张明伟 作品数:40 被引量:109 H指数:6 供职机构: 军事医学科学院基础医学研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 中国博士后科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 化学工程 更多>>
原核基因工程中以包涵体形式表达产物的中试分离纯化研究 被引量:3 1993年 徐明波 董晓杰 孟文华 朱耀先 张明伟 马贤凯关键词:蛋白 包涵体 提纯 基因工程 小鼠LAK细胞对红系祖细胞及多向造血祖细胞增殖的影响 1990年 小鼠脾细胞经重组人白细胞介素-2(rhIL-2)激活后对YAC-1,LP-3和WEHI-164等肿瘤细胞均有很强的杀伤活性。在CFU-E和BFU-E培养体系中,不同浓度LAK细胞与BMC直接加入或预温育4h后再培养,均能加强CFU-E和BFU-E增殖。低浓度LAK细胞(LAK/BMC为0.5)与BMC直接加入或预温育后再加入CFU-mix培养体系中,均能增强CFU-mix增殖,而高浓度LAK细胞和BMC(LAK/BMC=8.0)直接加入培养体系则抑制CFU-mix增殖;若共温育后再培养则非常明显地抑制CFU-mix增殖,CFU-mix仅为对照的17.6%。小鼠LAK细胞对造血祖细胞体外增殖具有调节作用,这种调节可能包括分泌某些细胞因子以及细胞间直接相互作用两种方式。 江飞子 毛宁 张明伟 唐佩弦关键词:红系祖细胞 LAK细胞 犬骨髓间叶干细胞的多向分化潜力 被引量:4 2004年 目的观察犬骨髓间叶干细胞的体外多向分化潜力,为损伤组织的干细胞移植修复提供理论基础。方法利用梯度-贴壁筛选法分离、培养与扩增骨髓间叶干细胞。利用化学诱导剂5-氮胞苷(20滋mol/L),血管内皮细胞生长因子(VEGF10ng/ml),成骨细胞诱导剂(地塞米松10nMol/L,抗坏血酸0.05mMol,茁甘油磷酸钠10mMol/L)以及成脂肪细胞诱导剂(1-甲基3-异丁基黄嘌呤0.5mmol/L,地塞米松1滋mol/L,胰岛素10mg/L,消炎痛100mmol/L),分别定向诱导骨髓间叶干细胞分化为心肌细胞、血管内皮细胞、成骨细胞与脂肪细胞。再应用细胞形态观察、免疫细胞化学染色及电镜对分化细胞进行鉴定。结果利用梯度-贴壁筛选法可以分离培养与扩增骨髓间叶干细胞。5-氮胞苷可诱导干细胞呈现肌管、肌丝、心房颗粒,且肌细胞特异性蛋白琢-actinin,Myosin,琢-Actin,TroponinI免疫染色阳性;VEGF可诱导骨髓间叶干细胞出现管网状、血管样及鹅卵石样结构,vWF免疫染色阳性;成骨细胞诱导剂可诱导分化细胞碱性磷酸酶阳性;成脂肪细胞诱导剂使分化细胞内出现脂肪滴,油红O染色示脂滴为橙红色。结论成年犬骨髓间叶干细胞在体外具备多向分化潜力。在化学或生物诱导剂的作用下,犬骨髓间叶干细胞能够定向分化为心肌细胞、血管内皮细胞、成骨细胞、脂肪细胞等多种间叶组织? 任晓庆 王方正 浦介麟 张澍 张明伟 贾玉和 吴国玫关键词:间叶干细胞 骨髓 心肌细胞 成骨细胞 脂肪细胞 克隆的人LAK细胞对骨髓粒单系造血祖细胞体外增殖的抑制作用 1991年 本文应用琼脂半固体培养法观察了克隆化的人LAK细胞对骨髓粒单系造血细胞(CFU-GM)增殖的影响。LAK细胞对CFU-GM集落形成有抑制作用:2×10~5/mlLAK细胞与1×10~5/ml骨髓单个核细胞BMMNC预孵育0.5小时可使集落数减少43.8%(P<0.01),LAK与BMMNC预孵育4小时对CFUGM的抑制更为明显,0.5×10~5/ml LAK细胞即可使集落数减少58.8%(P<0.01),随LAK浓度加大抑制效应增强;当LAK与BMMNC在双层培养体系中不接触时,高浓度(4×10~5/ml)亦可表现集落抑制活性。抑制率28.8%(P<0.05)。自体LAK细胞对CFU-GM的抑制效应与异体相比无显著差异(P>0.20)。作者认为LAK细胞对CFU-GM的抑制作用为细胞直接作用与分泌可溶性因子介导的双重效应。 蒋承勇 毛宁 张明伟 江飞子 唐佩弦关键词:克隆细胞 LAK细胞 造血祖细胞 基因工程产品中CHO细胞蛋白残余量测定方法的建立 被引量:1 1999年 目的: 建立简便、快速、高灵敏度的基因工程产品中CHODHFR- 细胞蛋白的检测方法。方法: 以基因工程用宿主细胞CHODHFR- 的全细胞蛋白和该细胞培养上清浓缩蛋白的混合物, 免疫家兔制备抗血清, 并用间接ELISA 测定其效价; 用Western blot 分析该抗体的特异性; 用该抗体建立直接、间接ELISA, 分别测定两种检测方法的动力学曲线、检测范围及灵敏度。结果: 抗CHODHFR- 细胞蛋白的抗血清效价为2×10- 7 , 该抗体只与CHODHFR- 细胞蛋白起反应, 不与基因工程产品EPO 起反应; 用该抗体建立的直接、间接ELISA 法检测范围较宽, 灵敏度小于1μg/L。结论: 建立了高灵敏度、高特异性、操作简单、快速, 可检测基因工程产品中CHO 细胞蛋白残余量的两种ELISA 法。 邓瑞春 张明伟 白云秀 汪劲松 黄英 毛宁关键词:ELISA 促红细胞生成素 贫血 FGF2对BMP-Smads信号转导通路的负调节机制初步研究 被引量:1 2005年 目的 :利用小鼠前成骨细胞系MC3T3 E1初探FGF2对BMPS Smads信号转导通路的调节机制。方法 :构建含 5个串联的来源于Smad6启动子的R Smads结合序列 (GC2 )的荧光素酶报告基因质粒 ( 5GC2 Lux)。以该质粒探讨FGF2对BMP组成活化型受体I(caALK 2 )激活的Smad5转录调控能力的影响。外源转染去除Smad5分子中MEK ERK通路磷酸化位点的突变体 ,探讨FGF2伙化的MEK ERK对BMPS Smads通路的调节作用。结果 :所构建报告基因质粒能够特异反映Smads的转录激活能力的变化。FGF2能够显著下调BMP组成活化型受体(caALK2 )激活的Smad5转录调控能力。外源转染Smad5突变分子仅能部分逆转FGF2对Smads通路的负调节效应。结论 :FGF2参与调节BMPs活化的信号通路可能不仅限于通过活化MEK 原野 张明伟 于晓妉 郭子宽 李秀森 张云生 毛宁关键词:骨形态发生蛋白 SMADS T克隆细胞与造血祖细胞的相互作用 1990年 人外周血 T 克隆细胞在 YIL-2持续刺激下具有良好的体外扩增能力和LAK 活性。在半固体琼脂培养体系中,T 克隆细胞抑制骨髓 CFU-GM 形成,抑制效应与 T 细胞数量、T 细胞和骨髓细胞的预孵育时间呈正相关。自体及异体 T 克隆细胞对 CFU-GM 的抑制作用无显著差异。经 FACS 表型分析,这种 IL-2激活的 T 克隆细胞为T_3(+)、T_4(-)、T_8(+)、DR(+)、Tac(+)。 蒋承勇 毛宁 张明伟 江飞子 唐佩弦关键词:造血祖细胞 造血调控 IL-6基因转导对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞体内外生长特性的影响 1998年 为探讨IL-6基因转导对人乳腺癌细胞体内外生长特性的影响,我们构建了含人IL-6cDNA的逆转录病毒载体pLIL6SN。采用脂质体介导的方法将pLIL6SN导入MCF-7细胞中,对基因转导细胞的体外生长、粘附特性及裸鼠体内的实验性转移能力进行了测定。实验结果表明,经IL-6基因修饰的MCF-7细胞虽显示了明显的体外生长抑制,裸鼠体内实验性转移能力却获得增强。 唐佩弦 张明伟 彭善云 刘元林 吴英 侯春梅 毛宁关键词:IL-6 基因转导 乳腺肿瘤 人B细胞淋巴瘤独特型DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫反应的实验研究 被引量:3 2003年 本研究目的在于探讨含人B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链可变区基因片段的DNA疫苗诱导小鼠抗肿瘤免疫反应的情况 ,为人B细胞淋巴瘤疫苗的应用提供基础实验研究资料。本研究通过PCR方法获得人B细胞淋巴瘤细胞系Namalwa膜表面免疫球蛋白重链可变区 (VH)基因片段 ,同时克隆小鼠单核细胞趋化蛋白 3(MCP 3)作为免疫佐剂分子 ,进一步以重组PCR的方法获得MCP 3和VH基因的融合基因片段 ,构建DNA疫苗重组质粒。在体外以瞬时转染的方法证实以融合基因片段作为抗原基因的DNA疫苗质粒能够在真核细胞中正确表达。DNA疫苗质粒大量提取后免疫小鼠 ,用流式细胞术检测小鼠抗体生成情况 ,并用LDH释放法测定CTL活性以检测抗独特型细胞免疫。结果表明 ,从接种疫苗第 8周开始小鼠体内特异性抗独特型抗体明显升高 ,并且抗体滴度可维持高水平至少至第 2 0周。在DNA疫苗免疫组中 5只免疫小鼠有 3只产生抗体。所诱导的抗体只特异性识别肿瘤细胞表面独特型抗原 ,而不识别人A5 4 9对照细胞。用乳酸脱氢酶释放法未测到明显CTL反应的产生。结论 :以MCP 3与VH的融合作为抗原基因构建的DNA疫苗能够诱导小鼠体内产生抗淋巴瘤细胞的特异性抗独特型抗体 ,为DNA疫苗临床用于人B细胞淋巴瘤治疗提供了初步实验支持。 仲凯励 张伟京 原野 吴英 张明伟 毛宁关键词:B细胞 DNA疫苗 免疫球蛋白重链可变区 肿瘤 免疫反应 淋巴瘤 白介素-15突变体在大肠杆菌中的克隆表达及鉴定 2000年 目的 :构建两株IL 15末端缺失突变体以研究其N、C端对其功能的影响。方法 :以pBV2 2 0为载体 ,在大肠杆菌中进行表达。表达产物以包涵体形式存在 ,经过SDS PAGE纯化 ,复性 ,以CTLL 2增殖实验检测野生型及突变体的生物活性。结果 :N端缺失突变体失去了增殖活性 ,而C端缺失突变体保持了对CTLL 苏琴 王嘉玺 冯健男 王金惠 宋晓国 张明伟关键词:白细胞介素15 缺失突变体