钱骏董利张必成王洁如周鸣李忠花李伟芳李小玲李桂源; 关键词：表达序列标签数据库搜索小鼠鼻咽癌基因克隆

UBAP1基因真核表达载体的构建及对人鼻咽癌细胞生长的影响被引量：6: 2005年; 为研究鼻咽癌相关新基因UBAP1的功能,探讨其对鼻咽癌细胞生长特性的影响,构建了UBAP1真核表达载体并转染到鼻咽癌细胞株HNE1中,借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验、裸鼠接种和流式细胞计数方法对转染细胞的生物学行为进行了检测.结果显示,UBAP1基因转染细胞生长速度明显减慢,在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降,裸鼠接种试验显示,UBAP1基因转染细胞HNE1生长速度受到抑制,流式细胞计数分析发现,UBAP1基因表达升高能延缓细胞由G0-G1期进入S期.因此,UBAP1基因的表达有助于HNE1恶性表型的逆转,初步证明UBAP1是一个鼻咽癌相关的抑瘤基因.; 曾朝阳熊炜周艳宏李小玲罗晓敏唐珂李伟芳钱骏李桂源; 关键词：鼻咽肿瘤肿瘤抑制基因基因转染基因表达

白念珠菌随机扩增DNA多态性及耐药性的初步研究: 白念珠菌是临最常见的致病真菌之一.近十年,由于临床上免疫抑制剂、广谱抗菌药物的滥用以及某些因素使宿主免疫系统受损等导致了临床上白念珠菌引起的感染呈明显上升趋势.随着临床多种抗真菌药物的使用,白念珠菌对抗真菌药物的耐药现象...; 钱骏; 关键词：白念珠菌随机扩增DNA多态性; 文献传递

富亮氨酸重复超家族新成员LRRC4的克隆与在脑瘤中的表达分析被引量：24: 2002年; 在染色体 7q31 32多种肿瘤杂合性丢失 (lossofheterozygosity ,LOH)高频区 ,采用表达序列标签(expressedsequencetag ,EST)介导的定位候选克隆策略获得了一个定位于人染色体 7q31 32的新基因 (GenBank登录号 :AF196 976 ) .该基因编码 6 5 3个氨基酸 ,蛋白质理论pI m :6 5 8 72 7ku .它包含七个典型的LRR、一个IgC2样结构域 .此外 ,它还包含一个N端信号肽、一个C端跨膜区 .其结构特征表明它是富亮氨酸重复(leucine richrepeat,LRR)超家族的新成员 .经过人类基因组命名委员会的同意 ,将该基因命名为LRRC4.此外 ,通过序列相似性匹配还获得了定位于小鼠 6号染色体的LRRC4的同源基因 (GenBank登录号 :AF2 90 5 42 ) .RNA印迹和RT PCR检测发现LRRC4在正常人脑组织相对特异表达 ,而在多种原发性脑瘤表达明显下调或缺失 .综合考虑LRRC4基因的序列特征及表达谱。; 王洁如钱骏董利李小玲谭琛李江张必成周洁李桂源; 关键词：富亮氨酸重复 LRRC4 脑瘤基因表达

NAG14基因结构域蛋白的原核表达被引量：1: 2002年; 董利王洁如钱骏张小慧谭琛聂新民李桂源; 关键词：基因表达融合蛋白

一个定位于9p21-22鼻咽癌最小LOH共同缺失区的新基因UBAP1的克隆及其功能研究: 为了筛选和克隆9p21-22区域鼻咽癌相关抑瘤基因,我们先前的研究构建了鼻咽癌9p21-22的LOH精细缺失图谱,将其最小共同缺失区确定在D9S161-D9S1853之间.通过系统分析该缺失区代表新基因部分表达序列标签（...; 钱骏; 关键词：鼻咽癌基因克隆 CDNA微阵列; 文献传递

人胚鼻咽上皮细胞cDNA文库的构建及鼻咽癌相关基因的筛选被引量：12: 2002年; 为了进一步分离人鼻咽组织特异性表达基因和鼻咽癌特异相关基因 ,采用SMART (switchingmechanismat 5′endofRNAtranscript)技术 ,构建了人胚鼻咽上皮cDNA文库 .从原代培养的人胚鼻咽上皮分离总RNA并纯化mRNA ,利用经修饰的oligo (dT)引物 (含sfiⅠB酶切位点 )合成cDNA第一链 ,同时根据真核生物mRNA5′端帽子结构特点 ,利用SMART核苷酸 (含sfiⅠA酶切位点 )作为cDNA第一链在mRNA 5′端延伸出去的模板 ,进而以此序列为引物利用LD PCR (long distance PCR)合成双链cDNA ,双链cDNA经sfiⅠ (ⅠA和ⅠB)酶切和过柱分级分离后 ,克隆入经sfiⅠ酶切的λTrip1EX2载体后经体外包装而成cDNA文库 .结果表明 ,原始人胚鼻咽上皮cDNA文库获得 1 0× 10 6个重组子 ,重组率达 96 % .文库扩增后 ,滴度达 7 8× 10 9pfu ml,插入cDNA平均长度为 1 2kb ,用PCR从该文库扩增出本实验室新克隆的鼻咽癌相关基因NAG4的全长cDNA .构建的人胚鼻咽上皮cDNA文库具有良好的质量 ,该cDNA文库为进一步筛选。; 张必成曹利钱骏余鹰李伟芳向娟娟李桂源; 关键词：鼻咽上皮细胞 CDNA文库鼻咽癌胚胎基因克隆

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钱骏

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