贺綦
- 作品数：5 被引量：21H指数：4
- 供职机构：东北农业大学动物科学技术学院农业部鸡遗传育种重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家肉鸡产业技术体系建设专项博士后研究人员落户黑龙江科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸡肝脏型脂肪酸结合蛋白基因启动子活性分析被引量：4
- 2012年
- PCR扩增鸡L-FABP基因5′侧翼区约2kb的DNA片段,进行克隆并测序,构建了鸡L-FABP基因报告基因系列缺失载体,瞬时转染进入人肝癌细胞系,利用双荧光素酶报告基因系统测定了荧光素酶活性。在线分析软件发现鸡L-FABP基因启动子区存在HNF-1、SREBP-1、AP-1、C/EBP、Oct-1、TATA、CCAAT、GATA-1等调控元件,没有发现CpG岛。报告基因结果表明鸡L-FABP基因启动子-2 076bp/-20bp区域具有最强的启动子活性,-522bp/-20bp区域启动子活性最弱;C/EBPα可以显著的抑制鸡L-FABP基因的表达,这些结果为深入研究鸡L-FABP的表达调控机制奠定了基础。
- 高广亮冷丽张会丰贺綦李辉王启贵
- 关键词：启动子活性分析
- 鸡L-FABP启动子区C/EBPα结合位点的定点突变分析被引量：2
- 2015年
- 为进一步分析L-FABP启动子区域中的C/EBPα结合位点以确定其在L-FABP转录中的调控作用。本研究采用定点突变方法将L-FABP启动子区域中的C/EBPα结合位点进行有效突变。结果显示,C/EBPα外源过表达可以抑制L-FABP启动子活性,突变L-FABP启动子区域中C/EBPα结合位点后L-FABP的启动子活性明显升高。这些结果表明,鸡L-FABP基因受到C/EBPα基因负调控作用,且C/EBPα很可能通过与该位点结合参与L-FABP的转录调控,为进一步研究C/EBPα在L-FABP基因转录调控中的作用提供重要依据。
- 贺綦贺綦李辉孙婴宁
- 关键词：启动子定点突变
- HOPX基因过表达对鸡前脂肪细胞增殖的影响被引量：5
- 2015年
- 【目的】构建鸡HOPX基因(homeodomain only protein X)全长编码区(coding region sequence,CDS)的真核表达载体,转染鸡原代前脂肪细胞,探讨HOPX基因过表达对鸡原代前脂肪细胞增殖的影响。【方法】利用Primer Premier 5.0软件设计鸡HOPX基因CDS区上、下游引物,以AA肉鸡腹部脂肪组织的c DNA为模板,采用PCR扩增、克隆鸡HOPX基因全长CDS区,并将其亚克隆至真核表达载体(p CMV-HA vector),获得HOPX基因的真核表达载体p CMV-HA-HOPX。采用双酶切鉴定、测序及Western blotting方法分析鉴定p CMV-HA-HOPX。采用胶原酶法分离培养12日龄AA商品肉仔鸡腹部脂肪组织原代前脂肪细胞,瞬时转染p CMV-HA-HOPX,转染6 h时后消化细胞,按照每孔50 000个细胞数接种12孔培养板,并在细胞贴壁0、24、48和72 h,分别采用显微镜观察和CCK-8细胞增殖检测试剂盒分析HOPX基因过表达对鸡原代前脂肪细胞增殖的影响;同时,利用TRIzol法提取组织和细胞总RNA,并反转录合成c DNA,采用Real-time RT-PCR方法分析细胞增殖标志基因Cyclin D1和PCNA的m RNA表达。【结果】测序结果显示,鸡HOPX基因的全长CDS区大小为222 bp,与NCBI发布的鸡HOPX基因m RNA序列(NM_204556)一致;利用HA标签抗体的Western blotting分析显示,真核表达载体p CMV-HA-HOPX能够表达出预期大小的蛋白分子(约9.5k D),表明鸡HOPX基因的真核表达载体p CMV-HA-HOPX构建成功。显微镜观察发现,转染p CMV-HA-HOPX载体的细胞(HOPX过表达组)在细胞贴壁后培养24和48 h的细胞数量低于转染p CMV-HA vector空载体(空载体对照组)的细胞数量;CCK-8检测分析发现,转染p CMV-HA-HOPX载体细胞的吸光度值(OD值)在细胞贴壁后培养24、48和72 h都极显著低于空载体对照组(P<0.01)。与细胞增殖检测结果相一致,细胞增殖标志基因表达检测分析发现,在细胞贴壁后培养24 h后,HOPX过表达组细胞Cyclin D1基因的m RNA表达量显著低于空载体对照组(P<0.05);在细胞�
- 史洪岩贺綦程敏孙婴宁李辉王宁
- 关键词：前脂肪细胞增殖
- 鸡KLF3基因的表达规律及其对脂肪细胞分化的影响研究被引量：6
- 2015年
- 为研究鸡KLF3(Gallus gallus Krüppel-like factor 3,gKLF3)基因的表达规律及其对脂肪细胞分化的影响,利用qRT-PCR检测了其在肉鸡脂肪组织和脂肪细胞中的表达特点,并利用基因过表达技术研究gKLF3基因对脂肪细胞分化的影响。结果显示,gKLF3在2~10周龄肉鸡腹部脂肪组织中持续表达,10周龄高脂肉鸡腹部脂肪组织gKLF3表达量显著高于低脂肉鸡(P<0.05);gKLF3在鸡成熟脂肪细胞的表达量低于前脂肪细胞(P<0.01);体外培养的鸡前脂肪细胞经油酸诱导分化后,gKLF3基因表达量均有低于对照组的趋势;过表达gKLF3基因有抑制脂肪细胞分化,以及抑制C/EBPα、FAS基因表达(P<0.01)的趋势。研究结果表明,gKLF3基因在鸡腹部脂肪组织生长发育过程中发挥重要作用,其可能是通过抑制C/EBPα、FAS基因表达进而抑制脂肪细胞分化实现的。
- 王海霞张志威贺綦王宁王宇祥曹志平李辉
- 关键词：脂肪细胞分化基因表达
- 鸡转录因子C/EBPα、KLF2、KLF3、KLF7、PPARα对L-FABP启动子活性的影响被引量：7
- 2014年
- L-FABP是脂肪酸结合蛋白家族重要的成员。研究发现L-FABP在不饱和脂肪酸、饱和脂肪酸、胆固醇、胆汁酸等转运过程中扮演重要角色。目前,对哺乳动物L-FABP的活性调控机制的研究已经取得了一定进展,但在禽类上的相关报道还比较少见。为探讨鸡L-FABP基因的表达调控机制,本研究利用报告基因方法在人肝癌细胞系(HEGP2)中研究C/EBPα、KLF2、KLF3、KLF7、PPARα基因对鸡L-FABP基因启动子活性的影响。结果表明:C/EBPα显著抑制了鸡L-FABP基因的表达,KLF2、KLF3、KLF7、PPARα基因显著促进了L-FABP基因的表达,这些结果为深入研究鸡L-FABP基因表达调控机制奠定了基础。
- 贺綦史洪岩王海霞高广亮王启贵李辉
- 关键词：启动子活性分析
