王进刚
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：广州医学院第二附属医院更多>>
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- 过表达E2F1保护神经元依赖其转录活性
- 2009年
- 目的探讨E2F1对小脑颗粒神经元死活的影响及机制。方法构建表达质粒pcDNA-E2F1(pE2F1)及突变体pcDNA-E2F1-m132(pm132),转染293细胞验证表达,转染小脑颗粒神经元用6×E2F-luciferase报道基因检测转录活性。转染神经元24 h或48 h后Hoechst 33258核染色,统计转染pE2FI及pm132神经元(GFP阳性细胞)的核固缩率(即凋亡率);或者转染48 h后进行25K、5K处理12hr,统计凋亡率。结果构建质粒表达E2F1及突变体E2F1-m132成功,E2F1具有转录活性而E2F1-m132没有;表达E2F1及E2F1-m132均未诱导神经元凋亡(P>0.05);表达E2F1抑制5K诱导的神经元凋亡(P<0.05),而E2F1-m132没有抑制效应。结论E2F1抑制神经元凋亡依赖其转录活性。
- 袁忠民李丹王进刚李明昌陆永建何伟文
- 关键词：E2F1转录活性小脑颗粒神经元凋亡
- 过表达转录因子E2F1对小脑颗粒神经元凋亡的影响
- 2009年
- 目的探讨过表达转录因子E2F1对小脑颗粒神经元凋亡的影响。方法构建pE2F1表达质粒,转染293细胞验证其表达,双报道基因系统检测其转录活性。体外培养小脑颗粒神经元,钙磷法转染pE2F1表达,转染pcDNA空载体组作为对照,于转染12、24、48 h后运用Hoechst 33258染色检测转染细胞的核固缩率(即凋亡率);转染pE2F1和pcDNA 48 h后的小脑颗粒神经元进行高钾和低钾处理12 h,统计细胞凋亡率。结果成功构建pE2F1表达质粒,且证实该质粒具有转录活性。与转染pcDNA空载体组比较,转染pE2F1后不同时间点小脑颗粒神经元的凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。pE2F1转染组和pcDNA转染组高钾处理后的凋亡率分别为(12±4)%和(11±3)%,差异无统计学意义(P>0.05);低钾处理后的凋亡率分别为(42±3)%和(30±2)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达E2F1对小脑颗粒神经元的凋亡无明显影响,但抑制低钾处理诱导的小脑颗粒神经元凋亡。
- 袁忠民李丹王进刚李明昌陆永建何伟文
- 关键词：E2F1过表达小脑颗粒神经元凋亡
