沈美娟
- 作品数：10 被引量：17H指数：3
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国科学院知识创新工程更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 利用正调控基因提高阿维菌素工业菌种的效价
- 本发明公开了一种外源正调控基因的用途，用于导入除虫链霉菌的染色体中，提高除虫链霉菌的阿维菌素(Avermectin)产量，所述的外源正调控基因选自：aveR基因、orfX基因、或asfR基因。本发明还公开了一种提高阿维菌...
- 覃重军张亮夏海洋陈威华胡敏杰沈美娟
- 文献传递
- 利用正调控基因提高阿维菌素工业菌种的效价
- 本发明公开了一种外源正调控基因的用途，用于导入除虫链霉菌的染色体中，提高除虫链霉菌的阿维菌素(Avermectin)产量，所述的外源正调控基因选自：aveR基因、orfX基因、或asfR基因。本发明还公开了一种提高阿维菌...
- 覃重军张亮夏海洋陈威华胡敏杰沈美娟
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- 通过构建“大小染色体”高效敲除大肠杆菌基因组的方法
- 本发明公开了一种通过构建“大小染色体”高效敲除大肠杆菌基因组的方法。此外，利用本发明，在回补了已知生存必需基因而不能敲除基因组中对应的区域时，通过进一步的将该区域细分，可以定位出可能存在的新的生存必需基因或调控元件。
- 覃重军薛小莉姜鹏王韬邵洋洋周敏钟莉沈美娟
- 文献传递
- 构建有序排列的除虫链霉菌基因组的柯斯文库用于工业生产菌株的遗传改造被引量：6
- 2009年
- 以容纳DNA大片段的柯斯质粒Supercos-1为载体,构建了除虫链霉菌的基因组文库。对约1000个柯斯质粒上插入片段的两端进行测序,并利用全基因组序列的信息,构建了覆盖约91%基因组的有序排列的柯斯文库。利用λ-Red高效DNA重组和大肠埃希菌-链霉菌接合转移技术,建立了除虫链霉菌的基因组遗传操作系统。运用该系统可以在除虫链霉菌工业菌株中进行高效、精确的基因敲除工作和连续的基因缺失研究,获得可以用来生产多拉菌素的工程菌株。
- 夏海洋黄隽胡敏杰沈美娟谢鹏飞张亮王海彬覃重军
- 关键词：除虫链霉菌基因敲除
- 变铅青链霉菌内源线性质粒接合转移必需功能区的鉴定(英文)被引量：1
- 2006年
- 通常细菌间环型质粒在接合转移过程中,单链质粒DNA在质粒内部“oriT”接合转移起始位点发生缺刻.随后,打开的单链质粒DNA通过细胞膜的Ⅳ型分泌系统转移到受体菌中.但是,链霉菌中的接合型线型质粒带有游离3′端,5′端与末端蛋白结合,因而不能以细胞-细胞间方式转移单链缺刻DNA.报道了变铅青链霉菌线型质粒SLP2衍生的环型质粒,与SLP2一样可以高频高效接合转移,并鉴定了接合转移功能区.质粒有效的接合转移功能区包含6个共转录的基因,分别编码一个Tra样的DNA转移酶、胞壁水解酶、2个膜蛋白(可以与ATP结合蛋白相互作用)和一个功能未知的蛋白质.从SalⅠR-/M-向SalⅠR/M宿主转移的质粒频率下降表明,线型和环型的质粒都是以双链的形式转移的.上述研究结果表明SLP2衍生的线型质粒和环型质粒以相似的与细胞膜/胞壁功能相关的机理进行接合转移.
- 许铭翾朱颖旻沈美娟姜卫红赵国屏覃重军
- 关键词：链霉菌线型质粒
- 几种调控基因对除虫链霉菌工业生产株的抗生素效价的影响被引量：4
- 2006年
- 在模式链霉菌(如天蓝色链霉菌和变铅青链霉菌)中导入许多抗生素生物合成的调控基因可以大幅度提高抗生素的含量。本文报道利用链霉菌的整合质粒克隆几种已知的调控基因,并通过接合转移从大肠埃希菌中导入产生avermectin和多拉菌素的除虫链霉菌工业生产菌株中。发现3种调控基因afsR、aveR和orfX对菌株MMR630中avermectin的含量均可以提高约1倍。但是,以上的3种,加上另外3种调控基因分别导入菌株G11后,发现除afsB提高约13%外,其余调控基因使菌株产生多拉菌素的含量反而有不同程度的降低。将调控基因afsB置于链霉菌强启动子PermE下表达降低了菌株G11中多拉菌素的含量。上述结果表明,调控基因对不同链霉菌的抗生素生物合成具有不同的影响,反映了抗生素生物合成确实受到了复杂网络的调控。
- 夏海洋张亮陈威华胡敏杰沈美娟杨长举黄隽王海彬覃重军
- 关键词：调控基因AVERMECTIN多拉菌素抗生素发酵
- 红球菌线型质粒pNSL1的克隆、测序和复制区的鉴定
- 2010年
- 从红球菌NS1中检测到两个线型质粒pNSL1和pNSL2。【目的】克隆、测序和分析pNSL1,并鉴定质粒的复制区。【方法】利用脉冲电泳方法从凝胶中回收大量的质粒DNA,进行鸟枪法克隆、测序和拼接,通过生物信息学分析和实验证明质粒的自主复制区。【结果】克隆、测序和拼接获得pNSL1全长为117252bp的序列,包括在红球菌中保守的1282bp端粒的序列。序列预测含有103个蛋白编码区,包括质粒的复制、分配、转移等功能基因。将pNSL1中一个与分枝杆菌质粒的复制基因同源的pNSL1.038及其上游的767bp非编码序列克隆到大肠杆菌质粒,电击转化珊瑚诺卡氏菌4.1037,获得了抗性转化子。【结论】克隆、测序了全长的线型质粒pNSL1,鉴定了质粒的复制区。
- 朱颖旻许铭翾沈美娟陈振华覃重军
- 关键词：红球菌线型质粒端粒
- 通过构建“大小染色体”高效敲除大肠杆菌基因组的方法
- 本发明公开了一种通过构建“大小染色体”高效敲除大肠杆菌基因组的方法。此外，利用本发明，在回补了已知生存必需基因而不能敲除基因组中对应的区域时，通过进一步的将该区域细分，可以定位出可能存在的新的生存必需基因或调控元件。
- 覃重军薛小莉姜鹏王韬邵洋洋周敏钟莉沈美娟
- 文献传递
- 地中海拟无枝菌酸菌专一的噬菌体φMMR1的研究被引量：6
- 1999年
- 从生产力复霉素ＳＶ的地中海拟无枝菌酸菌（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ）Ｕ１１９的工业发酵罐裂解液中，分离到一株新的噬菌体φＭＭＲ。该噬菌体经多次单斑分离、纯化，得到的噬斑多数为清亮的（约占９０％），其它噬斑为浑浊斑，但未能从中分离到溶源菌。在被测试的可能的宿主菌中，φＭＭＲ１不能感染除地中海拟无枝菌酸菌以外的菌株，说明寄主范围很窄。对φＭＭＲ１的增殖和储存条件，诸如ｐＨ值、温度、二价金属离子、有机溶剂等对φＭＭＲ１的影响进行了较详细的研究。电子显微镜观察揭示，φＭＭＲ１为长尾无收缩尾鞘，头为正多面体，属长尾噬菌体科Ｂ１亚群。制备了φＭＭＲ１的兔抗血清，并测定了φＭＭＲ１以地中海拟无枝菌酸菌Ｕ－３２为宿主菌的一步生长曲线。使用２４种限制性内切酶对φＭＭＲ１ＤＮＡ进行了单酶切分析。结果表明，φＭＭＲ１基因组ＤＮＡ为线状双链，未找到粘性末端，大小约为５９６ｋｂ。φＭＭＲ１ＤＮＡ的Ｇ＋Ｃ含量为６７％。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了噬菌体的外壳蛋白多肽的组成。纯化的裸露噬菌体ＤＮＡ可利用电穿孔技术成功地转染地中海拟无枝菌酸菌Ｕ－３２。
- 李维泉姚鹤鸣沈美娟沈美娟赵国屏金玫蕾
- 关键词：放线菌噬菌体转染
- 西藏土壤中分离的链霉菌含有丰富的线型和环型质粒
- 2012年
- 【目的】研究极端自然环境对链霉菌线型和环型质粒分布的影响。【方法】从西藏高原采集了20份土壤样品,分离和初步鉴定链霉菌,提取和检测质粒DNA。【结果】从中分离到46株链霉菌,其中有23株菌含有1 4个线型质粒,大小在19 650 kb之间,8个菌株含有1 4个环型质粒,大小在4 80 kb之间。【结论】西藏土壤来源的链霉菌含有大量的、多样的线型质粒和环型质粒,暗示极端环境中诸如强紫外辐射等可能会引发DNA损伤和修复,进而造成质粒的多样性。
- 代玉梅杨勇范云周敏沈美娟钟莉蔡晓布覃重军
- 关键词：链霉菌线型质粒
