曾昭淳
- 作品数：72 被引量：217H指数：8
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局科研项目重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 人F3-GRIM19基因的克隆与表达
- 2005年
- 目的:克隆GRIM19基因,并构建F3-GRIM19表达载体. 方法:从正常人胎盘组织中克隆GRIM19的cDNA,并构建了F3-GRIM19表达载体,测序正确后,表达并亲和层析纯化F3-GRIM19融合蛋白．结果:克隆后测序,发现其含有约580 bp的插入片段,基因与GenBank序列完全一致,读码框正确．在大肠杆菌中表达Mr 25 000的F3-GRIM19蛋白,灰度值分析表达量约占菌体总蛋白的25％．经纯化,目的蛋白纯度达90％,复性率为17.3％．结论:成功构建了F3-GRIM19原核表达载体,并成功表达纯化了目的蛋白．
- 孙厚良刘洋李甲初曾昭淳
- 关键词：克隆纯化
- 对氧磷酯酶-1与老年人2型糖尿病关系的研究被引量：1
- 2003年
- 目的 探讨血清对氧磷酯酶-1(PON-1)活性、基因Glu-Arg192位多态性与老年人2型糖尿病(DM)及并发症的关系。方法 用酚乙酸酯为底物测定血清PON-1活性;用多聚酶链限制片段多态件反应技术对老年2型DM各组及健康老年人的PON-1基因192位进行基因分型。结果 老年单纯2型DM组PON-1活性为(98.32±21.68)kU/L,比健康对照组显著降低〔(13.29±19.74)kU/L,P<0.01〕,老年2型DM合并大、微血管病变组PON-1活性分别为(73.18±13.00)和(74.02±15.13)kU/L,比老年单纯2型DM组显著降低对(P<0.01)。重庆市老年居民PON-1基因192位A、B等位基因频率在健康对照组为0.44、0.56,老年人单纯2型DM组及大、微血管病变组为0.43、0.57,0.33、0.67和0.38、0.62,老年人2型DM各组与健康对照组比较PON-1、AA、AB、BB基因到分布差异无显著性。结论 PON-1活性在老年2型DM及共发血管病变患者中均显著降低,提示PON-1活性的降低参与了DM血管并发症的发生。重庆市老年居民PON-1基因192位B等位基因与老年人2型DM及2型DM并发血管病变无明显关系。
- 蒲霞曾繁荣曾昭淳刘万里柯细松
- 关键词：老年人2型糖尿病对氧磷酯酶-1基因多态性
- 对氧磷酸酯酶-1Glu-Arg192位多态性与冠心病关系的研究被引量：7
- 2001年
- 目的 :探讨对氧磷酸酯酶 - 1(PON- 1)基因 Glu- Arg192位多态性、血清 PON- 1活性与冠心病的关系。 方法 :用多聚酶链限制片段多态性反应技术对 12 3例冠心病 (CHD)患者 (CHD组 )及 110例正常人 (正常对照组 )的PON- 1192位进行基因分型 ,用酚乙酸酯为底物测定血清 PON- 1活性。 结果 :重庆居民 PON- 1基因 192 A、B等位基因频率在正常对照组为 0 .43、0 .5 7,CHD组为 0 .40、0 .6 0。 CHD组的PON- 1AA、AB、BB基因型的构成比与正常对照组无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,正常对照组 3种基因型之间血脂无显著相关 (P>0 .0 5 ) ,CHD组的 PON- 1活性 (75 .6± 2 3.5 KU/ L )比正常对照组 (10 8.4± 18.3 KU/ L )显著下降 (P<0 .0 1)。 结论 :重庆居民 PON- 1192 B等位基因与 CHD无关 ,血清 PON- 1活性与 CHD有一定的关系。
- 刘万里曾昭淳何全张革邓国兰
- 关键词：冠心病基因多态性高密度脂蛋白
- 人非小细胞肺癌组织p16基因缺失及突变的研究被引量：1
- 1998年
- 目的 探讨人类非小细胞肺癌组织中p1 6基因缺失及突变情况及其与临床病理的关系。方法 应用控制模板DNA量的银染PCR SSCP技术检测 40例非小细胞肺癌手术切除标本中p1 6基因第 2外显子。结果 40例中有 1 3例发生纯合缺失 ,3例发生突变 ,缺失及突变率为 40 %。其缺失及突变率与肺癌的临床分期有密切关系 (P <0 .0 5)。结论 p1 6基因的缺失及突变可能在非小细胞肺癌的发生、发展及转移中起重要作用。
- 杜铭李良彬曾昭淳张雪梅
- 关键词：非小细胞肺癌P16基因PCR基因缺失基因突变
- 对氧磷酸酯酶1的研究进展被引量：3
- 2001年
- 对氧磷酸酯酶 1( paraoxonase 1,PON1)是由肝脏合成的 44kD糖蛋白 ,与apoAⅠ紧密结合并固定于HDL颗粒上 ,是一种钙离子依赖性磷酸酯酶。PON1能够阻止脂质过氧化物的生成 ,抑制LDL氧化 ,并能水解氧化性LDL(ox LDL)。PON1酶活性在氧化性脂蛋白增多性疾病如冠心病 (CHD)、2型糖尿病并发大血管病变等疾病中显著下降。PON1基因在 5 4位出现M /L和 192位出现A/B等位基因多态性 ,其B等位基因与L等位基因可能是冠心病及
- 刘万里曾昭淳康格非
- 关键词：酶活性基因多态性冠心病
- 点样位置对血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳行为的改变被引量：4
- 2004年
- 血清蛋白室温下进行醋酸纤维薄膜电泳时,点样线靠近阳极端则有蛋白朝阴极运动,低温下移动方向相同而速度变慢。兰色葡聚糖和溴酚兰在对应条件下电泳表明,主要是薄膜表面溶剂蒸发,造成缓冲液由两端朝中部补充而流动,从而改变了部分低荷质比血清蛋白的电泳行为。此异常现象证实缓冲液流动可改变蛋白质电泳行为,可用于验证电泳影响因素的设计性实验教学。
- 廖飞王咏梅左渝萍何爱彬曾昭淳
- 关键词：血清蛋白实验教学
- Caspase-3细胞定位信号的检测与分析被引量：2
- 2008年
- Caspase-3是调节细胞凋亡的关键蛋白质.凋亡过程中,胞质定位的caspase-3被酶解激活,进入细胞核中执行功能.这一定位变化的分子机制至今仍不清楚.分析caspase-3分子中所含的细胞定位信号,可以为深入了解其移位机制提供重要的线索.构建一系列含caspase-3不同区段的截短突变体,与GFP融合表达,观察它们在细胞中的定位,以鉴定caspase-3分子中所含的核输出信号（nuclear export signal,NES）和核定位信号NLS（nuclear localization signal,NLS）.结果发现,caspase-3分子中不存在明显的NLS,但存在一个明显的NES,该NES定位在caspase-3小亚基的C端,包括220-245位氨基酸残基.
- 卢智勇卢智刚曾昭淳
- 关键词：核定位信号
- F3-PE40基因的克隆、表达及纯化被引量：1
- 2010年
- 通过质粒提取、PCR扩增构建F3-PE40表达载体转化大肠杆菌,然后进行表达纯化。以pEKH-F3质粒为模板,PCR扩增F3片段,将F3插入克隆质粒PQE80L,转化大肠杆菌,筛选获得含有F3的PQE80L重组载体。提取绿脓杆菌菌株染色体DNA为模板,PCR扩增绿脓杆菌外毒素A催化区(PE40)。然后将PQE80-F3和PE40重组,得到表达PQE80L-F3-PE40载体。转化至大肠杆菌DH5a,BL21,表达融合蛋白F3-PE40。大肠杆菌表达了融合蛋白F3-PE40,表达的融合蛋白量占菌体总体蛋白量的20%。成功地表达了融合蛋白F3-PE40,为进一步大规模表达、纯化F3-PE40功能奠定了基础。
- 朱海兵黄轶曾昭淳
- 关键词：融合基因克隆
- 在高于米氏常数的底物浓度下用积分法测定尿酸酶活性被引量：8
- 2004年
- 目的 :以尿酸酶为模型 ,考察在底物浓度高于酶米氏常数 (Km)时用积分法测定酶活性 (Vm)的可靠性 .方法 :用 2 93nm光吸收记录尿酸酶反应曲线 .用以反应时间为自变量的积分速度方程 ,以尿酸酶Km 为常数而本底为非线性参数拟合尿酸酶反应曲线 ,搜寻对应最好拟合的Vm.结果 :此积分法测定Vm 主要受剩余底物浓度影响 ,本底基本没有干扰 .剩余底物低于 2 .5 μmol/L时用 1 0～ 70 μmol/L起始底物所得Vm 无差异 .用 2 5和 70 μmol/L起始底物浓度时初速度和Vm 都与酶量呈正比 .在此两种底物浓度下积分法的下限相同 ,且与初速度法下限无明显差异 .但用积分法测定酶活性的上限明显高于初速度法 ,而且起始底物浓度越低则差异越显著 .结论 :在积分法中使用以反应时间为自变量的积分速度方程拟合酶反应曲线 ,在高于Km
- 廖飞朱小云王咏梅曾昭淳左渝萍
- 关键词：积分法尿酸酶底物浓度酶活性测定
- 细胞死亡调控基因GRIM19重组腺病毒的构建及在恶性胶质瘤CHG-5细胞中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建细胞死亡调控基因GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)重组腺病毒载体,观察GRIM19对病毒包装细胞是否具有细胞毒作用,并验证其对脑胶质瘤CHG-5细胞的感染效率。方法采用PCR方法分别将GRIM19以及EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5183(pAdeasy)菌内同源重组,筛选阳性克隆,酶切测序鉴定,线性化后转染293T细胞进行包装、扩增、纯化,PCR检测病毒上清,TCID50法测定病毒滴度并感染CHG-5细胞后Western免疫印迹法验证GRIM19蛋白表达。结果连接重组后经酶切和测序法筛选出pAd-GRIM19;转染293T包装细胞,观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,细胞生长状态良好,未见明显细胞毒作用。Ad-GRIM19及Ad-EGFP初纯病毒经氯化铯梯度离心纯化最终获得约5×1010U/ml与8×1010U/ml滴度的重组病毒;将其体外感染胶质瘤CHG-5细胞,均能达到90%左右的感染率,Western免疫印迹法表明Ad-GRIM19感染组GRIM19蛋白表达明显升高。结论成功构建了携带GRIM19基因的重组腺病毒,为体内外进一步研究GRIM19对脑胶质瘤的作用奠定了基础。
- 姚声涛黄轶曾昭淳唐文渊
- 关键词：腺病毒胶质瘤细胞CHG-5
