崔芳岩
- 作品数：9 被引量：26H指数：4
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 体外转录生成短双链干扰RNA的方法
- 一种体外转录生成短双链干扰RNA方法，用于生物、基因工程技术领域。首先设计合成T7启动子18bp及含目标基因20bp和T7启动子反向互补序列18bpDNA寡核苷酸链，两者退火后形成双链DNA，合成T7启动子18bp及含目...
- 潘玉春孟和陈学辉崔芳岩王启山
- 文献传递
- 鸡传染性支气管炎病毒澳大利亚T株部分基因序列的克隆与分析被引量：6
- 2005年
- 澳大利亚T株(IBVT-)是鸡肾型传染性支气管炎病毒(IBV)主要代表毒株之一。目前,在相关生物数据库中IBV-基因序列极少。实验通过对GenBank中已有IBV基因序列比较,在IBV编码蛋白S、N、M和RdRp基因的高度同源区设计了四对引物,并通过反转录聚合酶链式反应R(TP-CR)获得特异性扩增产物。克隆测序结果证明扩增产物确为IBV相应基因片段。所获序列同IBV其它类型相关基因序列比较结果显示,编码蛋白S、N、M和RdRp基因的同源性分别为80.51%～87.22%%,85.83%～91.25%,89.63%～91.01%和85.97%～92.37%。实验丰富了生物数据库中IBVT-基因序列。所设计的引物表现很好的扩增效率和特异性,对于IBV其它毒株的检测和鉴定有一定的借鉴作用。
- 崔芳岩孟和陈学辉潘玉春
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR检测
- 短双链RNA对鸡胚盘细胞外源绿荧光蛋白基因表达的影响被引量：11
- 2004年
- RNA干扰 (RNAinterference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法 ,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具。为了了解RNA干扰在禽类中的作用情况 ,实验将体外转录合成的绿荧光蛋白短双链干扰RNA (siGFP)和 3 磷酸甘油醛脱氢酶短双链干扰RNA (siGAPDH )分别同绿荧光蛋白(Greenfluorescentprotein ,GFP)表达载体 (pEGFP C1Vector)用脂质体转染试剂LipofectamineTM2 0 0 0共转染鸡胚盘细胞 ,并于转染后 36h在荧光显微镜下观察转染和干扰效果。对细胞绿荧光蛋白表达率的方差分析结果显示 ,不同处理组间差异达极显著水准 ,其中GFP组和GFP +siGAPDH组均同GFP +siGFP组差异极显著 ,GFP组同GFP +siGAPDH组差异不显著。实验结果说明 ,siGFP能特异、有效地敲低细胞绿荧光蛋白的表达。同线虫、真菌、拟南芥、水螅、锥虫、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等其它生物体一样 ,鸡胚盘细胞中也存在短双链干扰RNA (siRNA)
- 孟和陈学辉王起山崔芳岩潘玉春
- 关键词：RNA干扰RNAI
- 小干扰RNA抑制neuro-2a细胞内源β位淀粉样前体蛋白裂解酶1基因的表达被引量：1
- 2007年
- 目的:分析小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)抑制neuro-2a细胞内源β位淀粉样前体蛋白裂解酶1基因(Beta-site APP cleaving enzyme protein,BACE1)的表达情况。方法:实验于2004-12/2006-06在中山大学中山医学院和上海交通大学农业与生物学院完成。①用脂质体将EGFP基因表达载体pEGFP-C1 Vector和体外转录合成的针对EGFP基因的小干扰RNA(siEGFP)分别或同时转染neuro-2a细胞,在倒置荧光显微镜下计算EGFP在neuro-2a细胞中的表达率。②将体外转录合成的siBACE1-1,siBACE1-2,siBACE1-3转染neuro-2a细胞,干扰24,48,72h后分别用Real time RT-PCR定量分析siBACE1对内源BACE1基因表达的抑制率和干扰的时效性。结果:①外源EGFP基因转染neuro-2a细胞后,43%neuro-2a细胞高表达EGFP蛋白。通过转染siEGFP则可有效抑制EGFP基因表达。②3个干扰位点的siBACE1对BACE1基因表达有不同的抑制效率,siBACE1-3使BACE1m RNA表达水平下降60%,siBACE1-1为13%,siBACE1-2对BACE1 mRNA无明显的抑制作用。③siBACE1抑制内源BACE1基因的表达与干扰时间相关,siBACE1干扰24h、48h后BACE1 mRNA的表达与正常组无明显差异(P>0.05),但干扰72h后,siBACE1-3和siBACE1-1均使BACE1 mRNA表达量下降。结论:体外转录合成的siBACE1能有效抑制neuro-2a细胞内源BACE1基因表达,其抑制率与BACE1基因的干扰位点和干扰时间相关。
- 张小勤李峰赵艳彭映基潘玉春崔芳岩孟和
- 关键词：BACE1
- siRNA对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)复制的影响被引量：3
- 2008年
- RNA干涉(RNAi)可以通过短双链RNA(siRNA)介导,特异地降解相应的mRNA,从而抑制基因表达,导致转录后水平的基因沉默(PTGS)。本研究利用这种技术,将鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染体外培养的Vero-E6,使其适应Vero-E6,然后用体外转录合成的针对IBV部分基因的siRNA,对其复制进行RNAi。结果显示,针对IBVM蛋白的siRNA能有效地抑制IBV在Vero-E6细胞中的复制。
- 陈学辉孟和崔芳岩连正兴潘玉春
- 关键词：RNA干涉鸡传染性支气管炎病毒
- siRNA对鸡胚成纤维细胞中GAPDH基因表达的抑制作用被引量：4
- 2005年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过短双链RNA(small interference RNA,siRNA)介导的特异性抑制相应基因表达的新技术。作为研究基因功能的有效手段,该技术已在线虫、果蝇、斑马鱼和鼠等动物中进行了应用。本研究利用体外转录合成的短双链干扰RNA(siRNA),针对鸡的管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH),在鸡胚成纤维细胞中对其表达进行干扰。结果显示siGAPDH能有效阻断GAPDH基因在鸡胚成纤维细胞中的表达,而不相关的siRNA则对该基因的表达没有影响,证明在鸡细胞中也存在RNA干扰现象,为利用RNAi技术对鸡的基因功能研究奠定了一定基础。
- 陈学辉孟和潘玉春崔芳岩
- 关键词：RNAI
- siRNA抑制外源绿色荧光蛋白在neuro-2a细胞株中的表达
- 2007年
- 目的:用RNAi技术抑制哺乳动物神经元中外源报告基因的表达,并探讨该过程中RNAi的时间及剂量效应,为利用RNAi技术研究神经元基因功能提供参考。方法:采用神经细胞来源的细胞系neuro-2a小鼠神经瘤细胞为模型,将外源绿色荧光蛋白(GFP)基因转染到neuro-2a细胞内,利用体外转录法合成siRNA,分为3个剂量组对其进行干扰。结果:Neuro-2a细胞可以被有效地转染,而且siRNA在neuro-2a细胞内可以有效发挥干扰作用。这种干扰作用呈现出一定的剂量效应。结论:RNAi技术可以成功用于neuro-2a细胞抑制基因的表达,这种对GFP表达规律及RNAi剂量效应的研究为利用RNAi技术研究神经元基因功能提供了一定的理论参考和依据。
- 张小勤李峰赵艳彭映基潘玉春孟和崔芳岩
- 关键词：RNA干扰绿色荧光蛋白神经元
- 非洲绿猴肾细胞外源绿色荧光蛋白基因表达的RNA干扰被引量：4
- 2004年
- 非洲绿猴肾细胞 (Vero)是多种病毒的适应细胞。本研究将外源的绿色荧光蛋白 (GFP)基因转染到Vero-E6中 ,并利用体外转录合成的绿荧光蛋白短双链干扰RNA(siGFP)对其表达进行干扰。结果显示 :siGFP能有效阻断外源的绿色荧光蛋白基因在Vero -E6细胞中的表达 ,而不相关的siRNA则对绿荧光蛋白基因的表达没有影响。这为利用RNAi技术在Vero -E6细胞中 ,抑制外源基因的表达以及通过RNAi技术进行抗病毒的研究奠定了一定的基础。
- 陈学辉崔芳岩孟和潘玉春
- 关键词：肾细胞基因表达RNA干扰抗病毒转录后基因沉默
- 短双链RNA对IBV基因表达及复制的影响研究
- 崔芳岩
- 关键词：RNA干涉小干涉RNAVERO-E6细胞基因表达
