- PTEN重组腺病毒载体的构建及其在气道平滑肌细胞的表达被引量：1
- 2009年
- 目的应用pAdxsi载体系统构建携带PTEN基因的腺病毒载体。方法将PTENcDNA自载体pcDNA3-PTEN中切出,克隆至穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdxsi在化学感受态细胞DH5α菌株内同源重组,经Pac-Ⅰ线性化后,重组子通过脂质体2000介导转染HEK293细胞,产生有感染能力的腺病毒,并测定其滴度,通过荧光显微镜能观察HEK293细胞内绿色荧光的表达;PCR检测腺病毒载体PTEN mRNA的表达,Western blotting检测PTEN蛋白在气道平滑肌细胞的表达。结果感染腺病毒载体的HEK293细胞表达GFP随着时间逐渐增强,并且出现明显的细胞病变效应,经过3轮扩增后病毒达到合适的滴度,构建的Ad-PTEN腺病毒滴度为2×1010pfu/ml,PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳证实其表达,Western blotting检测到腺病毒感染的气道平滑肌细胞内PTEN蛋白表达明显增高。结论成功构建了携带野生型PTEN腺病毒载体,为进一步研究PTEN基因应用于哮喘治疗提供了实验基础。
- 钟浩海罗雅玲赖文岩徐健陈丽丽叶涵
- 关键词：PTEN腺病毒载体气道平滑肌细胞哮喘
- IL-22对人气道细胞的作用被引量：5
- 2011年
- 目的探讨IL-22对人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞的生理学作用。方法用实时定量PCR检测气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞哮喘血清刺激前后IL-22R1 mRNA表达的变化。不同浓度的IL-22(10 ng/ml,100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道上皮细胞、气道平滑肌细胞和气道成纤维细胞后,用MTT法检测细胞的增殖,用流式细胞技术(FACS)检测细胞的凋亡和坏死。结果哮喘血清刺激后气道上皮细胞IL-22R1 mRNA表达降至正常对照组的9%,气道平滑肌细胞IL-22R1 mRNA表达升高至正常对照组的345倍,而气道成纤维细胞IL-22R1 mRNA表达无明显变化。高剂量(1 000 ng/ml)的IL-22刺激气道上皮细胞和气道成纤维细胞12、24 h可显著降低细胞增殖(P<0.05,P<0.01)。三种不同浓度的IL-22刺激气道上皮细胞24 h后均导致细胞凋亡显著下降(P<0.05),低浓度的IL-22(10 ng/ml)导致细胞坏死增加(P<0.01)。不同浓度的IL-22刺激气道平滑肌细胞后,细胞凋亡和坏死无显著性变化。中、高浓度IL-22(100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道成纤维细胞后,细胞坏死率显著下降(P<0.05)。结论 IL-22在支气管哮喘中对气道上皮的作用具有双重性,并与支气管哮喘的病程相关;而对气道平滑肌细胞的作用则可能与浓度及病程相关。支气管哮喘后续阶段,IL-22对气道成纤维细胞作用轻微。
- 张旃蓝海兵周丽丽赖文岩徐建黎振兴任敦强叶涵钟浩海罗雅玲
- 关键词：白细胞介素-22气道上皮细胞气道平滑肌细胞
- ADAM33基因单核苷酸多态性与成人哮喘病情分级的关系被引量：6
- 2009年
- 目的探讨ADAM33基因他、S2位点单核苷酸多态性对成人哮喘的遗传易感性与病情严重程度的相关性。方法选取他、S2位点，对186名哮喘患者（病例组）和150名正常者（对照组）采用直接测序方法进行研究。结果病例组与对照组，T2、S2位点的基因型构成比较差异有统计学意义（T2：Χ^2=4．97，P=0．026；S2：Χ^2=7．729，P=0．021）。两位点均能增加哮喘发生的相对危险度（T2：P=0．027；S2：P=0．024），但在成人哮喘的病情严重程度上基因型构成差异比较无统计学意义（T2：Χ^2=-0．13，P=0．897；S2：Χ^2=0．549，P=0．760）。结论ADAM33基因，T2、S2位点单核苷酸多态性与成人哮喘易感性相关，增加哮喘危险度，但与成人哮喘病情严重程度无显著相关性。
- 叶涵罗雅玲赖文岩
- 关键词：ADAM33成人哮喘单核苷酸基因多态性
- PTEN基因重组腺病毒对人气道平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制
- 2009年
- 目的观察携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)体外转染人气道平滑肌细胞(HASMC)后的表达,研究其对HASMC增殖的影响,并对其作用机制作初步的探讨。方法利用pAdxsi载体系统构建携带PTEN基因的腺病毒载体,体外转染HASMC,荧光显微镜观察Ad-PTEN的转染效率。RT-PCR及Western blotting检测PTEN在HASMC中的表达。采用MTS/PMS法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期分布。Western blotting检测Akt及p-Akt的表达,RT-PCR检测P21mRNA的表达。结果外源性野生型PTEN基因经腺病毒介导成功转入HASMC,当感染复数MOI为100时,体外转染效率高达98%以上。Ad-PTEN感染HASMC后,能有效地引起细胞内过度表达PTEN。上调PTEN表达能显著提高G0/G1期细胞的比例,抑制细胞的增殖。上调PTEN表达能显著降低p-Akt及提高P21的表达水平。结论成功构建了过度表达PTEN的原代培养HASMC模型,该模型能有效地引起细胞内过度表达PTEN。上调PTEN表达能有效抑制HASMC的增殖,可能是通过对PI3K/AKt信号通路的抑制及上调P21的表达而起作用的。
- 陈丽丽罗雅玲赖文岩徐健钟浩海张达成叶涵
- 关键词：气道平滑肌细胞PTENAKT
- 不同刺激因子对人气道平滑肌细胞白细胞介素-22R1表达的影响
- 2011年
- 目的探讨哮喘血清、地塞米松、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)、转化生长因子-β(TGF-β)等不同刺激因子对人气道平滑肌细胞白细胞介素-22R1(IL-22R1)mRNA及蛋白表达的影响。方法用免疫荧光PCR检测不同因素刺激下人气道平滑肌细胞IL-22R1mRNA的表达,用Westernblot检测人不同因素刺激下的人气道平滑肌细胞IL-22R1蛋白的表达,比较不同组别之间的差异。结果哮喘血清刺激下的人气道平滑肌细胞IL-22R1mRNA升至对照组345倍,而蛋白表达明显增强(P<0.01);加用地塞米松后IL-22R1mRNA降至对照组10倍,蛋白表达较仅用哮喘血清刺激明显减弱(P<0.01)。IL-4、IFN-γ、TGF-β刺激后人气道平滑肌细胞IL-22R1mRNA及蛋白表达均显著性增加。结论 IL-22R1表达的改变可能参与支气管哮喘的病程,影响人气道平滑肌细胞IL-22R1受体的表达可能是地塞米松发挥其在支气管哮喘病程中作用的机制之一。IFN-γ、IL-4、TGF-β对气道平滑肌细胞IL-22R1的作用可能是其对支气管哮喘疾病产生影响的机制之一。
- 张旃罗雅玲周丽丽赖文岩徐建黎振兴任敦强叶涵钟浩海
- 关键词：人气道平滑肌细胞白细胞介素-4干扰素Γ转化生长因子-Β
- ADAM33基因T2、S2位点单核苷酸多态性与哮喘的相关性研究
- 研究背景及目的:
支气管哮喘（哮喘）是一种复杂的多基因疾病，具有明显的遗传倾向，呈家族聚集性，它的发生、发展由患者遗传易感性和环境暴露相互作用所决定。目前国内外对哮喘已经进行了大量的研究，越来越多的研究者致力于...
- 叶涵
- 关键词：支气管哮喘ADAM33基因单核苷酸基因多态性
- 文献传递
- IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达及其受体IL-22R1在人气道细胞中的表达被引量：4
- 2010年
- 目的检测IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达,检测IL-22R1在人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞中的表达,寻找IL-22作用的靶细胞。方法应用ELISA法检测36例支气管哮喘患者及20例正常对照者血清IL-22及IL-17的表达,同时检测36例患者肺通气功能,根据1秒率(FEV1/FVC)及FEV1占预计值的百分比将支气管哮喘患者分为支气管激发试验阳性组(17例)和支气管舒张试验阳性组(19例)。应用实时定量PCR检测人气道平滑肌细胞、人肺成纤维细胞、人气道上皮细胞IL-22R1 mRNA的表达,用免疫荧光以及蛋白质印迹法检测IL-22R1蛋白在上述3种细胞中的表达。结果支气管哮喘患者血清IL-22及IL-17水平与正常对照组相比差异无统计学意义,但支气管舒张试验阳性组患者血清IL-22和IL-17水平高于支气管激发试验阳性组(P<0.05)。IL-22R1mRNA及蛋白在上述3种细胞均有表达。结论 IL-22可能涉及支气管哮喘的发生发展过程,气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞、人气道上皮细胞可能均是IL-22发挥作用的靶细胞。
- 张旃罗雅玲周丽丽赖文岩徐建黎振兴任敦强叶涵钟浩海
- 关键词：IL-22气道上皮细胞气道平滑肌细胞肺成纤维细胞
