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王丽丽
作品数:
5
被引量:10
H指数:2
供职机构:
吉林大学第二医院
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相关领域:
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合作作者
张崇芳
吉林大学第二医院
周扬
吉林大学第二医院
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吉林大学第二医院
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振荡法分离小鼠视网膜色素上皮细胞提取总RNA的效果
2016年
目的探讨应用振荡法分离小鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞并进行总RNA提取的效果。方法实验研究。应用机械法对4只小鼠眼制作眼杯.去除视网膜后应用RNA保护试剂及振荡的方法对小鼠RPE进行分离,将应用振荡法分离后的眼杯铺片,采用免疫细胞化学方法检测分离后RPE细胞残留情况;收集分离的细胞,提取总RNA。同时分别应用自发分离法、酶法、眼杯法各对4只小鼠眼RPE进行分离,提取总RNA,比较不同方法提取的RPE细胞总RNA量,并应用实时定量PCR方法对RPE细胞中RPE65、vWF及COL6A1mRNA表达水平进行比较。数据采用单因素方差分析、独立样本t检验进行比较。结果采用4种方法进行RPE分离得到的总RNA量差异有统计学意义(F=8.538,P〈0.01),免疫细胞化学方法证实应用振荡法可以使RPE细胞与脉络膜完全分离,得到的总RNA量为(234.47±49.13)ng,与自发分离法及酶法比较差异无统计学意义(P〉0.05),但低于眼杯法(P〈0.05)。4种方法得到的RPE65的mRNA表达量差异有统计学意义(F=38.453,P〈0.01),通过实时定量PCR法检测振荡法RPE65的mRNA表达量与自发分离法相当(P〉0.05),低于酶法(P〈0.01),但要高于眼杯法(P〈0.01)。体现脉络膜细胞污染程度的标志物vWF及COL6A1mRNA相对表达量,4种方法差异有统计学意义(F=45.432、90.498,P〈0.01)。振荡法vwFmRNA表达水平低于自发分离法(P〈0.05),与酶法相似(P〉0.05),远低于眼杯法(P〈0.01);COL6AlmRNA表达水平与自发分离法及酶法相似(P〉0.05),远低于眼杯法(P〈0.01)。结论应用振荡法可有效分离小鼠RPE细胞,并最大限度地降低来自脉络膜的污染.经总RNA提取后可得到较多的总RNA量及较好的质量,此方法方便快捷、稳定性较好,适合小样本量的RPE细胞的基因转录水平分析。
齐首楠
王晨光
赵亮亮
苏冠方
程岩
田蕊
杨欣悦
王丽丽
关键词:
视网膜色素上皮
细胞分离
小鼠
RNA提取
乳腺癌康复期的家庭护理
被引量:3
2007年
王丽丽
张崇芳
王立坤
关键词:
乳腺癌
康复期
家庭护理
肺癌患者心理分析及护理对策
被引量:7
2007年
张崇芳
边丽
王丽丽
关键词:
肺癌
心理分析
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