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娄静: 作品数：15 被引量：72H指数：5; 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>; 发文基金：国家科技重大专项中美新发和再发传染病合作项目国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术更多>>

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荧光标记AFLP用于霍乱弧菌分型的研究: 霍乱易于传播而造成暴发流行，目前已引起七次全球大流行，在我国也引起数次大的流行。传染病迅速地跨地区传播，已成为当前传染病预防控制面临的重要问题，流行病学调查需要结合病原体的实验室分析才能更好地揭示内在的联系。探索多种分子...; 娄静; 关键词：霍乱弧菌分子分型荧光标记; 文献传递

食物中毒鸭沙门菌的生物学特性及分子分型研究被引量：1: 2013年; 目的对一起食物中毒分离的鸭沙门菌进行生物学特性和分子分型研究。方法菌株分离、生化鉴定和血清型确定参照GB/T4789.4-2010方法进行,用VITEK-32全自动微生物鉴定系统检测菌株药物敏感性,鲎试验检测内毒素、PCR检测沙门菌侵袭相关基因invA和invE,用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)方法进行分子分型。结果 11份样品检出8株肠炎沙门菌;其中5株菌内毒素为阳性;所有菌株均携带侵袭相关基因invA和invE;该次食物中毒样品中分离得到的8株鸭沙门菌PFGE图谱完全相同,但有别于其它地区分离的鸭沙门菌。结论 PFGE可有效用于沙门菌食物中毒细菌同源性的分析。本次食物中毒有相同的鸭沙门菌克隆系来源。; 汪永禄沈荣柴王多春陶勇王利王艳刘力彰娄静闫梅英阚飙; 关键词：食物中毒脉冲场凝胶电泳分子分型

脉冲场凝胶电泳和多位点串联重复序列分析应用于中国鼠伤寒沙门菌分型能力的评价被引量：5: 2011年; 目的比较脉冲场凝胶电泳(PFGE)和两种国际多位点串联重复序列分析(MLVA)分型方法用于我国鼠伤寒沙门菌分子分型的能力,并初步确定适用于我国鼠伤寒沙门菌MLVA分型中的VNTR位点。方法根据国际Pu lseNet公布的沙门菌PFGE分型方案、MLVA分型方案(包含7个VNTR位点,简称MLVA_PN)及欧洲食源性疾病监测网公布的鼠伤寒沙门菌MLVA分型方案(包含5个VNTR位点,简称MLVA_EU),对来自我国5个省(直辖市)的175株鼠伤寒沙门菌进行分子分型分析,并结合流行病学资料,评价这三种分型方法对我国分离的鼠伤寒沙门菌的分型能力。结果 175株鼠伤寒沙门菌经XbaⅠ酶切,PFGE后,获得56种带型,其分辨能力(D值)为0.8823。对其中的主优势带型JPXX01.CN0001菌株55株进一步用第二种内切酶BlnⅠ酶切后,获得6种带型。用MLVA_EU分型,获得96种型别,D值为0.9758。应用MLVA_PN分析,获得98种型别,D值为0.9763。两种MLVA分型方法对菌株的分辨能力几乎相同,且分型结果具有较高的一致性。对流行病学调查显示为鼠伤寒沙门菌暴发患者和食物来源的菌株进行PFGE双酶切及MLVA分型,三种分型方法获得一致性结果,均显示这些菌株具有明显的聚集性。结论两种MLVA分型方法的分辨能力均高于PFGE,在确认鼠伤寒沙门菌引起的暴发事件时,采用需时较短,操作更方便的5个VNTR位点的MLVA分型方法可满足菌株聚集性分析。; 张京云聂艳妮陈春霞刁保卫娄静阚飙闫梅英; 关键词：鼠伤寒沙门菌脉冲场凝胶电泳分子分型

2006-2010年中国鼠伤寒沙门菌分子分型分析被引量：14: 2012年; 目的了解近几年我国鼠伤寒沙门菌临床分离株的分子分型特点,为以实验室为基础的食源性暴发的发现提供基线数据。方法根据国际PulseNet公布的沙门菌PFGE分型方案及鼠伤寒沙门菌多位点MLVA分型方法,对2006-2010年分离自我国7个省(直辖市)的294株鼠伤寒沙门菌进行分子分型分析。结果 294株鼠伤寒沙门菌经XbaⅠ酶切,脉冲场凝胶电泳后,获得87种带型,其分辨能力(D值)为0.905 0。对其中的主要优势带型JPXX01.CN0001菌株76株、JPXX01.CN0006菌株40株和JPXX01.CN0073菌株24株进一步用第2种内切酶BlnⅠ酶切后,分别获得10、22和17种带型。应用MLVA分析,获得198种型别,D值为0.992 9。对流行病学调查显示为鼠伤寒沙门菌暴发病人和食物来源的菌株进行PF-GE双酶切及MLVA分型,两种分型方法获得一致性结果,均显示这些菌株具有明显的聚集性。结论两种分子分型结果显示我国鼠伤寒沙门菌临床分离株具有遗传多样性,MLVA分型方法的分辨能力高于PFGE,在确认鼠伤寒沙门菌引起的暴发事件时,采用需时较短,操作方便的MLVA分型方法可满足菌株聚集性分析。; 陈建才樊粉霞王淑京娄静刁保卫阚飙赵英伟闫梅英; 关键词：鼠伤寒沙门菌 PFGE MLVA 分子分型

利用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应方法检测血液中伤寒沙门菌被引量：2: 2012年; 目的建立实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)方法检测伤寒沙门菌。方法针对伤寒沙门菌STY1631基因设计特异性引物,通过优化反应条件,建立检测该靶基因的rRT-PCR方法,利用51个血清型的纯培养伤寒和非伤寒沙门菌菌株、常见非沙门致腹泻病原菌以及发热为主要症状的8种常见病原菌核糖核酸(RNA)评价该方法的特异性及敏感性,同时对伤寒沙门菌全血模拟标本进行敏感性检测。结果利用该方法检测48株伤寒沙门菌均阳性,其余33种非伤寒沙门菌血清型、致腹泻的其他5种肠道致病菌以及发热为主要症状的8种常见非沙门菌也均扩增阴性。在对纯菌总RNA检测中,rRT-PCR的最低检测限为1 pg/反应,即194个拷贝/反应。以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达1×102cfu/ml。结论建立了敏感性高、特异性好的rRT-PCR检测血液中伤寒沙门菌的方法,为伤寒沙门菌感染的快速诊断及不明原因发热症状的病原初步鉴别提供了简便的手段,可用于对伤寒的早期诊断、预防控制及临床治疗。; 樊粉霞娄静陈建才聂艳妮阚飙闫梅英; 关键词：伤寒沙门菌

PulseNet China网络实验室能力考核结果评价与分析被引量：6: 2011年; 目的为促进中国细菌性传染病分子分型实验室监测网络——PulseNet China网络实验室执行技术标准,实现监测技术的统一化、标准化、规模化。方法 PulseNet China对19个具有脉冲场凝胶电泳(PFGE)设备的省(市)疾病预防控制中心相关实验室开展了分子分型技术考核。结果被考核单位中有78.9%的单位通过评价考核,递送的图谱带型经过软件分析得到相似度为100%。结论说明这些实验室PFGE技术条件和技术能力已经达到PulseNet China实验室网络化监测的要求。对PFGE考核谱图存在的问题分析了相应原因,提供了可能的解决方案。; 崔晶花杜小莉崔志刚刁保卫娄静周海健阚飙李伟; 关键词：分子分型实验室网络脉冲场凝胶电泳

三种核酸染料应用于细菌脉冲场凝胶电泳染色的比较研究被引量：2: 2011年; 目的比较Gelred、GoldView及溴化乙锭(EB)三种染料在病原菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)中的染色效果,选择更为安全和灵敏的核酸染料,并形成标准化操作应用于病原菌分子分型监测网络PulseNet China。方法选择霍乱弧菌作为评价菌株,按照病原菌分子分型监测网络(PulseNet)的PFGE标准操作方案进行电泳,采用Gelred、GoldView及EB三种染料分别染色,分析比较实验结果。结果 Gelred染色的胶块清晰度最好,EB次之,均高于GoldView;Gelred染色的图谱,相邻条带边缘清晰,更容易辨别区分。EB和GoldView染色后必须脱色,使用Gelred染色脱色时间较短,亦可以不经过脱色步骤,但脱色后的电泳条带边缘更加锐利。结论 Gelred是一种更安全、更灵敏的核酸染料,可以取代EB应用于PFGE。制定了使用Gelred进行PFGE染胶的标准方案,用于PulseNet China网络的PFGE分析。; 娄静刁保卫李伟崔志刚阚飙; 关键词：PFGE

扩增片段长度多态性分析用于霍乱弧菌分子分型的方法建立和应用评价被引量：3: 2007年; 目的建立霍乱弧菌的基于红外荧光标记引物的扩增片段长度多态性（AFLP）分型方法，评价脉冲场凝胶电泳（PFGE）和AFLP对霍乱弧菌的分型能力。方法选择PFGE带型均不相同的47株霍乱弧菌作为评价菌株，建立AFLP对于霍乱弧菌的分型方法；确定操作程序后选择83株分离自1962—2005年11个省的霍乱弧菌，进行AFLP和PFGE对于霍乱弧菌分型能力的比较。AFLP分型方法采用了红外荧光标记PCR引物，利用LI—COR4300自动测序仪完成电泳、Saga^MX软件对电泳图谱进行编辑。PFGE采用PulseNet提供的标准化程序。结果AFLP用于霍乱弧菌分型时选择性引物携带碱基数为1，最优引物组合为EcoRI—G／MseI—T，AFLP分型实验的重复性达到99．2％。AFLP将83株霍乱弧菌分为52个型别，D值为0．9545；PFGE将此83株菌分为44种带型，D值为0．9251。结论优化固定了AFLP对于霍乱弧菌的分型程序，重复性好；AFLP比PFGE具有更好的分型能力，能够用于分离菌株的分子分型。结合已成为实验室网络监测标准分析方法的PFGE，可对分离株做更细致的分型比较。; 娄静刁保卫王洪霞崔志刚祁国明阚飙; 关键词：霍乱弧菌扩增片段长度多态性脉冲场凝胶电泳分子分型

沙门菌常规检测方法分段控制技术在网络实验室构建中基础作用的评估被引量：14: 2013年; 目的评估沙门菌常规检测方法分段控制技术在网络实验室建设中的基础性作用.方法建立经过关键点技术控制评价的沙门菌检测方法,评估上海市参加世界卫生组织-全球沙门菌监测项目（WHO-GSS）、中美新发和再发传染病项目（GFN）网络实验室的实施,培训云南省玉溪市疾病预防控制中心腹泻标本沙门菌常规检测能力,收集2006-2012年省级GSS-GFN监测点年度沙门菌监测阳性率.结果基于分段控制技术设计的沙门菌分离、鉴定和种属鉴定、血清分群方法,能同时满足网络实验室对伤寒、非伤寒沙门菌检测敏感性需求；上海市网络实验室建设从2006年的5个公共卫生实验室和8个临床实验室发展到2011年的9和22个,伤寒、非伤寒沙门菌临床分离菌株从2006年的196株增加到2011年1442株；2012年云南省玉溪市临床腹泻病例沙门菌阳性率为2.4％；除上海外还有3个省级监测点将亚硒酸盐磺绿增菌液（SBG）作为沙门菌选择性增菌液,以上海市沙门菌监测基线最稳定.结论常规沙门菌检测分段优化的方法是构建区域网络实验室的基础,由此可上升为具有精确表型鉴定和分子分型能力的国家网络实验室.; 周永明陈秀华徐闻金汇明李超群梁未丽王多春阎梅英娄静阚飙冉陆崔志刚王树坤许学斌; 关键词：阳性率网络实验室

全血中伤寒沙门菌RT-LAMP检测方法的建立被引量：7: 2012年; 目的建立反转录-环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)方法特异检测伤寒沙门菌。方法针对伤寒沙门菌fliC-d基因设计6条特异性引物,通过优化反应条件,建立检测该靶基因的RT-LAMP方法,利用48个血清型的纯培养伤寒和非伤寒沙门菌菌株、常见非沙门致腹泻病原菌以及发热为主要症状的8种常见病原菌RNA评价该方法的特异性及敏感性,同时对伤寒沙门菌全血模拟标本进行敏感性检测,并与rRT-PCR方法的敏感性进行比较。结果等温65℃条件下,30～60 min内可完成RT-LAMP检测反应,利用该方法检测44株伤寒沙门菌均阳性,除4种少见的非伤寒沙门菌血清型扩增阳性外,其余30种非伤寒沙门菌血清型、致腹泻的其他5种肠道致病菌以及发热为主要症状的8种常见非沙门菌也均扩增阴性。在对纯菌总RNA检测中,RT-LAMP的最低检测限为0.5 pg/反应,即97个拷贝/反应。在以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达1 cfu/ml,比rRT-PCR检测低限高100倍。结论建立了敏感性高、特异性好的RT-LAMP检测血液中伤寒沙门菌的方法,为伤寒沙门菌感染的快速诊断及不明原因发热症状的病原初步鉴别提供了简便的手段,可用于对伤寒的早期诊断、预防控制及临床治疗。; 樊粉霞王淑京娄静陈建才聂艳妮阚飙闫梅英; 关键词：伤寒沙门菌伤寒

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