张道伟 作品数:38 被引量:60 H指数:5 供职机构: 遵义师范学院 更多>> 发文基金: 贵州省科学技术基金 国家自然科学基金 博士科研启动基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 文化科学 医药卫生 更多>>
白背飞虱海藻糖酶Treh-2基因克隆及生物信息学分析 被引量:4 2013年 利用同源克隆及RACE方法,从白背飞虱Sogatella furcifera中克隆获得海藻糖酶基因(Treh-2)全长cDNA序列(GenBank登录号:JX204291),该基因全长为2 065 bp,包含73 bp 3,UTR和150 bp5,UTR,开放阅读框(ORF)为1 842 bp,编码613个氨基酸。该基因预测蛋白分子质量为70.45 ku,等电点为5.65,有5个预测糖基化位点,有1个信号肽结构。进化分析结果显示,白背飞虱海藻糖酶Treh-2与其他昆虫海藻糖酶Treh-2同源性较高,与灰飞虱相比,同源性为95%,与褐飞虱相比较,同源性为93%。海藻糖酶Treh-2基因克隆和比较分析为进一步深入研究白背飞虱迁飞能力与能量代谢具有重要意义。 陈静 张建华 郭玉双 张道伟关键词:白背飞虱 克隆 白背飞虱海藻糖合成酶基因的表达特性及其在糖代谢调控中的作用 被引量:1 2019年 【目的】昆虫中海藻糖主要通过海藻糖合成酶(trehalose-6-phosphate synthase, TPS)在脂肪体中合成,当昆虫受极端环境胁迫时TPS能够诱导海藻糖累积从而起到保护作用。本研究旨在分析白背飞虱Sogatella furcifera 两个TPS基因的发育和组织表达模式及其对糖类物质代谢调控功能,探究TPS基因在白背飞虱生长发育中的具体作用。【方法】基于实验室前期获得的两个海藻糖合成酶基因SfTPS1和SfTPS2片段序列,在本实验中也进行了基因克隆和测序筛选,比对两者确定了白背飞虱两个TPS基因序列。并通过MEGA 7.0软件构建基于氨基酸序列的白背飞虱与其他昆虫TPS的系统发育树。利用qRT-PCR技术检测这两个基因在白背飞虱不同发育阶段(4龄第1天若虫至3日龄成虫)和成虫不同组织(头、足、翅、中肠、脂肪体、表皮和马氏管)中的表达情况。合成这两个基因的dsRNA,并注射到白背飞虱5龄第1天若虫中进行RNAi。在RNAi 48 和72 h后检测白背飞虱海藻糖酶基因TRE1-1, TRE1-2和TRE2的表达变化,海藻糖、葡萄糖和总糖原含量以及海藻糖酶活性。【结果】克隆获得白背飞虱SfTPS1和SfTPS2,ORF分别为2 424和2 115 bp,编码氨基酸数目分别为807个和704个,预测蛋白质分子量分别为90.37和80.56 kD,等电点分别为6.08 和6.10。而且白背飞虱2个TPS氨基酸序列与褐飞虱Nilaparvata lugens TPS1和TPS2的一致性最高。发育阶段表达模式表明,白背飞虱TPS基因SfTPS1和SfTPS2在4龄若虫到成虫阶段都有表达;组织表达模式表明,SfTPS1和SfTPS2在成虫马氏管、中肠和表皮中的表达较为显著。当SfTPS1被RNAi后,TRE1-1和TRE2的表达水平与对照组(dsGFP注射组)相比分别为略有上升和显著升高,TRE1-2的相对表达水平在SfTPS1被RNAi 48 h后显著上升而在72 h后显著下降;可溶性海藻糖酶活性无显著变化,膜结合型海藻糖酶活性显著增加;白背飞虱5龄若虫体内海藻糖、葡萄� 张道伟 邱玲玉 康奎 余亚娅 曾伯平 陈静 唐斌关键词:白背飞虱 海藻糖合成酶 RNA干扰 QRT-PCR 昆虫几丁质酶基因家族功能研究进展 被引量:6 2016年 昆虫几丁质酶的研究历史很长,研究内容也非常广泛;但仅局限于传统的方法研究某个昆虫单个基因的功能及应用。近年来,随着生物信息学和RNAi技术在生命科学研究工作中的广泛应用,在昆虫几丁质酶的研究方面也取得了较大进展。本文主要以生物信息学在几丁质酶家族基因鉴定和分类研究过程中的应用,以及利用RNAi技术分析几丁质酶不同家族成员在赤拟谷盗和褐飞虱两种昆虫生长发育中的功能比较分析,对全面认识昆虫几丁质酶基因家族功能和作用机理,并利用几丁质酶基因防治害虫奠定良好的基础。 张道伟 钱正敏 张正玲 骆颖关键词:基因家族 生物信息学 RNAI 德国小蠊Akirin基因的克隆及表达分析 2018年 Akirin基因是新近发现的在果蝇NF-κB依赖的Imd信号通路调控中不可或缺的转录因子。在除果蝇以外的昆虫中,Akirin基因是否参与Imd通路的调控,亦或对NF-κB依赖的Toll通路也有调控作用还未有报道。本研究旨在初步研究德国小蠊Blattella germanica中Akirin基因的基本特征、在不同组织中的表达模式及注射法RNAi实验对Akirin基因沉默效果,以期为Akirin基因功能的研究奠定基础。通过与已报道的其它昆虫的Akirin基因进行同源比对,利用RACE(rapid amplification of c DNA ends)技术,成功从德国小蠊中克隆到1个Akirin基因,该基因全长864 bp,开放阅读框(ORF)大小为543 bp,编码180个氨基酸。蛋白序列比对及进化树结果显示,Akirin基因有非常保守的核定位信号序列,且与内华达古白蚁Zootermopsis nevadensis的亲缘关系最近,同源性为86%。荧光定量PCR的结果表明Akirin基因在德国小蠊检测的4个组织中均有表达,但表达水平有差异,在血淋巴的表达水平最高,其次为脂肪体。通过注射法RNAi实验成功抑制了Akirin基因的表达水平,并且RNAi的效果随时间的延长而更强,在注射72 h后,Akirin基因m RNA的表达水平下降了90%。上述研究为Akirin基因的功能及德国小蠊防治研究提供了科学依据。 陈静 张道伟 吕燕丽关键词:德国小蠊 克隆 RNA干扰 二斑叶螨cDNA文库的构建及鉴定 被引量:1 2013年 为研究二斑叶螨发育相关基因的功能,利用TRIzol试剂提取二斑叶螨总RNA,通过SMART技术构建cDNA文库。利用SMARTIVTMOligonucleotide和CDSⅢ/3’PCRPrimer为引物,在反转录酶作用下,合成cDNA第1链,利用LD—PCR方法合成cDNA第2链。合成的双链cDNA经酶切回收后,再连接pDNR—LIB载体,转化大肠杆菌感受态细胞Trans5α,检验库容量和重组效率,并采用PCR方法检测插入cDNA片段的大小。结果表明,构建的二斑叶螨cDNA文库的库容量为3.54×10^6CFU/mL,重组效率达95.8%,插入片段长度在0.3-2.0kb之间。构建的二斑叶螨cDNA文库质量良好,能够为进一步研究二斑叶螨基因的功能奠定基础。 张道伟 曾燕玲 魏福伦 周德贵关键词:二斑叶螨 CDNA文库 滴度 贵州地方高校实验技术队伍建设现状分析——以遵义师范学院为例 2024年 实验技术人员是实验室教学和管理的直接参与者,与高校的人才培养和学科发展息息相关。近年来,尽管实验室的地位和重要性日益凸显,但目前许多地方高校对实验技术队伍建设的重要性仍认识不足,实验技术队伍建设严重滞后于专业教师队伍建设,无法充分发挥实验技术人员的主观能动性,影响学校的长远发展。基于此,作者从遵义师范学院实验技术队伍建设情况入手,分析了实验技术队伍的现状和存在的问题,并提出了解决问题的对策,以期为贵州地方高校实验技术队伍建设提供参考。 冯章丽 张道伟 薛琦琦 李昆 钱正敏关键词:地方高校 德国小蠊两个海藻糖合成酶基因的克隆、组织分布及温度诱导表达分析 被引量:11 2015年 【目的】海藻糖合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)是参与昆虫血糖-海藻糖合成的关键酶。本研究旨在克隆德国小蠊Blattella germanica TPS基因,研究TPS基因在德国小蠊不同组织中的表达模式及在不同温度处理下的表达情况。【方法】通过RACE技术克隆德国小蠊TPS基因全长序列,利用荧光定量PCR的方法检测TPS基因在德国小蠊5龄幼虫不同组织中的表达模式及在高温(40℃和46℃处理30 min)及低温(0℃和10℃处理1 h)逆境下的表达量变化。【结果】从德国小蠊中克隆获得2个TPS基因,分别命名为Bg TPS1(Gen Bank登录号:KR050213)和Bg TPS2(Gen Bank登录号:KR050214)。其中,Bg TPS1基因c DNA序列全长2 987 bp,开放阅读框(ORF)2 502 bp,编码833个氨基酸;Bg TPS2基因c DNA序列全长3 212 bp,开放阅读框2 469 bp,编码822个氨基酸。Bg TPS1和Bg TPS2基因都主要在5龄幼虫脂肪体中表达,且Bg TPS2基因的表达量为Bg TPS1基因表达量的3.9倍。在两种不同极端温度诱导下,Bg TPS1和Bg TPS2基因mRNA均上调表达。其中,Bg TPS2的表达量始终显著高于Bg TPS1。在0℃时,Bg TPS1和Bg TPS2的表达量最高。【结论】德国小蠊5龄幼虫中存在2个TPS基因。两个TPS基因均在脂肪体中高表达,且Bg TPS2基因的表达量显著高于Bg TPS1基因;低温和高温诱导下均能促进两个基因的表达量上升。该结果为进一步明确昆虫海藻糖的合成途径及其在昆虫对温度逆境的反应中的作用研究奠定了基础。 陈静 张道伟关键词:德国小蠊 海藻糖合成酶 基因克隆 MRNA表达水平 一种用于茶园害虫防治的药剂及其害虫防治方法 本发明公开了一种用于茶园害虫防治的药剂及其害虫防治方法,属于害虫防治技术领域,所述药剂由以下重量份的成分混合而成:3‑4份顺‑3‑己烯乙酯、4‑5份顺‑3‑己烯‑1‑醇、10‑15份苦葛提取物、3‑7份氨基硅烷偶联剂、1... 张道伟 康奎 曾伯平 冯章丽 龚俊 彭忠白背飞虱海藻糖合成酶基因的克隆及序列分析 被引量:9 2012年 为进一步深入研究白背飞虱的迁飞能力与能量代谢,利用同源克隆及RACE的方法,从白背飞虱Soga-tella furcifera中克隆获得海藻糖合成酶基因(TPS)的全长cDNA序列(Genbank登录号:JQ013797),该基因全长为3 278bp,包含353bp的3非编码区域(UTR)和501bp的5UTR,开放阅读框(ORF)为2 424bp,编码807个氨基酸。该基因预测的蛋白分子量为90.372kD,等电点为6.08,有3个预测的糖基化位点,无信号肽及跨膜结构。进化分析结果表明:白背飞虱的海藻糖合成酶与其它昆虫的海藻糖合成酶基因的同源性较高,与褐飞虱相比较同源性高达98%。 张道伟 陈静 郭玉双关键词:白背飞虱 海藻糖合成酶基因 克隆 一种用于茶园防护的害虫监测消杀控制系统及其方法 本发明公开了一种用于茶园防护的害虫监测消杀控制系统及其方法,包括安装壳体,设置在安装壳体上的监测模块,与监测模块连接的信息管理平台,设置在壳体内部且与所述信息管理平台连接的消杀模块,以及用于向所述监测模块与消杀模块供电的... 张道伟 张相春 曾伯平 康奎 冯章丽 唐艳龙 龚俊