吴淑华
- 作品数：15 被引量：51H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人乳头瘤病毒6b型H增强子样序列在大肠杆菌中增强基因转录和β-干扰素表达被引量：2
- 1998年
- 将人乳头瘤病毒６ｂ型（ＨＰＶ６ｂ）基因组上游调控区（ＵＲＲ）５４０ｂｐ的Ｓａｕ３Ａ－ＮａｒＩ片段（Ｈ序列），正反向插入β－干扰素表达载体Ｔｒｐ启动子上游，使β－ＩＦＮ表达明显增强，可使基因表达水平提高３．６倍（正向）和２．１倍（反向）。Ｈ序列正反向插入增强子检测载体不仅使β－半乳糖苷酶表达活性增加５－１０倍，还能使半乳糖苷酶ｍＲＮＡ量明显增高，证明Ｈ序列对被调控基因的增强作用是发生在转录水平。
- 李同据吴淑华韩峰薛水星王金涛刘哲伟杨佩英侯云德
- 关键词：干扰素基因转录人乳头瘤病毒
- 原核增强子样序列的研究被引量：7
- 1990年
- 本文采用启动子检测载体和增强子检测载体发现来自大肠杆菌JM103 DNA的一个1.0kb左右的片段能在痘苗病毒启动子上游增强细菌CAT和β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达,这种增强效应无明显的方向性,一般可使基因表达水平提高3—6倍,此原核增强子样序列同时也具有启动子功能。此外还测定了增强片段的部分DNA序列。
- 潘卫吴淑华金奇宇文镐刘哲伟金冬雁杜平侯云德
- 关键词：增强子
- 表达流行性感冒病毒HA基因非复制型重组腺病毒的构建及免疫效果的研究被引量：8
- 2005年
- 通过RT PCR扩增流行性感冒(流感)病毒HA基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack CMV,该重组质粒与腺病毒DNA共转化E.coliBJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒。PCR证实HA基因已整合至腺病毒基因组中,Westernblot结果检测到重组病毒感染293细胞中HA的表达。重组病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠,结果2次免疫后滴鼻组和灌胃组均产生明显的免疫应答,血清IgG抗体滴度分别为1∶10000和1∶1000。除血清IgG外,还在肺灌洗液中检测到分泌型IgA。滴鼻组的免疫效果强于灌胃组。经小剂量攻毒实验显示,重组腺病毒保护率为100%。该文成功构建了表达流感病毒HA基因的非复制型重组腺病毒,重组病毒免疫小鼠可产生较好的免疫效果。
- 赵小东韩峰应革王璇王艳吴淑华
- 关键词：流行性感冒病毒血凝素重组腺病毒HA基因
- 重组巴氏毕赤酵母高密度发酵表达人乳铁蛋白的研究被引量：4
- 2004年
- 目的 在保持生物学活性的前提下 ,实现人乳铁蛋白基因在巴氏毕赤酵母中的高密度发酵表达。方法 从人外周血中分离中性粒细胞 ,提取总RNA ,RT PCR方法获得人乳铁蛋白前体全长cDNA序列 ,适当改造后克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPIC 3 5K上并转化酵母宿主KM71,双层滤膜法筛选高表达株进行补料分批发酵 ,对发酵产物的理化及生物学活性进行初步检测。结果 筛选到一株人乳铁蛋白表达量较高的重组巴氏毕赤酵母p3 5 k 7并对其进行了补料分批发酵。整个发酵历时约 9d ,菌浓吸光度A6 0 0 值最高达到 2 6 0以上 ,重组人乳铁蛋白最高表达量为 115mg L ,是摇瓶培养条件下的 7 6 7倍。结论 成功实现了人乳铁蛋白基因在巴氏毕赤酵母中的高密度发酵表达 ,并对发酵参数的优化进行了初步探索。
- 应革吴淑华王静赵小东陈建明张晓光侯云德
- 关键词：高密度发酵人乳铁蛋白基因表达发酵参数
- 胸腺肽β4基因的克隆、表达及活性检测被引量：1
- 2008年
- 【目的】在大肠杆菌中克隆和表达胸腺肽β4(thymosinβ4,Tβ4)基因,并进行分离纯化及免疫活性测定。【方法】将基因序列拆分成10个互补的小片段,互为模板,采用PCR两步法扩增得到Tβ4基因。将Tβ4基因片段克隆至pTXB1载体的NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,将重组质粒转化至E.coliBL21 codon plus,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达、几丁质(Chitin beads)亲和层析柱纯化Tβ4。然后用MTT法测定Tβ4的免疫活性。【结果】经测序表明获得了序列正确的人胸腺肽β4基因,构建重组质粒pTXB1-Tβ4,经SDS-PAGE电泳分析表明,重组质粒pTXB1-Tβ4在E.coliBL21 codon plus中高效表达,表达量为30%。将表达产物用几丁质亲和层析柱纯化,获得较纯的Tβ4。MTT检测表明,Tβ4有促进淋巴细胞增殖的活性,最适刺激质量浓度为1.6μg/mL。【结论】获得高效表达的、高纯度的、有生物活性的重组Tβ4,它可促进淋巴细胞的分化、增殖,具有免疫活性,最适刺激质量浓度为1.6μg/mL。
- 赵晓民张晓光吴淑华童德文
- 关键词：基因表达MTT活性检测
- 流感病毒NA—C3d融合基因在非复制型重组腺病毒中的表达及其免疫效果的研究
- 2013年
- 目的构建表达融合基因NA—C3d的非复制型重组腺病毒并研究其免疫效果。方法将NA-C3d融合基因克隆到穿梭载体pAdTrack—CMV，与腺病毒DNA共转化E.coliBJ5183，经同源重组获得重组腺病毒DNA，将其转染293细胞获得重组腺病毒并检测其免疫效果。结果NA-C3d经PCR证实整合至腺病毒基因组中；重组病毒感染293细胞中经WsternBot检测到融合蛋白；重组病毒经滴鼻途径免疫小鼠，2次免疫后产生明显的免疫应答，血清IgG抗体滴度分别为1：1000和1：100000；经小剂量攻毒实验显示重组腺病毒保护率为100％。结论成功构建表达NA—C3d的非复制型重组腺病毒，该病毒可诱导较好的免疫效果。
- 韩峰王璇王艳赵小东吴淑华
- 关键词：流感病毒A型神经氨酸酶佐剂腺病毒科
- 痘苗病毒增强子样序列的筛选及应用研究被引量：2
- 2007年
- 目的从痘苗病毒基因组中筛选原核增强子样序列,构建携带原核增强子样序列的表达载体,探讨其对干扰素基因表达的影响。方法采用氯霉素乙酰转移酶基因(cat)作为报告基因,从痘苗病毒基因组中筛选具有原核增强子样活性的序列,构建携带增强子样序列VV1的表达载体,表达干扰素基因和检测干扰素活性。结果从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选出18个在大肠埃希菌中具有增强活性的序列,从中筛选到两个原核增强子样序列VV1和VV16,VV1正反向分别可使lacZ基因活性提高10.9倍和3.8倍,VV16正反向分别可使lacZ基因活性提高9.0倍和4.1倍;证实它们的增强活性体现在转录水平;用痘苗病毒增强子样序列VV1构建的表达载体,其表达的IFN-α2b型干扰素比原表达载体活性高2.6倍。结论从痘苗病毒天坛株DNA基因组中筛选到2个原核增强子样序列-携带有痘苗病毒增强子样序列的表达载体可提高干扰素基因的表达水平。
- 韩峰秘晓林曹茹王艳吴淑华
- 关键词：痘苗病毒原核增强子样序列
- 含巨细胞病毒早期启动子的EPO逆转录病毒表达载体的构建被引量：4
- 1997年
- 本文构建了含巨细胞病毒（CMV）早期启动子的红细胞生成素（EPO）逆转录病毒表达我体。困逆转录病毒表达我体pN2A需用外源启动子才能表达国的基因，故把CMV早期启动手及包括除信号肽中第2、3和4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列的EPO次全基因片段一起克隆到pN2A载体neo基因下游的多聚接头上的单一酶切位点BglⅡ上，构建成重组质粒pN2ACMVEPO。
- 陈广南梁希若吴淑华
- 关键词：逆转录病毒载体基因重组
- 采用定位基因缺失突变技术在大肠杆菌中高效表达肿瘤坏死因子被引量：8
- 1990年
- 肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子,在克隆的全长cDNA的5'端有480bP的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺尖突变方法,删除了这一非编码区及信号肽序列,并在成熟TNF分子第一个氨基酸密码前插入一个翻译起始密码(ATG),形成一个限制酶NcoI的识别位点CCATGG。然后取出含有成熟TNF全基因的NcoI-Pst Ⅰ片段,插入到原核表达载体pBV220中,获得了肿瘤坏死因子的高效表达菌株。活性检测结果表明,肿瘤坏死因子的表达量可达3.42×10~8u/L菌液。SDS-PAGE电泳凝胶扫描结果显示,肿瘤坏死因子在大肠杆菌的表达量可占细菌可溶性总蛋白量的22.8%。抗肿瘤坏死因子单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒性。SD和ATG间插入31个核苷酸可使TNF表达量降低约10倍。
- 张德震吴淑华张智清金奇赵新华赵小侠苏成芝侯云德
- 关键词：肿瘤坏死因子
- 表达流感病毒神经氨酸酶基因的重组腺病毒的构建被引量：8
- 2003年
- 通过RT-PCR方法扩增流感病毒神经氨酸酶基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pTrackCMV,此重组质粒与腺病毒DNA共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒。经PCR证实目的基因已整合至腺病毒基因组中,western blot检测到神经氨酸酶的表达。重组病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠,结果表明2次免疫后滴鼻组和灌胃组均产生明显的免疫应答反应,滴鼻组的免疫效果优于灌胃组。
- 赵小东韩峰王艳杨贵宾应革林勇平王璇吴淑华
- 关键词：流感病毒神经氨酸酶基因重组腺病毒疫苗
