孙萍
- 作品数：25 被引量：36H指数：3
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- 相关领域：医药卫生文化科学生物学理学更多>>
- 鼠IL-35真核表达载体的构建及在Hepa1-6细胞中的表达
- 2012年
- 目的 构建小鼠IL-35的真核表达载体并使其在小鼠肝癌细胞株Hepa1-6中表达.方法 采用PCR方法从含有小鼠IL-35基因的pET-30a-mIL-35中扩增目的 基因片段,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/V5-HisB中,经菌落PCR、双酶切鉴定及测序正确后,用脂质体转染方法转染到Hepa1-6细胞中,48h后收集细胞,SDS-PAGE和Western Blotting检测目的 蛋白的表达.结果 经双酶切和测序鉴定证实重组表达载体构建成功,转染入Hepa1-6细胞经SDS-PAGE电泳和Western Blotting证明均得到与预期相对分子量大小相符的蛋白条带.结论 成功构建小鼠IL-35真核表达载体并在Hepa1-6细胞中表达,为进一步研究mIL-35的生物学功能提供了条件.
- 朱平鞠吉雨唐媛媛邸大琳王丽娜孙萍苗乃法
- IL-21基因治疗小鼠H22细胞皮下移植肝癌模型的效果评价被引量：2
- 2010年
- 用已构建的mIL-21/pcDNA3.1重组质粒对H22细胞建立的小鼠肝癌模型进行基因治疗,观察IL-21对小鼠体内抗肿瘤免疫应答的影响及对小鼠生存的影响。采用BALB/c小鼠左腋皮下注射腹水型肝癌细胞株H22细胞建立小鼠移植肝癌模型,给荷瘤小鼠瘤体内注射mIL-21/pcDNA3.1进行基因治疗,MTT比色法检测IL-21对荷瘤小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性的影响,观察治疗后荷瘤小鼠生存情况及肿瘤生长情况的改变。病理检测结果显示,成功建立了小鼠移植型肝癌模型,MTT比色法显示基因治疗后小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性显著升高,荷瘤小鼠肿瘤生长速度减慢,生存期显著延长。IL-21基因治疗肝癌荷瘤小鼠可显著提高荷瘤小鼠体内抗肿瘤免疫应答水平,抑制肿瘤生长,延长荷瘤小鼠生存期。
- 王丽娜郑洁鞠吉雨牟东珍孙萍邸大琳苗乃法
- 关键词：IL-21基因治疗H22细胞
- BCSC-1基因异位表达对人小细胞肺癌细胞增殖的抑制效应被引量：3
- 2012年
- 背景与目的:人乳腺癌候选抑制蛋白1(breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1)基因已被证实是一种新型抑癌基因,在多种肿瘤细胞均存在表达缺失的现象。该研究通过将BCSC-1基因转染至人小细胞肺癌细胞株NCI-H446,探讨BCSC-1基因异位表达对NCI-H446细胞增殖的抑制效应。方法:用PCR扩增BCSC-1 cDNA,构建真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1。通过脂质体把pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染入野生型NCI-H446细胞。以转染空质粒pcDNA3.1/v5-HisB的NCI-H446细胞为对照组,野生型NCI-H446细胞为空白对照组。采用流式细胞仪检测细胞周期;MTT法检测细胞增殖;免疫组化确认BCSC-1基因和CD44分子在NCI-H446细胞中的表达。结果:成功构建了真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1,制备了BCSC-1基因异位高表达的NCI-H446稳定细胞株。细胞周期分析显示,异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞大部分阻滞在G0/G1期,明显高于对照组和空白组(P<0.01)。MTT法检测显示,异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞与对照组、空白组相比,生长速度明显减慢(P<0.05)。免疫组化显示异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞CD44表达增高。结论:BCSC-1基因的异位表达对NCI-H446细胞的恶性增殖行为有明显的抑制作用,这种抑制作用可能与细胞周期阻滞和黏附分子CD44表达增高有关。
- 袁芳鞠吉雨唐媛媛邸大琳王丽娜孙萍
- 关键词：NCIH446细胞细胞周期CD44
- mOX40-Fc的真核表达及其对混合淋巴细胞反应的影响被引量：2
- 2008年
- 构建重组pcDNA3.1-mOX40-Fc真核表达载体,在CHO细胞中表达,并初步研究融合蛋白mOX40-Fc对MLR中细胞增殖的影响。克隆编码hIgG1Fc基因片段,与编码小鼠OX40胞外段的基因融合,构建mOX40-Fc融合基因及其分泌型真核表达载体pcDNA3.1-mOX40-Fc;转染CHO细胞构建融合蛋白的稳定真核表达细胞株,用RT-PCR及夹心ELISA检测其表达,纯化后经SDS-PAGE及Western blot法对其进行鉴定,混合淋巴细胞反应(MLR)测定其生物学活性。结果:核苷酸序列测定显示构建的mOX40胞外段和hIgG1Fc段基因序列与GenBank序列一致、阅读框完整;RT-PCR、ELISA和Western blot检测表明转染细胞有分泌型重组蛋白的表达;功能实验提示mOX40-Fc能抑制MLR中的细胞增殖。成功构建mOX40-Fc真核表达载体并获得高效表达,该重组蛋白可在体外通过抑制OX40/OX40L共刺激通路抑制淋巴细胞增殖。
- 刘艳菲冯永堂鞠吉雨林志娟孙萍王丽娜
- 关键词：融合蛋白真核表达混合淋巴细胞反应
- 小鼠IL-35基因毕赤酵母表达载体的构建及表达
- 研究背景:IL-35是重要调节性细胞因子,研究其生物学功能具有重要意义。目的:构建真核酵母表达载体p PIC9K与小鼠IL-35的重组质粒p PIC9K-mIL-35,并在巴斯德毕赤(Pichia pastoris)酵母...
- 唐媛媛邸大琳王丽娜朱平孙萍鞠吉雨
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
- IL-21在肝癌细胞株H22细胞中的表达及其活性被引量：1
- 2010年
- 目的:构建小鼠IL-21(mIL-21)真核表达载体mIL-21-pcDNA3.1,转染肝癌H22细胞,探讨其生物学活性。方法:RT-PCR法扩增mIL-21基因,构建mIL-21真核表达载体mIL-21-pcDNA3.1,并经DNA测序证实。脂质体法介导mIL-21-pcDNA3.1转染H22细胞,RT-PCR和Western boltting鉴定其表达,MTT法检测mIL-21-pcDNA3.1对T细胞增殖和NK细胞杀伤活性的影响。结果:DNA序列分析证实构建的mIL-21-pcDNA3.1正确无误,RT-PCR和Western boltting证实转染的H22细胞中有mIL-21的表达。MTT法显示,转染mIL-21的H22细胞培养上清刺激T细胞增殖的刺激指数(stimulation index,SI)为3.412±0.312,联合ConA的刺激指数为4.673±0.450,均显著高于转染空质粒组的1.465±0.103和未转染组的1.447±0.245,(P<0.01)。转染mIL-21的H22细胞培养上清NK细胞杀伤率为(81.66±4.26)%,显著高于转染空质粒组的(34.74±5.52)%和未转染对照组的(33.61±1.42)%。结论:mIL-21-pcDNA3.1载体在H22细胞中的表达可显著增强T细胞增殖及NK细胞的杀伤功能,为其在抗肝癌治疗中的应用奠定了基础。
- 王丽娜鞠吉雨梁淑娟牟东珍邸大琳孙萍苗乃法
- 关键词：肝肿瘤真核表达
- LBL联合CBL教学法在留学生医学免疫学教学中的实践与探索被引量：6
- 2019年
- 目的:探讨LBL联合CBL教学法在留学生医学免疫学教学中的应用效果。方法:选取留学生随机分为两组,分别采用LBL联合CBL教学法和传统教学法进行授课。通过期末考试成绩分析和问卷调查进行教学效果评价。结果:实验组学生的考试成绩明显优于对照组(P<0.05)。调查问卷结果显示,LBL联合CBL教学法能提高学生学习积极性,获得学生的高度认可。结论:LBL联合CBL教学法能显著提高留学生医学免疫学的教学质量。
- 刘艳菲邸大琳孙萍彭美玉林志娟徐灵芝秦浩鞠吉雨
- 关键词：医学免疫学留学生LBL教学法CBL教学法
- TSLP、OX40、OX40L在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜组织中表达的关系
- 研究背景:胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)是一种新近证实的与过敏性炎症有关的类IL-7细胞因子,在调节Th2型炎症的细胞因子起着重要作用。我们前期的研究发现,过...
- 冯永堂杨京玉徐灵芝刘艳菲孙萍苗乃发鞠吉雨林志娟
- 关键词：TSLPOX40OX40L
- 白血病抑制因子对K562细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨白血病抑制因子(LIF)体外对K562细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法取对数生长期K562细胞接种于96孔板中,随机分为对照组和观察1～3组,分别加入质量浓度为0、5、10、40μg/L的重组人LIF,继续培养61、2、24、48 h;应用MTT法、Hoechst染色法观察各组K562细胞增殖活性、凋亡率,采用免疫组化法检测观察3组和对照组p53蛋白表达情况。结果观察1～3组不同时间细胞增殖活性均显著低于对照组,且观察1组>观察2组>观察3组、6 h>12 h>24 h>48 h(P均<0.05);观察1～3组不同时间细胞凋亡率均显著高于对照组,且观察1组<观察2组<观察3组、6 h<12 h<24 h<48 h(P均<0.05);观察3组各时间点p53蛋白阳性表达率均明显高于对照组,且6 h<12 h<24 h<48 h(P均<0.05)。结论 LIF能以浓度—时间依赖性抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,机制可能为上调p53蛋白表达。
- 陈蕾邸大琳王鲁娟孟洁孙萍王占聚
- 关键词：白血病抑制因子K562细胞细胞凋亡P53蛋白
- mOX40-hIgG1Fc的构建、表达及其生物学活性的初步研究
- 目的:构建mOX40-hIsG1Fc融合蛋白真核表达载体,转染COS-7细胞进行表达获得mOX40-hIgG1Fc融合蛋白,并通过体外实验初步研究其生物学效应,为OX40分子的进一步研究奠定良好的基础。方法:①Trizo...
- 刘艳菲冯永堂牟东珍苗乃法梁淑娟王丽娜邸大琳吴国庆魏兵孙萍
- 关键词：OX40COS-7细胞
- 文献传递
