张改玲 作品数:5 被引量:10 H指数:1 供职机构: 河北医科大学第二医院 更多>> 发文基金: 河北省自然科学基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
造血干细胞移植后淋巴细胞增殖症患者单个核细胞来源DC负载EBV抗原肽制备DC-CIK 被引量:1 2010年 目的:以造血干细胞移植后并发淋巴细胞增殖症(post-transplant lympholiferative disorder,PTLD)患者外周血单核细胞培养诱导DC,负载抗原肽后制备DC-CIK(cytokine-induced killer cell),为探索新的PTLD治疗方法奠定基础。方法:分离造血干细胞移植后EBV(Epstein-Barr virus)感染致PLTD患者外周血单个核细胞,贴壁细胞培养诱导DC,悬浮细胞诱导CIK;负载EBV抗原肽LMP2后建立DC-CIK共培养体系。流式细胞仪分析共培养前后细胞的免疫表型,ELISA检测共培养前后细胞上清IFN-γ的分泌水平,基因扫描仪分析T细胞受体(Tcell receptor,TCR)β家族基因谱。结果:成功制备负载EBV抗原肽的DC-CIK,HLA-DR+CD86+DC细胞从诱导前的12.5%增加到91.17%;DC-CIK共培养14 d后,两例患者的CIK数量分别增加了5.3和6.8倍;CD3+、CD8+、CD3+CD8+以及CD3+CD56+细胞比例在DC-CIK共培养后均明显升高(均P<0.05)。抗原肽负载的DC-CIK共培养体系中IFN-γ的分泌水平明显高于未经抗原肽负载的DC组[(1 332.6±92.38)pg/mlvs(693.42±62.41)pg/ml,P<0.01)]。DC-CIK培养后细胞的TCRβ家族基因在5.2家族出现单克隆表达峰。结论:EBV抗原肽负载后DC可诱导DC-CIK共培养体系中CD3+CD8+以及CD3+CD56+细胞扩增,并分泌高水平IFN-γ,为临床应用DC-CIK对移植后EBV感染致PTLD患者进行过继性细胞免疫治疗提供实验基础。 郭晓玲 魏雅 朱平 牛志云 蔡圣鑫 张改玲 达万明 潘崚关键词:CIK细胞 过继性细胞免疫治疗 白血病细胞株KG-1中Mxi1基因突变的检测和表达载体的构建 2011年 目的检测白血病细胞株KG-1中Mxil基因SID和bHLHzip区突变情况并构建Mxil基因的野生型和突变型真核表达载体,观察其转染真核细胞后基因表达的情况。方法应用RT-PCR和SSCP分析KG-1细胞株Mxil基因的突变,将Mxil野生型/突变型基因cDNA插入到pDs-red2-N1质粒中,构建pDs-red2-N1/Mxil(野生型/突变型)真核表达载体,采用脂质体方法将质粒转染COS-7细胞,流式细胞仪检测红色荧光蛋白表达并计算转染效率。RT-PCR检测转染后Mxil基因的表达。结果 Mxil基因突变位于HelixⅡ区第82编码子的CAT/TAT(His/Tyr)。成功构建pDs-red2-N1/Mxil(野生型/突变型)真核表达载体,经酶切、电泳可以看到在4 700、1845 bp存在两条电泳条带,Mxil基因在COS-7细胞中得到表达,转染后COS-7细胞红色荧光蛋白表达的阳性细胞为18.07%,表达高峰出现在转染后第3天,并可持续表达6d左右。结论 Mxil基因的高度保守区域bHLHzip存在基因突变,Mxil突变基因的真核表达载体构建成功,并成功转染真核细胞COS-7。 郭晓玲 张改玲 尹风雷 牛志云 张学军 董作仁 朱平 潘崚关键词:基因转染 白血病细胞株KG1中Mxi1突变基因真核表达载体的构建 2012年 目的构建Max结合蛋白1(Max interacting protein 1,Mxi1)基因的野生型和突变型真核表达载体,观察表达载体转染真核细胞后蛋白表达的情况。方法将正常人和白血病细胞株KG1细胞的Mxi1野生型/突变型基因cDNA插入到红色荧光蛋白质粒pDs-red2-N1中,构建为pDs-red2-N1/Mxi1(野生型/突变型)真核表达载体;采用脂质体方法将质粒转染Cos-7细胞;荧光显微镜观察Cos-7细胞红色荧光蛋白表达情况。流式细胞仪方法检测红色荧光蛋白中Mix1的基因表达率,以此计算转染效率。转染后48h提取细胞总RNA,进行RT-PCR检测Mxi1基因表达。结果成功构建了一种pDs-red2-N1/Mxi1(野生型/突变型)真核表达载体。荧光显微镜下观察转染后Cos-7细胞可见红色荧光蛋白的表达;流式细胞仪检测野生型和突变型的转染效率以转染后前3d较高,并可持续至第6d。质粒转染Cos-7细胞后均出现阳性Mxi1基因转录产物。RT-PCR方法可以检测到Mxi1基因在Cos-7细胞中的表达。结论 Mxi1的真核表达载体构建成功,通过脂质体的方法转染真核细胞中并在其胞浆中表达。 郭晓玲 牛志云 张改玲 尹风雷 杨琳 任金海 董作仁 朱平 潘崚骨髓增殖性疾病合并假性高血钾4例 被引量:8 2010年 骨髓增殖性疾病(MPD)主要包括真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨髓纤维化(IMF)等疾病,以一系或多系血细胞的过度增多为临床表现 。近来国内外的病例报道显示,在这些患者中会出现假性高血钾的情况。本文报道4例出现假性高血钾的临床病例,分析患者发生假性高血钾的情况,并结合文献讨论假性高血钾发生的原因。 郭晓玲 王慈 张改玲 牛志云 蔡圣鑫 潘崚关键词:骨髓增殖性疾病 原发性血小板增多症 真性红细胞增多症 原发性骨髓纤维化 临床病例 为过继性免疫治疗培养淋巴细胞时的细胞因子作用和基因表达特征 被引量:1 2011年 在过继免疫性细胞培养时需要加入不同的细胞因子。本研究旨在比较不同细胞因子及EBV抗原肽联合细胞因子刺激淋巴细胞后淋巴细胞分化方向和相关的基因表达变化特征。分别用不同细胞因子及EBV抗原肽联合细胞因子刺激淋巴细胞,在培养的当天和第1、3、7、10天,用流式细胞术检测各组细胞中CD3+(总T细胞)、CD3+CD4+(辅助T细胞)、CD3+CD8+(细胞毒性T细胞)、CD3+CD8+CD45RO+(记忆型T细胞)、CD3+CD8+CD45RA+(初始型T细胞)、CD3+CD30+(Th2辅助细胞)、CD19+(B细胞)、CD56+(NK细胞)、CD4+CD25+(初始调节T细胞)、CD4+CD25+FOXP3+(精确调节T细胞)在培养前后总细胞中的百分比变化;用RT-PCR技术检测管家基因mad1、pten和辅助T细胞转录调控基因t-bet(Th1)、gata3(Th2)、细胞因子ifn-γ(Th1)、il-4(Th2)基因表达量。结果表明:EBV多肽组CTL细胞成为优势细胞,临床治疗有确切疗效;比较加入EBV多肽组和不同细胞因子培养组结果显示,EBV抗原肽可以更有效刺激CTL生成,ifn-γ基因表达量明显增加;辅助淋巴细胞分化相关的基因t-bet、gata3都有明显的升高;管家基因mad1、pten基因变化不大;在不同细胞因子培养环境下加入抗原肽可以更有效刺激CTL生成。结论:用EBV多肽联合细胞因子共同培养淋巴细胞可以获得特异性CTL细胞,不同细胞因子对细胞分化发挥不同作用。 张改玲 陶秀艳 刘兆丽 刘岩 王筝 刘红星 蔡鹏 卜定方 郭晓玲 朱平关键词:细胞因子 T-BET GATA3 PTEN 淋巴细胞 过继性免疫治疗