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张露萍

作品数:11 被引量:9H指数:2
供职机构:扬州大学医学院更多>>
发文基金:江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 11篇中文期刊文章

领域

  • 7篇医药卫生
  • 4篇生物学

主题

  • 6篇酵母
  • 6篇酵母双杂交
  • 4篇蛋白
  • 3篇相互作用
  • 3篇相互作用蛋白
  • 2篇诱饵
  • 2篇真核
  • 2篇真核表达
  • 2篇真核表达载体
  • 2篇转染
  • 2篇自激活
  • 2篇细胞
  • 2篇小鼠
  • 2篇活性
  • 2篇活性分析
  • 2篇核表达
  • 2篇CDNA文库
  • 1篇蛋白表达
  • 1篇蛋白质相互作...
  • 1篇凋亡

机构

  • 11篇扬州大学
  • 1篇扬州大学附属...

作者

  • 11篇张露萍
  • 11篇郑英
  • 10篇王海燕
  • 6篇梁虹
  • 6篇孙红亚
  • 5篇贾筱琴
  • 3篇王建军
  • 2篇朱永泽
  • 1篇谢林俊
  • 1篇胡艳秋
  • 1篇马彬
  • 1篇盛树青

传媒

  • 4篇中国现代医学...
  • 3篇中华男科学杂...
  • 2篇生命科学
  • 2篇细胞与分子免...

年份

  • 1篇2013
  • 5篇2012
  • 4篇2011
  • 1篇2010
11 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
应用酵母双杂交系统筛选小鼠PIAS2相互作用蛋白被引量:2
2011年
目的:应用酵母双杂交技术,从小鼠精原细胞cDNA文库中筛选与PIAS2(protein inhibitor of activatedSTAT2,PIAS2)相互作用的未知蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,探讨PIAS2在精子发生中的作用机制,为临床男性不育症的治疗和诊断提供理论基础。方法:以pGBKT7-PIAS2为诱饵质粒,从小鼠精原细胞cDNA文库中筛选出与pGBKT7-PIAS2相互作用的阳性克隆,对验证后的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,进一步采用直接酵母双杂交进行相互作用的验证。结果:经过筛选、测序、同源性分析及直接酵母双杂交验证,发现了与PIAS2相互作用的8个候选蛋白:Cyfip2、Psmb3、Nme1、nischarin、Nsun5、Ints10、Gnb2l1及Ndufaf3。结论:应用酵母双杂交系统,共筛选得到了8个不同的基因,其编码蛋白与PIAS2相互作用,可能与男性生殖调控相关。对上述蛋白与PIAS2的相互作用研究有助于揭示PIAS2的作用机制。
郑英贾筱琴张露萍王海燕胡艳秋
关键词:酵母双杂交精子发生蛋白质相互作用小鼠
Stra8酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活活性分析
2011年
目的构建小鼠Stra8的诱饵表达载体,为应用酵母双杂交系统筛选与Stra8相互作用的蛋白建立实验基础。方法应用PCR扩增Stra8编码序列的不同长度片段,将其先克隆入pGBKT7载体内,经序列测定确认无误后,将构建好的系列诱饵载体pGBKT7-Stra8转化到酵母细胞AH109及Y187中,进行诱饵载体的毒性及自激活活性分析。结果构建了Stra8的诱饵载体共8种,经过自激活活性的分析发现,其中7种诱饵载体均具有自激活活性,仅有一种诱饵载体没有自激活活性,可用于后续的酵母双杂交筛选实验。结论成功构建了Stra8的酵母双杂交诱饵表达载体,为进一步筛选与之相互作用的蛋白提供实验基础。
郑英张露萍王海燕
关键词:酵母双杂交
PIASx结构与功能的研究进展
2011年
PIAS(protein inhibitor of activated STAT)蛋白家族能够与许多蛋白质发生相互作用,其中大部分为转录因子。PIASx是4个组成成员中的一种,其包括两个亚型。PIASx通过与不同种类的蛋白相互作用,影响它们的活性和功能。PIASx蛋白的调控机制主要有两种:一种是通过其自身所具有的SUMO(smallubiquitin-related modifiers)E3连接酶活性,促进对一些转录因子、转录辅因子的SUMO化修饰,从而调控它们的转录活性;另一种是作为构架蛋白,通过与雄激素受体的作用参与雄激素介导的基因转录调节。PIAS蛋白的上述两种作用机制并不是完全互相排斥的,这体现了PIASx蛋白功能的特异性和复杂性。
王海燕张露萍郑英
关键词:SUMOSAP
小鼠Stra8相互作用蛋白的筛选被引量:2
2012年
目的采用酵母双杂交法,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选与Stra8(stimulated by retinoic acid8,Stra8)相互作用的蛋白。通过对相互作用蛋白的筛选和研究,探讨Stra8在胚胎干细胞分化中的作用机制。方法以pGBKT7-Stra8为诱饵质粒,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选出与Stra8相互作用的阳性克隆,对验证后的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,进一步采用直接酵母双杂交进行相互作用的验证。结果经过筛选、测序、同源性分析及直接酵母双杂交验证,发现了Setd6及DEK 2种与Stra8相互作用的蛋白。结论应用酵母双杂交系统,筛选得到了与Stra8相互作用的蛋白Setd6及DEK,它们可能与Stra8一起调控胚胎干细胞的增殖与分化,对Stra8相互作用蛋白的筛选有助于揭示其在胚胎干细胞中的作用机制。
郑英张露萍王海燕孙红亚梁虹王建军
关键词:酵母双杂交相互作用蛋白
PIAS-NY稳定转染小鼠精母细胞株的构建与鉴定
2013年
目的:构建PIAS-NY基因慢病毒质粒,并将包装所得慢病毒感染小鼠精母细胞,获得稳定过表达PIAS-NY的细胞株。方法:应用PCR技术扩增目的基因,并将扩增产物插入慢病毒载体质粒pGC-FU上,对阳性克隆进行PCR筛选及测序鉴定。将重组质粒与两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,获得含慢病毒颗粒的细胞上清,用慢病毒感染小鼠精母细胞,并用Western印迹方法检测细胞中PIAS-NY蛋白的表达。结果:成功构建了pGC-FU-PIAS-NY慢病毒表达质粒,获得了稳定过表达PIAS-NY的小鼠精母细胞株。结论:PIAS-NY过表达慢病毒质粒及稳定转染小鼠精母细胞株的构建,为进一步体外研究PIAS-NY基因在精子发生中的功能奠定了基础。
郑英王海燕张露萍孙红亚梁虹贾筱琴胡艳秋朱永泽
关键词:慢病毒载体
PIAS-NY酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活活性分析
2011年
目的构建PIAS-NY(protein inhibitor of activated STAT-NY,PIAS-NY)的诱饵载体,为应用酵母双杂交系统筛选与PIAS-NY相互作用的蛋白建立实验基础。方法应用PCR法扩增PIAS-NY编码序列的片段,先将其克隆入pGEMT-easy内,经序列测定确认无误后,再将片段亚克隆入pGBKT7载体内,将构建好的诱饵载体pGBKT7-PIAS-NY转化到酵母细胞AH109及Y187中,进行诱饵载体的毒性及自激活活性分析。结果构建了PIAS-NY的诱饵载体,经过自激活活性的分析发现,该诱饵载体没有自激活活性,同时对两种酵母细胞的生长无毒性作用。结论成功构建了PIAS-NY的酵母双杂交诱饵表达载体,为进一步筛选与之相互作用的蛋白提供了实验基础。
郑英张露萍王海燕孙红亚梁虹王建军
关键词:酵母双杂交
活化的蛋白激酶C受体1真核表达载体的构建与鉴定
2012年
目的:构建活化的激酶C受体1(RACK1)WD1-4真核表达载体,通过细胞转染和Western blot鉴定其是否在细胞中表达。方法:应用PCR法扩增RACK1蛋白中第1~4个WD40区域的片段,将其与PGEM-T载体连接,测序后再将其克隆至pEGFP-N1中。采用脂质体法将重组质粒转染至293T细胞中,观察其在真核细胞中的表达,并用Western blot法进行鉴定。结果:pEGFP-N1-RACK1(WD1-4)重组质粒经酶切鉴定及测序证实,目的基因的序列完全正确。荧光显微镜观察发现,转染了重组质粒的细胞株可见绿色荧光融合蛋白的表达,Western blot结果进一步证实了上述结果。结论:成功构建pEGFP-N1-RACK1(WD1-4)重组质粒且进行了真核表达,为下一步研究RACK1蛋白的功能奠定了基础。
张露萍王海燕孙红亚梁虹王建军朱永泽盛树青郑英
关键词:真核表达载体构建蛋白表达
从小鼠胚胎干细胞文库中筛选PIASx相互作用蛋白
2012年
目的应用酵母双杂交系统,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选与PIASx(protein inhibitor ofactivated STAT x,PIASx)相互作用的蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,探讨PIASx在干细胞分化中的作用机制。方法以pGBKT7-PIASx为诱饵质粒,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选出与PIASx相互作用的阳性克隆,对验证后的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,进一步采用直接酵母双杂交进行相互作用验证。结果经过筛选、测序、同源性分析及直接酵母双杂交验证,发现了6种与PIASx相互作用的蛋白。结论应用酵母双杂交系统,共筛选得到了6种不同的基因,其编码蛋白与PIASx相互作用,可能与小鼠胚胎干细胞的增殖与分化相关。对PIASx相互作用蛋白的筛选有助于揭示PIASx在胚胎干细胞中的作用机制。
郑英贾筱琴张露萍王海燕孙红亚梁虹
关键词:酵母双杂交
PIAS蛋白家族的研究进展被引量:3
2010年
PIAS(protein inhibitor of activated STAT)蛋白家族是一种能够激活STAT转录活性的抑制蛋白,共包括4个成员,可与多种蛋白发生相互作用,从而影响靶蛋白的活性和功能,其主要与STAT、Wnt、TGF-β、NF-κB等通路的转录因子或转录辅因子相互作用以调控下游基因的转录活性。在细胞周期中,PIAS蛋白是细胞衰老和细胞凋亡的调节子,可促进细胞的扩散和衰老。在肿瘤发生中,PIAS蛋白的过表达能抑制癌细胞的增殖并诱导其凋亡。除此之外,在生殖系统和神经系统中,PIAS家族蛋白也能通过与相关的转录因子或激素受体相互作用影响其发生发展的过程。
张露萍马彬郑英
关键词:转录调控生殖系统细胞周期细胞凋亡
人RUVBL2真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达被引量:2
2012年
目的:构建带有绿色荧光蛋白的RUVBL2真核表达载体pEGFP-N1-RUVBL2,并鉴定其在HeLa细胞中的表达。方法:以pGADT7-RUVBL2质粒为模板,PCR扩增RUVBL2基因,首先克隆至T载体中,进一步亚克隆至p-EGFP-N1,并对重组表达载体进行酶切及测序鉴定。采用脂质体转染法将重组质粒瞬时转染HeLa细胞系,应用荧光显微镜观察绿色荧光融合蛋白的表达,并用Western blot法检测RUVBL2-GFP融合蛋白的表达。结果:经限制性酶切鉴定及测序分析证实pEGFP-N1-RUVBL2载体序列正确;荧光显微镜下可见转染的HeLa细胞中有绿色荧光蛋白的表达,Western blot法证实转染细胞中能表达RUVBL2-GFP融合蛋白。结论:pEGFP-N1-RU-VBL2表达载体构建成功,并在HeLa细胞内成功表达。
郑英谢林俊张露萍王海燕孙红亚梁虹贾筱琴胡艳秋
关键词:真核表达载体转染HELA细胞
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