沈忠林 作品数:9 被引量:15 H指数:3 供职机构: 山东省医药生物技术研究中心 更多>> 发文基金: 山东省科技攻关计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
肝素抗凝血对实时荧光定量PCR技术测定HBV DNA结果的影响 2007年 沈忠林关键词:实时荧光定量 抗凝血 肝素钠 抗凝剂浓度 真空采血管 用于乙肝病毒的荧光定量PCR检测试剂盒 乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法及专用试剂盒,属于生物技术领域。本发明的方法是通过对乙型肝炎病毒表面抗原,核心抗原和E抗原区等三对不同的引物和探针的优化,筛选出了扩增效果最好的一对引物和探针。比较了用不同方法提取的血清... 鲁艳芹 韩金祥 王传玺 戚鹏 沈忠林文献传递 PEG沉淀结合碱裂解法提取DNA可消除肝素对PCR检测结果的影响 被引量:3 2007年 沈忠林 孟红 鲁艳芹 岳爱玲关键词:HBVDNA定量 PCR 碱裂解法 肝素 乙型肝炎病毒基因型、拉米夫定耐药突变的RFLP检测及临床相关性分析 被引量:2 2007年 目的对乙型肝炎(简称乙肝)肝病毒进行基因分型,检测患者服用拉米夫定后血清中乙肝病毒突变情况,并进行临床相关性分析。方法设计乙肝病毒突变及基因分型特异性引物和酶切位点,系用限制性片断长度多态性(RFLP)分析法检测突变类型并对乙肝病毒进行基因分型。结果在115份被检测的血清标本中,75份(65%)标本为野生型,18份(15.7%)标本为YIDD突变,10份(8.7%)标本为YVDD突变;在混合型突变中,YIDD+YVDD存在于6份(5.2%)标本中,YMDD+YIDD存在于4份(3.5%)标本中,2份(1.7%)标本为YMDD+YVDD混合突变型;未检测到YSDD突变型。在180位点的突变检测中,98份(85%)标本为野生型,5份(4.3%)标本为rtL180M,L180M+M204I存在于8份(6.96%)标本中,另4份(3.5%)标本为L180M+M204V混合突变型。在115份标本中,102份标本为C基因型,13份标本为B基因型,未发现其他基因型。通过χ2检验,乙肝病毒YMDD突变与患者的性别、血清DNA水平、病毒基因型之间没有相关性(P>0.05),而乙肝病毒YMDD变异与患者服用拉米夫定的时间长短有相关性(P<0.05),用药时间越长,发生突变的几率越大。乙肝患者服用拉米夫定后,180位点的突变和204位点突变具有相关性(P<0.05)。结论采用RFLP分析法可以有效地检测乙肝病毒YMDD突变并对乙肝病毒进行基因分型。 卜范峰 鲁艳芹 韩金祥 王丽娜 冯照雷 沈忠林 高刚关键词:乙型肝炎病毒 突变 基因分型 YMDD 浅析糖尿病并发症患者血清镁测定及临床意义 被引量:3 2007年 目的探讨血清镁离子(magnesium,Mg2+)水平在糖尿病中的临床意义。方法利用日立7170全自动生化分析仪对69例糖尿病患者(其中无并发症组23例和有并发症组46例)与对照组85例健康者的血清镁离子水平进行测定比较。结果69例糖尿病患者组的血清镁离子水平均不同程度低于正常对照组,尤其以有并发症组镁离子水平更低。结论镁离子缺乏是引起糖尿病代谢紊乱的原因之一,提示糖尿病患者在监测血糖的同时,应加强对血清镁离子水平的监测,以便于指导临床用药和判断预后。 吴镇 沈忠林关键词:血清镁离子 糖尿病 实时定量PCR检测乙型肝炎病毒拉米夫定耐药突变及其与临床指标的相关性 被引量:5 2008年 目的采用实时定量PCR检测接受与未接受拉米夫定治疗的乙肝患者血清中乙肝病毒(HBV)突变情况,并将检测结果与临床指标进行相关性分析。方法采用touch-down PCR反应程序,并结合SYBR Green Ⅰ染料进行实时定量PCR,检测115份乙肝患者血清标本(其中50名患者未服用过拉米夫定,65名患者服用过拉米夫定)。随机选择115份标本中的30份用同样的方法提取血清DNA,进行PCR扩增及测序,并与实时定量PCR检测结果进行比较。将乙肝病毒YMDD突变实时定量PCR检测结果与临床各指标之间进行相关性分析。结果115份血清标本中,75份含有野生型HBV(其中49份来自未接受过拉米夫定治疗的患者),40份含有YMDD突变的HBV(其中1份来自未接受过拉米夫定治疗的患者);180位点的突变检测中,98份标本含有野生型HBV,17份标本含有突变型HBV。随机选取的30份标本测序结果与实时定量PCR检测结果完全一致。乙肝病毒拉米夫定耐药突变与患者的性别、血清DNA水平、病毒基因型之间无相关性,而乙肝病毒YMDD变异与患者服用拉米夫定的时间长短有相关性,用药时间越长,发生突变的几率越大。乙肝患者服用拉米夫定后,180和204位点突变具有相关性。结论实时定量PCR可以高效、准确地检测拉米夫定治疗后乙肝病毒的耐药突变。 卜范峰 鲁艳芹 韩金祥 冯照雷 王丽娜 沈忠林关键词:乙型肝炎病毒 突变 实时定量PCR 乙肝病毒突变位点的寡核苷酸与肽核酸阵列杂交检测 被引量:2 2007年 目的:比较利用寡核苷酸阵列和肽核酸阵列检测乙肝病毒突变位点。方法:针对乙肝病毒常见的1762A-T与1764G-A联合突变、1858C-T、1896G-A 3个突变位点,设计寡脱氧核苷酸和肽核酸检测探针,探针经固定后分别与不对称PCR荧光标记的靶DNA杂交,扫描分析荧光信号强度,DNA序列分析3位点的变异情况。结果:对于寡核苷酸芯片,1762与1764联合位点、1858以及1896位点的野生型探针与突变探针荧光强度的比值分别为1.44、1/1.24、1.05。对于肽核酸芯片,相应位点的野生型探针与突变探针荧光强度的比值分别为2.8、1/3.02、1.71。DNA序列分析结果表明该样本中1858位点为突变位点,1896以及1762与1764联合位点不存在突变。结论:与寡脱氧核苷酸探针相比,肽核酸与靶DNA杂交结合能力和识别单碱基错配能力均高于相应的寡脱氧核苷酸,二者杂交结果与测序结果一致。 鲁艳芹 韩金祥 沈忠林 朱波关键词:突变 杂交 乙肝病毒 初诊慢肝患者血清中乙肝病毒DNA载量与血清标志物的关系 2006年 目的探讨初诊慢性乙型肝炎血清标志物与HBV DNA的关系。对象与方法采用酶联免疫方法和荧光定量聚合酶链反应分别对512例不同乙肝病人及202例HBeAg阴性、257例HBeAg阳性慢肝病人进行血清标志物、HBV DNA定量检测并分析结果。结果慢肝组有315例(68.9%)病毒颗粒浓度高于107,肝硬化组7例(13.2%)病毒颗粒浓度高于107;HBeAg阳性慢肝组245例(95.3%)患者病毒颗粒含量高浓度,HBeAg阴性慢肝组68例(33.7%)患者病毒颗粒含量在105-7copy/mL区段。结果慢肝组与肝硬化组相比,高浓度病毒以慢肝组中最明显,病情发展至肝硬化期病毒含量多数不高;慢肝病人中不同乙肝血清标志物模式其病毒含量分布特点不同,与HBeAg阳性慢肝组相比HBeAg阴性组体内病毒复制水平低(p<0.01),传染性较前者弱。最常见前C区突变,导致HBeAg阴性CHB病情加重和病毒复制增加。 沈忠林 杜鹃 张慧 李翠关键词:初诊 患者血清 乙肝病毒 血清标志物模式 肝炎血清标志物 酶联免疫方法 乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法及专用试剂盒 乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法及专用试剂盒,属于生物技术领域。本发明的方法是通过对乙型肝炎病毒表面抗原,核心抗原和E抗原区等三对不同的引物和探针的优化,筛选出了扩增效果最好的一对引物和探针。比较了用不同方法提取的血清... 鲁艳芹 韩金祥 王传玺 戚鹏 沈忠林文献传递