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含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽的白细胞介素-24突变体真核表达载体的构建及其体外抗肝癌作用: 2009年; 目的构建含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽的白细胞介素（IL）-24突变体（RGD-IL-24）真核表达质粒，观察其对肝癌细胞的抑制作用。方法利用重叠PCR技术在IL-24cDNA中插入GGT三个碱基，获得RGD—IL-24cDNA。将其克隆入真核表达载体pcDNA3．1（＋），构建pcDNA3．1／RGD—IL-24。将pcDNA3．1／RGD—IL-24及作为对照的pcDNA3．1／IL-24转染肝癌细胞HepG2，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测IL-24mRNA表达；Westernblot检测IL-24蛋白表达；噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖；FITC-AnnexinV染色检测细胞凋亡；Westernblot检测bax、bcl-2表达。结果测序证明pcDNA3．1／RGD—IL-24构建成功。RT—PCR、Westernblot证实转染pcDNA3．1／RGD—IL-24的肝癌HepG2细胞表达IL-24。pcDNA3．1／RGD—IL-24、pcDNA3．1／IL-24处理组HepG2细胞存活率分别为（0．382±0．064、0．563±0．038），凋亡细胞阳性率分别为（0．346±0．049、0．163±0．087），两组差异均有统计学意义。Westernblot证实pcDNA3．1／RGD—IL-24促进bax表达、抑制bel-2表达作用强于pcDNA3．1／IL-24。结论RGD-IL-24真核表达质粒不仅不影响IL-24表达，且能显著增强IL-24诱导肝癌细胞凋亡及抑制肿瘤生长作用。; 徐为张宝福杨志霞邸洁慧李海龙孙晓磊高超刘俊杰顾玉明韩正祥李望郑骏年; 关键词：IL-24 突变体 RGD肽肝癌治疗

含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽白细胞介素-24突变体蛋白对肝癌细胞抑制作用被引量：2: 2009年; 目的观察含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽模体的白细胞介素（IL）-24突变体蛋白（RGD—IL-24）对肝癌细胞的抑制作用。方法肝癌HepG2细胞分别加入各10μl的RGD-IL-24（8mg／L）、IL-24（8m（L）和磷酸盐缓冲液（PBS），噻唑蓝（MTr）比色法检测HepG2细胞生长抑制作用；DAPI染色检测HepG2细胞凋亡；免疫印迹法检测HepG2细胞bax、bel-2及Caspase-3蛋白表达；黏附实验检测与HepG2细胞的靶向黏附。结果RGD—IL-24、IL-24治疗4d后HepG2细胞存活率分别为（0．219±0．015）、（0．397±0．009），与对照组（0．823±0．013）比较差异有统计学意义（P〈0．01）。RGD—IL-24、IL-24治疗组细胞凋亡率分别为（0．631±0．027）、（0．472±0．031），与对照组（0．082±0．013）比较差异有统计学意义（P〈0．01）。RGD—IL-24抑制HepG2细胞生长、诱导凋亡效果均比IL-24显著增强（P〈0．05）。与IL-24治疗组比较，RGD—IL-24治疗组HepG2细胞促凋亡蛋白bax增加、抗凋亡蛋白bcl-2减少、活化Caspase-3蛋白量增加。黏附实验证实RGD-IL-24与HepG2细胞的靶向结合作用增强。结论含RGD肽模体的IL-24蛋白能通过与肝癌HepG2细胞的靶向结合增强其凋亡诱导作用。; 顾玉明徐为张宝福韩正祥邸洁慧李海龙高超刘俊杰郑骏年; 关键词：白细胞介素-24 突变体蛋白 RGD肽肝癌

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邸洁慧

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