王小红
- 作品数：8 被引量：28H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SLC真核表达质粒的剂量-趋化效应及抑瘤效应研究被引量：1
- 2006年
- 目的:观察次级淋巴组织趋化因子(SLC)真核表达质粒剂量-趋化效应关系及不同剂量体内应用时对小鼠H22肝癌的治疗作用。方法:构建了小鼠SLC真核表达质粒(pSLC),体外转染检测pSLC在体外的剂量-趋化效应关系,体内不同剂量的pSLC质粒局部注射检测其表达情况及体内的剂量-趋化效应关系,并观察不同剂量的pSLC对小鼠H22肝癌治疗的剂效关系。结果:当剂量在0·5μg以下时,pSLC在体外转染的趋化效应与转染剂量呈正相关,但在0·75μg时明显下降;pSLC体内局部注射时,在所检测的200μg剂量以内,随注射质粒剂量的增加,其表达的mRNA水平逐渐增加,相应地,对淋巴细胞的趋化作用亦逐渐增强,pSLC对肿瘤的抑制作用亦随其剂量的增加而明显增强(P<0·001)。结论:体内局部转染表达pSLC,能够有效趋化聚集免疫细胞,对肿瘤产生免疫治疗效应。通过提高转染表达效果,可增加SLC趋化作用,增强肿瘤免疫治疗效应。
- 贺宇飞张桂梅王小红张慧袁野李东冯作化
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子质粒H22肝癌
- 中国汉坦病毒H8205株G2糖蛋白基因的克隆及在真核细胞中的瞬时表达被引量：3
- 2002年
- 从感染病毒乳鼠脑组织提取总 RNA,采用 RT- PCR和分子克隆技术将扩增到的 G2糖蛋白基因插入含 CMV启动子的 pc DNA3.1/ His质粒载体中 ,通过脂质体介导转染 COS- 7细胞 ,用 SDS- PAGE、 Western- blot及 IFIA方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性。结果证明获得正向插入的 G2 - pc DNA3.1/ His重组表达质粒 ,表达产物的相对分子量为 5 6 ku,与理论预期大小一致 ,并且可与汉坦病毒 H82 0 5株的腹水抗体起特异反应。表明构建的 G2 - pc DNA3.1/His重组质粒所表达的蛋白为中国汉坦病毒株特有 ,能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性 ,重组质粒可应用于汉坦病毒的
- 王小红黄汉菊任刚李钟铎陈秀珠
- 关键词：汉坦病毒DNA疫苗基因表达基因克隆真核细胞
- 汉坦病毒G2囊膜蛋白基因的克隆及其免疫原性的初步研究被引量：1
- 2004年
- 目的 构建汉坦病毒G2囊膜蛋白基因真核表达载体 ,进一步研究其免疫效果。方法 采用PCR方法扩增出G2基因 ,亚克隆于 pcDNA3.1/HisB载体 ,重组阳性克隆进行酶切和测序鉴定。将重组质粒免疫BALB/C小鼠 ,用间接免疫荧光法 (IFA)检测免疫小鼠血清中抗汉坦病毒76～ 118株的交叉抗体。结果 5只免疫小鼠血清中均检测到特异性的抗汉坦病毒 76～ 118株的交叉抗体 ,与对照组相比有显著性差异 ,其滴度为 1∶10 .99。结论 G2囊膜蛋白基因构建成功并能刺激机体产生特异性抗体 ,但其效价不高 ,该研究结果为研制有效的HFRS核酸疫苗奠定一定的实验基础。
- 黄汉菊吴志洪王小红
- 关键词：汉坦病毒免疫原性免疫小鼠显著性差异
- B7-1B7-H1相对比例变化对Hsp70-肽复合物抗肿瘤免疫效应的影响被引量：4
- 2005年
- 目的 :探讨Hsp70-肽复合物对B7-1 B7-H1相对比例的影响及真核表达可溶性PD-1(sPD-1)对Hsp70-肽复合物抗肿瘤作用的影响。方法 :通过RT-PCR和半定量PCR技术检测Hsp70 肽复合物体外刺激和体内免疫对小鼠脾细胞正调控共刺激分子B7-1和抑制性共刺激分子B7-H1及其受体PD-1表达的影响 ;体内转染表达sPD-1后 ,观察Hsp70-肽复合物免疫小鼠的肿瘤生长以及脾淋巴细胞毒性的变化。结果 :基因表达检测表明 ,Hsp70- 肽复合物体外刺激的小鼠脾细胞B7-1mRNA和B7-H1mRNA的水平随时间而变化 ,B7-1/B7-H1比值随刺激时间而增高 ;Hsp70-肽复合物体内免疫小鼠后期脾细胞B7-1表达下降 ,B7-H1及其受体PD-1表达上调 ,B7-1/B7 H1比值逆转 ;体内表达sPD-1可显著增强和延长Hsp70 肽复合物的抑瘤效果 ;体内表达sPD-1可提高Hsp70-肽复合物免疫的荷瘤小鼠脾细胞的杀伤率。结论 :Hsp70-肽复合物的刺激引起共刺激分子B7-1和B7-H1表达的变化 ,B7-1/B7-H1的比例与激活效应相关 ,sPD-1通过阻抑B7-H1/PD-1途径、上调B7-1/B7-H1比例 ,可增强免疫应答 ,提高Hsp70
- 王小红张桂梅贺宇飞冯作化
- 关键词：共刺激分子PD-1B7-H1B7-1
- 可溶性PD-1协同HSP70-肽复合物抑制荷瘤小鼠肝癌的研究被引量：7
- 2004年
- 目的 :研究基因转染和表达的可溶性PD 1(solubleprogrammeddeath 1,sPD 1)对HSP70 肽疫苗抗肿瘤效果的影响及协同机制。方法 :以HSP70 肽疫苗免疫BALB/c小鼠后 ,用半定量RT PCR技术检测和分析HSP70 肽疫苗对小鼠脾细胞上PD 1及其配体基因表达的影响。体内转染表达sPD 1,用MTT比色法检测HSP70 肽疫苗免疫小鼠对肿瘤生长的抑制作用以及脾淋巴细胞的细胞毒活性。结果 :单独的sPD 1就有抗肿瘤效应。HSP70 肽疫苗不仅能预先在动物体内诱导肿瘤特异性的CTL ,而且可使脾细胞上抑制性共刺激受体PD 1及其配体的表达显著升高。用sPD 1与HSP70 肽疫苗联合治疗荷瘤小鼠 ,能提高脾CTL的杀伤效率并延长HSP70 肽疫苗的免疫效果。结论 :sPD 1可通过阻断PD 1与其配体的结合作用 ,及减弱PD 1的负反馈抑制作用 ,而增强HSP70
- 王小红张桂梅贺宇飞张慧冯作化
- 关键词：共刺激分子PD-1B7-H1
- PD-1胞外段cDNA在真核细胞的表达与其功能鉴定被引量：11
- 2004年
- PD L PD 1是参与肿瘤免疫逃避的一条抑制性信号途径。为了用可溶性的PD 1受体阻断PD L PD 1的相互作用 ,将小鼠PD 1胞外段 (aa1 aa16 7)作为独立可溶性分子进行了真核表达 ,并对其功能进行鉴定。构建了编码小鼠PD 1胞外段cDNA(sPD 1)的真核质粒表达载体pPD 1A和编码sPD 1 GFP重组蛋白的真核质粒表达载体pPD 1B ;细胞转染实验表明其表达产物主要是分泌到细胞外的可溶性产物 (sPD 1) ,流式细胞仪检测表明sPD 1可有效结合PD 1配体 ;肿瘤细胞杀伤实验表明 ,sPD 1作用于肿瘤细胞或在脾淋巴细胞激活过程中作用于淋巴细胞 ,均可增强Hsp70 H2 2抗原肽复合物激活的脾淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的作用。sPD 1真核表达载体的构建为在肿瘤局部表达抑制性共刺激分子的可溶性受体 ,拮抗肿瘤微环境中负调节因素对T细胞的抑制作用 ,增强机体的抗肿瘤能力 。
- 贺宇飞张桂梅王小红张慧袁野李东冯作化
- 关键词：可溶性受体质粒载体真核细胞
- 沙眼衣原体的细胞培养与γ-干扰素被引量：1
- 2002年
- 为了探讨 γ-干扰素 (IFN- γ)对沙眼衣原体感染的细胞培养的影响 ,采用不同浓度 IFN- γ作用于沙眼衣原体感染的子宫颈癌细胞 (He L a) ,用透射电镜观察 He L a细胞内原体 (EB)和网状体 (RB) ,同时用反相高效液相色谱法(HPL C)测定细胞内色氨酸的浓度。结果显示 :不同浓度 IFN- γ作用下细胞内沙眼衣原体的 EB和 RB形态及数量不同 ,中浓度的 IFN- γ作用下胞内 EB和 RB轻度减少 ,高浓度的 IFN- γ作用下明显减少 ,沙眼衣原体生长受到抑制。且随IFN- γ浓度升高 ,细胞色氨酸浓度降低 ,二者呈负相关 ,提示 :IFN-
- 黄浩王小红
- 关键词：细胞培养Γ-干扰素沙眼衣原体色氨酸
- 重组可溶性PD-1免疫抑制性受体增强抗小鼠H22肝癌的免疫效应被引量：2
- 2004年
- 目的:探讨真核表达PD-1的重组可溶性分子(sPD-1)增强肿瘤局部免疫效应的作用机制。方法:采用半定量 RT-PCR方法检测PD-1的配体PD-L1和PD-L2在小鼠H22肝癌细胞和癌组织中的表达水平,流式细胞仪检测其在激活T细 胞表面的表达;体外细胞杀伤实验检测sPD-1作用于肿瘤细胞或脾细胞对Hsp70-H22抗原肽复合物激活的脾细胞杀伤H22 肝癌细胞的影响;体内抑瘤实验评价局部转染表达sPD-1的抗瘤作用。结果:H22肿瘤细胞本身表达PD-L1基因,PD-L1和 PD-L2基因在癌组织中的表达高于正常肌肉组织和单纯癌细胞;PD-L1亦表达于激活的T细胞表面;sPD-1可增强抗原特异性 激活的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤效应;在肿瘤接种部位肌注转染表达sPD-1可显著抑制H22肿瘤生长。结论:在肿瘤局部 表达可溶性受体sPD-1阻抑PD-L／PD-1通路,既可作用于免疫细胞来提高其正向免疫力,同时也可拮抗H22细胞通过PD-L 对免疫细胞的抑制作用,可望成为提高肿瘤基因治疗疗效的一种新手段。
- 贺宇飞张桂梅王小红张慧袁野李东冯作化
- 关键词：PD-1免疫耐受肝癌可溶性受体基因治疗
