史丹丹
- 作品数：13 被引量：12H指数：2
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- 不同形貌羟基磷灰石微粒对体外RAW264.7细胞凋亡的影响被引量：1
- 2015年
- 目的 探讨不同形貌羟基磷灰石（HA）微粒对体外RAW264.7细胞凋亡的影响. 方法 采用水热合成及pH调节的方法获取微棒与微球HA微粒.实验分为3组：空白对照组、微棒HA组和微球HA组.将微棒HA与微球HA分别与RAW264.7细胞共培养24 h后,应用细胞乳酸脱氢酶分泌量检测HA微粒对细胞毒性的影响,茜素红染色检测细胞-材料的相互关系,Hoechst凋亡染色及Western blot分析HA微粒对细胞凋亡的影响.结果 共培养24 h,除微棒HA微粒浓度为200 μg/mL时对RAW264.7细胞活性有轻微影响外,在其他浓度下微棒HA与微球HA均具有良好的生物相容性.微棒HA组茜素红染色强度（20.28 ±2.23）显著高于微球HA组（11.72±0.82）,差异有统计学意义（P＜0.05）.微棒HA组与微球HA组的阳性凋亡细胞荧光强度（0.59±0.08、0.55 ±0.03）高于空白对照组（0.46 ±0.07）,微棒HA组的阳性凋亡细胞荧光强度义高于微球HA组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.微棒HA组Bcl-2蛋白表达（0.05 ±0.01）显著低于空白对照组（0.25±0.05）与微球HA组（0.21 ±0.04）,差异均有统计学意义（P＜0.05）.微棒HA组与微球HA组Caspase-3蛋白表达（0.32 ±0.04、0.27 ±0.06）较空白对照组（0.13±0.03）上调,差异均有统计学意义（P＜0.05）. 结论 相对于微球HA微粒,微棒HA微粒与RAW264.7细胞发生了更为密切的接触或内吞,从而诱发了更高程度的细胞损伤,表现为较高的细胞凋亡水平.
- 曾慧君术蓉刘幸卉史丹丹曹标欧阳钧廖华
- 关键词：羟基磷灰石类微粒体细胞凋亡
- Notexin对小鼠体内CD8＋T淋巴细胞活性的干扰作用被引量：1
- 2014年
- 目的探讨肌肉注射Notexin是否影响C57BL/6小鼠骨骼肌引流淋巴结内的外源性CD8+T细胞(OT-I细胞)的活性和增殖。方法分别采用Notexin注射或机械挤压法制备B6小鼠的胫骨前肌(TA)急性肌损伤模型,并获得性转移(adoptive transfer,i.v.)OVA特异的OT-I细胞(CFSE标记),随后肌注可溶性OVA蛋白。收集损伤侧TA引流淋巴结(腘、腹股沟淋巴结),流式分析OT-I细胞的增殖程度。OVA静脉内注射免疫B6鼠,收集激活的脾脏树突状细胞(cDCs),与CFSE标记的OT-I细胞体外联合培养,并添加不同稀释度的Notexin,流式检测OT-I细胞的活性和增殖。结果 CFSE的荧光递减结果证实,机械挤压损伤鼠TA引流淋巴结内OT-I细胞迅速活化增殖,但Notexin诱发的肌损伤小鼠引流淋巴结内OT-I细胞在4 d时无增殖反应,7 d的增殖率与非注射组无显著差异。与活化的cDCs细胞共培养的OT-I细胞活性良好,增殖显著,但即使添加高度稀释(1:1000)的Notexin也会严重干扰OT-I细胞的活性和增殖。结论肌内注射Notexin注射将干扰CD8+T细胞的活性,这表明蛇毒血清诱导的骨骼肌损伤模型不适用于肌损伤诱发的T细胞功能改变的相关研究。
- 马平术蓉刘幸卉史丹丹曾慧君曹标廖华
- 关键词：肌损伤
- 钙调蛋白对骨骼肌炎症的干扰效应被引量：4
- 2016年
- 目的探讨钙调蛋白(Calmodulin,CaM)对急性骨骼肌炎症反应的影响。方法心毒素(Cardiotoxin,CTX)肌内注射,诱导C57BL/6小鼠胫骨前肌(tibialis anterior,TA)急性损伤。肌损伤小鼠腹腔注射钙调蛋白抑制剂R24571或激动剂CALP1。分别检测TA肌组织自身抗原和TLRs表达以及单核/巨噬细胞的肌内浸润程度。结果 CTX注射导致急性肌损伤,TA肌内出现大量的炎性渗出,并伴随肌纤维坏死。损伤肌组织内CaM、自身抗原(Mi-2,HRS和Ku70)以及TLR3表达上调。较之CTX损伤组,CALP1处理导致损伤TA肌内单核/巨噬细胞数量增多,肌内自身抗原和TLR3 mRNA和蛋白水平上调,R24571则减少肌内炎性浸润并下调上述炎性介质。结论 CaM信号参与介导急性骨骼肌炎症反应。
- 史丹丹曹永英曹标刘幸卉术蓉谷瑞彩肖将尉丁茂超黄涛郭梦霞廖华
- 关键词：钙调蛋白肌损伤炎症自身抗原
- 钙离子/调钙蛋白信号对骨骼肌炎症反应的干扰效应
- ＜正＞钙离子/调钙蛋白信号通路对外周组织和器官免疫与炎症反应有重要作用。而钙离子/调钙蛋白信号是否干扰骨骼肌炎症反应尚未可知。本实验采用雌性C57BL/6小鼠胫骨前肌注射心脏毒素诱导肌肉炎症,之后体内用A23187（钙离...
- 史丹丹廖华
- 文献传递
- 力学信号的拮抗剂或激动剂对体外培养的C2C12成肌细胞自身抗原相关因子表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨力学信号的拮抗剂或激动剂对体外培养的C2C12成肌细胞自身抗原表达的影响。方法根据不同的处理方法将C2C12细胞分成对照组、EGTA、A23187、钙调蛋白抑制剂calmidazolium chloride、钙调蛋白(calmodulin)、一氧化氮合成酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)、硝普钠(SNP)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-2抑制剂1、重组肝细胞生长因子(HGF)、抗HGF抗体、肝细胞生长因子受体C-met和抗C-met处理组。用Western blot法检测不同处理条件下NuRD脱乙酰酶复合物可重构成分(Mi-2)、组氨酰-tRNA合成酶(HRS)、DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)和Ku-70蛋白的表达变化。结果与对照组相比,A23187、calmodulin组、SNP、重组HGF组、重组C-met处理后,自身抗原表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),EGTA、calmidazolium chloride、L-NAME、抗HGF兔多克隆抗体、抗C-met兔多克隆抗体处理后,自身抗原蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。MMP-2组的自身抗原蛋白水平表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论细胞外钙离子和钙调蛋白、L-NAME和SNP、HGF、C-met参与介导成肌细胞自身抗原的表达。
- 刘幸卉陈荣曾慧君史丹丹曹标廖华
- 关键词：自身抗原力学信号
- 周期性力学刺激对成肌细胞自身抗原表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨周期性力学刺激对体外培养的成肌细胞自身抗原表达的影响。方法取C2C12细胞根据处理方法不同分为实验组及对照组,其中实验组分为4个亚组,即2、4、6 d周期性拉伸组(2、4、6 d拉伸组)及1 d拉伸组。2、4、6 d拉伸组:细胞置于Flexercell 5000柔性基底加载系统,以0.25 Hz拉伸频率、10%拉伸幅度进行每天2 h应力加载,连续加载2、4、6 d;1 d拉伸组:细胞置于Flexercell 5000柔性基底加载系统,以1 Hz拉伸频率、15%拉伸幅度拉伸1 h,23 h后收集细胞;对照组:细胞常规培养1、2、4、6 d。培养期间于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。采用流式细胞仪检测细胞增殖情况,Western blot检测自身抗原DNA依赖蛋白激酶催化亚基(Ku/the catalytic subunit of DNAdependent protein kinase,DNA-PKcs)、Mi-2(reconfigurable components deacetylase complexes of NuRD)、U1-70(A part of ATP-dependent DNA helicaseⅡ)、组氨酰-tRNA合成酶(histidyl tRNA synthetase,HRS)表达情况。结果经培养后,1 d拉伸组可见脱落细胞,对照组1 d时无细胞脱落;2 d拉伸组细胞增殖较对照组2 d时明显;4 d拉伸组细胞出现分化,6 d拉伸组细胞部分融合,与对照组4、6 d时情况一致。1 d拉伸组细胞经单次拉伸后出现凋亡,相对DNA增殖指数(relative DNA proliferation index,DPI)与对照组1 d时比较,差异无统计学意义(t=0.346,P=0.747)。经周期性拉伸后,2、4 d拉伸组DPI较对照组2、4 d时显著提高(P<0.05),6 d拉伸组与对照组6 d时比较差异无统计学意义(t=1.191,P=0.303)。2 d拉伸组DNA-PKcs、Mi-2、HRS和U1-70蛋白相对表达量均较对照组2 d时明显降低(P<0.05);4 d拉伸组与对照组4 d时比较差异均无统计学意义(P>0.05)。4 d拉伸组各抗原蛋白相对表达量均较2 d拉伸组显著增加(P<0.05),而对照组4 d时均较2 d时显著降低(P<0.05)。结论短期力学刺激可以抑制成肌细胞自身抗原表达,但随时间延长,细胞分化融合以及对力学刺激的�
- 陈荣刘幸卉黄维一曾慧君史丹丹曹标廖华
- 关键词：成肌细胞自身抗原特发性炎性肌病
- 体外炎性环境下小鼠成肌细胞/分化肌管的免疫特性研究被引量：2
- 2016年
- 目的对体外炎性环境下小鼠成肌细胞/分化肌管的免疫学特性进行检测,分析其是否具备抗原呈递功能。方法用IFN-γ刺激小鼠成肌细胞(C_2C_(12))及马血清诱导分化后的肌管,通过免疫荧光染色、q-PCR、Western blot、流式细胞术检测细胞表面H-2k^b、MHC-II、TLR3及相关细胞因子水平的改变。结果 IFN-γ刺激后,免疫荧光染色、q-PCR、Western blot均检测到成肌细胞/分化肌管表面MHC分子表达上调,Western blot检测到TLR3表达上调,q-PCR检测到细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-18、MCP-1及TGF-β表达上调。结论在炎性条件下,成肌细胞/分化肌管具备炎性细胞表征,具备抗原呈递功能。
- 术蓉曹永英史丹丹谷瑞彩肖将尉丁茂超黄涛郭梦霞廖华
- 关键词：肌管IFN-Γ抗原呈递
- 骨骼肌特异表达卵清蛋白(OVA)抗原转基因小鼠构建
- 2017年
- 目的利用PiggyBAC转座酶系统及受精卵注射法,将MCK3E-OVA-pA随机插入小鼠基因组,获得骨骼肌特异表达卵清蛋白(OVA)的转基因小鼠(Muscle-OVA Tg)。方法通过体外转录,获得PiggyBAC mRNA;将PiggyBAC mRNA和含有鸡全长OVA片段、骨骼肌肌酸激酶启动子(MCK)、H-2K^b引导序列、H-2Db跨膜序列的质粒显微注射至C57BL/6J小鼠受精卵中,获得转基因阳性首建鼠。将Muscle-OVA Tg鼠与野生B6小鼠杂交建系。PCR鉴定小鼠基因型;Westernblot检测小鼠各组织中OVA蛋白表达以验证其组织特异性。结果PCR检测表明,Muscle-OVA Tg的肌组织表达OVA mRNA;Western blot进一步证实Muscle-OVA Tg小鼠骨骼肌组织特异的OVA蛋白表达,其他组织/器官,如心、脾、肺、肾组织OVA表达均呈阴性。结论利用PiggyBAC转座酶系统成功构建骨骼肌特异表达鸡OVA抗原的转基因小鼠,为相关的骨骼肌免疫反应研究提供了有价值的动物模型。
- 黄涛丁茂超史丹丹谷瑞彩肖将尉郭梦霞李俊桦廖华
- 关键词：卵清蛋白PIGGYBAC转基因骨骼肌
- Calmodulin/CaMKIV信号对急性肌损伤炎症反应的干预效应
- 钙离子/钙调蛋白(Ca2+/Camodulin，Ca2+/CaM)信号参与外周组织器官的免疫和炎症过程，其中Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶IV(CaMKIV)是细胞内钙信号激活的下游关键分子之一，有助于启动钙信号相关转录...
- 史丹丹
- 关键词：炎症反应
- 文献传递
- PNIPAM温敏水凝胶诱导小鼠骨骼肌慢性炎症被引量：1
- 2016年
- 目的探讨肌内注射PNIPAM温敏水凝胶诱导小鼠骨骼肌慢性炎症的可行性。方法将PNIPAM或其与重组人骨骼肌C蛋白的混合物注入C57BL/6小鼠胫骨前肌(TA),于注射后15、30及60 d分别检测TA肌内单核/巨嗜细胞渗出、肌肉自身抗原表达、MHC-I表达及肌内CD8+T细胞浸润。结果 PNIPAM温敏水凝胶可诱导TA肌内炎症持续达60 d,炎症反应的高峰出现于注射后30 d,随后逐渐减退。PNIPAM水凝胶与C蛋白混合液注射所诱发的肌内炎症较单纯的PNIPAM或C蛋白注射诱发的炎症反应更持久。免疫荧光分析证实,PNIPAM水凝胶注射后可见TA肌内出现CD8+T细胞浸润,部分新生肌纤维表达MHC-I。结论 PNIPAM温敏水凝胶肌内注射可诱导小鼠慢性骨骼肌损伤及炎症反应。
- 术蓉张任飞史丹丹谷瑞彩肖将尉刘幸卉曹标廖华
- 关键词：骨骼肌炎症
